全自動尿中有形成分分析儀檢測胸腹水常規細胞計數與手工法的比較

鄭衛東　陳娟　潘云軍

[摘 要] 目的：探討Sysmex UF-1000i全自動尿中有形成分分析儀檢測胸腹水細胞的可靠性。方法：使用UF-1000i和顯微鏡手工計數兩種方法，分別檢測253例胸腹水患者樣本（125例胸水，128例腹水）中的紅細胞數（RBC）和白細胞數（WBC），進行批內精密度試驗，并對檢測結果進行統計學分析。結果：125例胸水患者樣本兩種檢測方法結果比較，RBC、WBC數值差異均有統計學意義（z=-3.969，P=0.000；z=-2.597，P=0.009）；128例腹水患者樣本兩種檢測方法結果比較，RBC、WBC數值差異也均有統計學意義（z=-2.186，P=0.029；z=-3.780，P=0.000）；批內精密度試驗UF1000i檢測各濃度RBC、WBC的CV值≤2.0%， 手工法的CV值9.8%～21.2%，手工法樣本中RBC或WBC濃度越高，CV值越大。結論：兩種方法檢測胸腹水細胞結果存在差異，UF-1000i檢測胸腹水細胞具有快速、準確、重復性好等優勢。

[關鍵詞] 全自動尿中有形成分分析儀；胸水；腹水；紅細胞數；白細胞數

中圖分類號：R446.1 文獻標識碼：B 文章編號：2095-5200（2015）06-048-03

DOI：10.11876/mimt201506019

胸腹水常規檢驗，是臨床實驗室常見檢測項目，對于鑒別滲出液和漏出液具有重要參考價值。胸腹水細胞計數“金標準”， 至今仍是在顯微鏡下，用改良牛鮑計數板進行細胞計數[1]。但該法存在操作繁瑣、計數誤差大、重復性差、人為影響因素較大等諸多弊端[2]。因此，尋找切實可行替代方法一直是實驗室工作者和各儀器廠家努力方向。本研究用Sysmex UF-1000i全自動尿中有形成分分析儀（以下簡稱UF-1000i）和顯微鏡手工計數法，同時檢測患者胸腹水中紅細胞數（RBC）和白細胞數（WBC），分析UF-1000i檢測胸腹水細胞計數的可靠性。

1 資料與方法

1.1 樣本來源

2013年1～12月125例胸水患者樣本來自本院呼吸內科、腫瘤科、感染性疾病科等，患者年齡20～94歲。128例腹水患者樣本主要來自本院感染性疾病科、消化內科、腫瘤科等，患者年齡24～74歲。患者胸腹水原因診斷不全或待查，但不影響本研究檢測結果統計分析。

1.2 儀器和試劑

Sysmex UF-1000i全自動尿中有形成分分析儀，配套試劑和質量控制品；改良牛鮑計數板；日本OLYMPUS CX-1光學顯微鏡。

1.3 檢測方法

1.3.1 顯微鏡計數法 所有樣本由兩位有豐富經驗檢驗師采用雙盲法，嚴格按照《全國臨床檢驗操作規程》第三版[3]要求操作，每份樣本RBC和WBC均計數兩次，結果取均值。對于血性樣本，視具體情況用0.85%醫用生理鹽水適當稀釋，結果乘以稀釋倍數；對于有凝塊樣本，充分混勻后取沒有凝塊樣本充池計數。所有樣本送檢后均在1h內完成檢測。

1.3.2 UF-1000i儀器法 用原廠質控品UFⅡ CONTROL-L和UFⅡCONTROL-H 進行質控操作，各項指標在控后，充分混勻樣本，手動進樣方式檢測，所有樣本送檢后均在1h內完成檢測。UF-1000i RBC和WBC線性范圍均為：（1～5000個/μL），因此，RBC或WBC任何一項超過5000個/μL樣本，用0.85%醫用生理鹽水適當稀釋，使其結果控制在線性范圍內，結果乘以稀釋倍數。

1.3.3 批內精密度試驗 以UF-1000i計數RBC和WBC為參考依據，依據儀器線性范圍， 隨機選擇高濃度RBC或WBC標本（>5000×106/L），中濃度RBC或WBC標本（150×106/L～5000×106/L，低濃度RBC或WBC標本（<150×106/L）。每份分別使用儀器法和手工鏡檢法連續計數11次，各剔除1個最差結果， 分別統計每組10個結果標準差（s）和變異系數（CV）[4]。

1.4 統計學方法

采用SPSS19.0統計學軟件，用兩配對樣本Wilcoxon符號平均秩檢驗法對數據進行分析，P<0.05為有統計學意義。

2 結果

125例胸水患者樣本兩種檢測方法結果，RBC、WBC差異均有統計學意義（z=-3.969，P=0.000；z= -2.597，P=0.009），結果見表1；128例腹水患者樣本兩種檢測方法結果比較RBC、WBC差異也均有統計學意義（z=-2.186，P=0.029；z=-3.780，P=0.000）。

3 討論

3.1 手工法用于胸腹水細胞計數可靠性評價

胸腹水常規檢驗對于判斷積液性質和病因具有重要意義。全國臨床檢驗操作規程第三版推薦顯微鏡手工計數法。但由于該法存在前文中諸多缺陷，顯然做為“金標準”已經無法滿足循證醫學要求準確、可靠、重復性好等基本原則。筆者參考何銀華等[4]方法，進行批內精密度試驗，結果表明，手工法CV值均顯著高于儀器法，且樣本中RBC或WBC濃度越高，CV值越大。原因與手工法固有缺陷，如充池不均、計數池內細胞過多不易準確計數等有關，因此手工法細胞計數重復性較差。

3.2 血細胞分析儀用于胸腹水細胞計數可靠性評價

目前，醫學檢驗專業本科教材《臨床檢驗基礎第四版》[5]，推薦胸腹水細胞計數首選血液分析儀法，認為該法快速、準確，但血液分析儀RBC和WBC和胸腹水報告單位不一致（血液分析儀為RBC×1012/L，胸腹水為RBC×106/L，相差10萬倍；血液分析儀為WBC×109/L，胸腹水為WBC×106/L，相差1千倍），結果需要換算，容易導致換算錯誤。筆者曾嘗試用Sysmex XE-2100血液分析儀進行胸腹水細胞計數，結果表明：血性標本且沒有任何凝塊樣本可以檢出RBC和WBC，并可對WBC進行分類，但樣本中低濃度或微量RBC、WBC無法檢出，容易堵孔需反復沖洗排堵影響血液標本檢測。Sysmex XE-2100血液分析儀線性范圍：WBC 0.00～44萬個/μL；RBC：0.00～800萬個/μL，其線性范圍遠高于UF-1000i（0-5000個/μL），理論上應很容易檢出胸腹水中RBC和WBC。但實際上多數血液分析儀對樣本、抗凝劑、本底均有較高要求，抗干擾能力差。由于各種病因導致胸腹水成分多樣、復雜，干擾血液分析儀因素眾多，儀器主要針對血液標本特點設計，因此目前并不適宜胸腹水常規細胞計數。隨著技術進步，高端血液分析儀已實現了胸腹水等體液標本自動化檢測[6-7]，其主要針對胸腹水等體液特性，增加了“手工進樣+體液”檢測模式。王晗等[8]用SYSMEX XT-4000i全自動血細胞分析儀檢測胸腹水細胞與手工法比較，認為儀器檢測胸腹水細胞具有準確、快速特點，可以替代大部分手工法檢測。但高端血球分析儀價格昂貴，檢測成本較高，國內也僅在大型三級醫院使用，其在臨床普及尚需相當長時間。

3.3 UF-1000i用于胸腹水細胞計數可靠性評價

Sysmex UF-1000i全自動尿中有形成分分析儀主要用于檢測尿液中RBC、WBC、細菌、上皮細胞、管型等主要指標，已基本在二級和三級醫院普及。其原理為：利用流式細胞術和電阻抗原理用紅色半導體激光束照射經過核酸熒光染色后，在鞘流貫流分析池中形成鞘流樣本，并通過對各粒子產生前向散射光、側向散射光以及側向熒光信號轉換成光電信號進行分析，從而對各個粒子進行識別[9]，全自動尿液有形成分分析儀對紅細胞和白細胞檢測結果較準確[10]， 具有重復性好、線性寬優點[11]。用UF-1000i對胸腹水常規進行細胞計數，國內不少學者已做過有益嘗試，但其結論幾乎均報告UF-1000i與顯微鏡計數法無統計學意義[2，12-14]。本研究125例胸水患者樣本，128例腹水患者樣本中RBC、WBC差異均有統計學意義，從表1、表2中可以看出兩種方法檢測結果中位數、四分位數均存在較大差異；表3批內精密度試驗表明，儀器法重復性明顯優于手工法。顯微鏡手工計數方法中多個步驟均可導致計數結果不精確性和不準確性。因此該“金標準”檢測結果，不能作為否定UF-1000i計數準確性依據。但儀器法存在線性檢測范圍窄、凝塊易堵塞儀器通道等缺陷，必要時可用手工法復檢確認，相互驗證，至少目前儀器法尚未普及前，手工法仍有其存在必要。

尿液中RBC、WBC與胸腹水中RBC、WBC在形態、大小等方面均極為相似，且尿液中結晶干擾RBC[15-16]、小圓上皮細胞干擾WBC[17]等影響檢測結果準確性因素在胸腹水中均不存在。因此，UF-1000i更可對胸腹水常規中RBC和WBC進行精確定量，且RBC和WBC檢測結果為（個/μL）， 無需換算直接報告， 同時WBC準確定量也可以極大提高白細胞染色分類幾率（WBC>150×106/L均需分類），能夠更好地發現胸腹水中有意義細胞，為臨床提供更有診斷價值信息。

綜上所述，用UF-1000i對胸腹水中細胞進行計數，方法簡單、準確、重復性好，雖然亦存在胸腹水中凝塊易堵塞儀器、檢測成本甚至高于收費標準等不利因素，但在目前沒有更好方法情況下，可以替代大部分手工法檢測。

參 考 文 獻

[1] 黃玉霞，曾婷婷，鄧三鷹，等. UF-1000i 尿沉渣分析儀在腦脊液檢查中應用[J]. 四川醫學，2013，34（7）：1079-1082.

[2] 陳衛民，倪士剛，王煒. Sysmex UF-1000i尿沉渣分析儀在漿膜腔積液細胞計數中應用[J]. 海南醫學，2011，22（1）：101-102.

[3] 葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].3 版. 南京：東南大學出版社，2006：315-318.

[4] 何銀華，顏宇飛，蔡崢，等. Sysmex XE-2100全自動血液分析儀計數胸腹水有核細胞評價[J].檢驗醫學，2011，26（4）：228-230.

[5] 熊立帆，劉成玉.臨床檢驗基礎[M]. 4版. 北京：人民衛生出版社，2007：215-221.

[6] De Jonge R， Brouwer R， De Graaf MT，et al.Evaluation of the new body fluid mode on the Sysmex XE-5000 for counting leukocytes and erythrocytes in cerebrospinal fluid and other body fluids [J].Clin Chem Lab Med，2010，48（5）：665-675.

[7] Glasser L， Murphy CA， Machan JT. The clinical reliability of automated cerebrospinal fluid cell counts on the Beckman-Coulter LH750 and Iris iQ200[J]. Am J Clin Pathol，2009，131（1）：58-63.

[8] 王晗，楊寧，苑雯文，等. SYSMEX XT-4000i 全自動血細胞分析儀檢測胸腹水細胞與手工法比較[J].醫療衛生裝備，2013，34（12）：67-70.

[9] 鄧山鷹，謝恒，曾婷婷，等. UF-1000i 尿沉渣分析儀聯合DiaSys 尿沉渣工作站在尿管型檢測中應用[J]. 四川醫學，2013，34（2）：282-283.

[10] 吳風，王麗娜，楊品娜，等. 淺析UF-1000i全自動尿液有形成分分析儀管型報告與鏡檢結果差異[J]. 國際檢驗醫學雜志，2012，33（10）：1253-1255.

[11] 卓蘭云，吳新忠，胡琚，等. 2種尿沉渣分析儀檢測紅、白細胞比較與評價[J]. 國際檢驗醫學雜志，2014，35（2）：220-222.

[12] 徐淑貞， 陳明濤. UF- 1000i 尿沉渣分析儀在胸腹水有核細胞計數中應用[J]. 浙江實用醫學，2011，16（4）：302-303.

[13] 魯玲. UF-1000i全自動尿沉渣分析儀對胸腹水中白細胞及紅細胞檢測價值[J].現代實用醫學，2011，23（4）：418-419.

[14] 劉淑卓，王淑仙， 王斐然. UF-1000i全自動尿沉渣分析儀在胸腹水常規細胞計數中臨床應用[J]. 醫學研究與教育，2013，30（1）：51-53.

[15] 應駿， 郭維， 馬繼榮，等. Sysmex UF-1000i 尿有形成分分析儀及AVE764B 尿沉渣分析儀與手工鏡檢結果比較[J]. 檢驗醫學，2013，28（4）：293-295.

[16] 杭建峰， 孫朝暉， 石玉玲，等. Sysmex UF-1000i全自動尿沉渣分析儀性能分析及臨床應用[J]. 檢驗醫學，2011，26（2）：108-110.