沙丁胺醇及其常用檢測方法

文│孫書剛 李建偉 張富剛 孫書濤 陳國信（河北省滄州市青縣農(nóng)業(yè)局）

沙丁胺醇及其常用檢測方法

文│孫書剛 李建偉 張富剛 孫書濤 陳國信（河北省滄州市青縣農(nóng)業(yè)局）

“瘦肉精”主要包括鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、塞布特羅等，是屬于β類興奮劑的苯乙胺類藥物。其中的沙丁胺醇?xì)w屬于β2類興奮劑。養(yǎng)殖戶喂飼沙丁胺醇后，可達(dá)到豬群生長速度提高、瘦肉率增加、賣相好（豬毛色紅潤光亮等）的目的。飼喂沙丁胺醇的豬只，在屠宰后肉色鮮紅、脂肪層薄，往往是皮貼著瘦肉，瘦肉豐滿，十分迎合大眾消費(fèi)市場。但是，這嚴(yán)重?fù)p害了我國百姓的身體健康，由于誤食瘦肉精而產(chǎn)生不良癥狀的事件層出不窮，例如2005年江西應(yīng)用技術(shù)學(xué)院黃金校區(qū)75名學(xué)生誤食含瘦肉精豬肉，集體中毒；2006年上海200余人瘦肉精中毒，廣東省惠州市5名工人豬肝中毒，瘦肉精超標(biāo)1000倍；2008年，浙江嘉興中茂塑膠實(shí)業(yè)有限公司70名員工在午飯后開始出現(xiàn)手腳發(fā)麻、心率加快、嘔吐等癥狀，醫(yī)院確認(rèn)為瘦肉精中毒；2009年，廣州市出現(xiàn)瘦肉精惡性中毒事件，共67人發(fā)病；2011年雙匯瘦肉精事件……瘦肉精給人們帶來的危害不僅僅是這些，更多的是對肉品質(zhì)量安全的恐懼。由于瘦肉精中鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺已經(jīng)廣為人知，于是“二代瘦肉精”沙丁胺醇正在被不法商戶逐漸推廣。

一、沙丁胺醇的化學(xué)性質(zhì)

沙丁胺醇，白色結(jié)晶狀粉末，無臭，味微苦。化學(xué)名為1-（4-羥基-3-羥甲基苯基）-2-（叔丁氨基）乙醇，分子式為C13H21NO3，分子量為239.31，易溶于水，能溶于甲醇，微溶于乙醇，不溶于乙醚和三氯甲烷。熔點(diǎn)為154～158℃，在熔融時同時分解。沙丁胺醇易與硫酸形成白色或近白色的結(jié)晶性粉末狀鹽。

二、沙丁胺醇的危害

沙丁胺醇具有很強(qiáng)的熱穩(wěn)定性和生化穩(wěn)定性，一般烹飪很難使其失活或清除。人體對沙丁胺醇吸收快，排泄慢，極易產(chǎn)生蓄積。沙丁胺醇易蓄積于眼角膜，在毛發(fā)、肺、肝、腎、肌肉、尿樣、血液中也有殘留。食用含有沙丁胺醇的豬肉，對心臟和肝、腎的毒性較大，甚至?xí)l(fā)人體多種不良反應(yīng)，主要包括震顫、心悸、頭痛、惡心、失眠等，還會出現(xiàn)肌肉痙攣、過敏反應(yīng)等罕見癥狀。除此之外，沙丁胺醇還會誘發(fā)和加重糖尿病、心腦血管病人的病情，嚴(yán)重威脅著人們的身體健康和生命安全。

三、沙丁胺醇常用檢測方法

1.感官檢測。外觀方面，長期飼喂沙丁胺醇的生豬皮膚白里透紅、光潔、毛少，臀部結(jié)實(shí)上翹、勻稱呈紅亮狀。背部驅(qū)打后易見傷痕且長久不消退。行走不靈活，易發(fā)生跛行，蹄部易受傷并發(fā)生感染。一般健康豬肉呈淡紅色，肉質(zhì)彈性好，不會有“滲血”現(xiàn)象。而飼喂沙丁胺醇比較嚴(yán)重的豬屠宰后，肉色異常鮮紅透亮，后臀肌肉飽滿、脂肪薄，肉皮緊貼瘦肉、瘦肉纖維疏松。對豬屠宰后的感官識別，可以快速簡便地作出初步判定。

2.膠體金免疫層析法。膠體金免疫層析法具有方便快捷、操作簡單的特點(diǎn)。一般10～15分鐘便可完成初步篩查得出結(jié)論。相對于其他檢測方法而言，其生產(chǎn)成本和檢測成本均較低。但是，膠體金免疫層析法只能作為樣品的初步篩查方法，僅用來判斷樣品是否可疑，不能準(zhǔn)確定性是否含有沙丁胺醇。

3.酶聯(lián)免疫吸附法。即競爭性酶聯(lián)免疫吸附法。目前，在我國這種技術(shù)已經(jīng)非常成熟，市場上有很多商品化的檢測試劑盒，只要按照試劑盒中的說明書即可完成

檢測，操作簡單快捷，準(zhǔn)確率較高。但是需要注意的是：在分子結(jié)構(gòu)方面，沙丁胺醇和克倫特羅較為相似，因此克倫特羅抗體和沙丁胺醇反應(yīng)具有一定的交叉性，這就會導(dǎo)致同一個樣品用沙丁胺醇試劑盒和克倫特羅試劑盒檢測，如果是陽性樣品就會顯示兩項(xiàng)都是陽性，不易區(qū)分此樣品含有哪一種瘦肉精。因此，酶聯(lián)免疫吸附法也常常用于大批量樣品的篩選工作，不能作為最后科學(xué)準(zhǔn)確定性的依據(jù)，必須使用其他方法來進(jìn)行確證。

4.氣相色譜法。氣相色譜法檢測動物組織和尿液中沙丁胺醇的含量已經(jīng)比較成熟，例如高效氣相色譜法、氣相質(zhì)譜聯(lián)用法等。氣相質(zhì)譜聯(lián)用法檢測樣品，常常需要將樣品進(jìn)行前處理，然后凈化，最后衍生化后于氣相質(zhì)譜聯(lián)用分析儀進(jìn)行分析。樣品進(jìn)行前處理常使用酶解法。這是因?yàn)樗夥ǎ磻?yīng)非常強(qiáng)烈，且通常使用鹽酸或高氯酸。而酶解法則比較溫和，但是缺點(diǎn)為反應(yīng)時間較長，常使用的試劑是β-葡萄糖苷酸酶／芳基硫酸酯酶。凈化時使用固相萃取法，多數(shù)實(shí)驗(yàn)人員選擇使用MCX或SCX固相萃取小柱。凈化后使用氮、氧-雙三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA）進(jìn)行衍生化，衍生完成后，于氣相質(zhì)譜聯(lián)用分析儀上進(jìn)行測定。氣質(zhì)聯(lián)用檢測法測定沙丁胺醇具有檢出限較低、穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確性高、靈敏度高的特點(diǎn)，通過萃取凈化大大降低了樣品中雜質(zhì)的干擾。但是由于氣相質(zhì)譜聯(lián)用分析儀儀器設(shè)備昂貴，很難在基層普及，檢測操作環(huán)節(jié)較為復(fù)雜，對實(shí)驗(yàn)要求較高，且檢測耗時較長，不適用于一線檢測。

5.液相色譜法。液相色譜法不需要對提取液進(jìn)行柱前衍生，樣品處理較為簡單，例如高效液相色譜法、超高效液相色譜法、液相質(zhì)譜聯(lián)用法等。秦永平等創(chuàng)建了反相高效液相色譜-紫外法，用以測定血漿中沙丁胺醇含量，該法的最低檢測限0.3微克/升，回收率在98%～109%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）＜8%。金雁等使用高效液相色譜-二極管陣列檢測器可以檢測出動物組織中沙丁胺醇的含量。尚紅霞等利用該方法檢測飼料中的沙丁胺醇的含量，并利用Amberlite XAD-2大孔吸附樹脂進(jìn)行固相萃取，有效解決了萃取過程中的乳化問題。二級陣列管檢測器的使用，不僅增加了沙丁胺醇檢測定性的準(zhǔn)確性，且該方法的分析成本較低，易于操作及推廣。Ram N.Gupta

等創(chuàng)建了沙丁胺醇檢測的反相柱液相色譜-熒光法，熒光檢測器的激發(fā)波長和發(fā)射波長為275納米和310納米，沙丁胺醇的最低檢測限0.2微克／升。趙善貞等利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，測定豬肝中沙丁胺醇的最低檢出限0.1微克／千克，回收率為76.8%～82.8%，RSD小于5.8%。該法具有靈敏度高、檢測準(zhǔn)確的特點(diǎn)，但質(zhì)譜儀操作復(fù)雜，價(jià)格昂貴，不適于基層使用。超高效液相色譜能獲得更高的柱效，在更寬的線性范圍內(nèi)保持柱效恒定，在峰容量、分析效率、靈敏度等方面較高效液相色譜有很大提高。

四、小結(jié)與展望

雖然沙丁胺醇?xì)埩魴z測的方法非常多，但是目前我國行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和國家標(biāo)準(zhǔn)使用的方法為液相質(zhì)譜聯(lián)用法和氣相質(zhì)譜法，此兩種方法都能夠得到較準(zhǔn)確的檢測沙丁胺醇的含量，但是樣品預(yù)處理過程都非常復(fù)雜且耗時較長。酶聯(lián)免疫法處理樣品預(yù)處理過程操作簡便，可同時檢測多個樣品，很大程度上縮短了分析時間，但是僅可以作為快速篩選手段，不能作為定性確證依據(jù)。因此，對液相質(zhì)譜聯(lián)用法和氣相質(zhì)譜法的進(jìn)行簡化，對現(xiàn)有復(fù)雜、繁瑣、耗時長的樣品預(yù)處理方法的進(jìn)行改進(jìn)是非常必要的。這就需要我們監(jiān)察工作者不斷探索新的方法，使得沙丁胺醇的檢測工作更加方便、快捷、準(zhǔn)確，為老百姓食用放心肉提供可靠保障。