真性紅細胞增多癥患者血清快速分離條件探討

門萬琪，孫禮權，陳曉宇

(安徽醫科大學第四附屬醫院檢驗科，安徽合肥 230022)

離心技術應用廣泛，主要根據物質粒子作勻速圓周運動，同時受到一個向外的離心力的過程而發展起來的一種分離技術，一般實驗室使用常規低速離心機制備符合實驗要求的血清標本，但臨床工作中常能遇到一些特殊類型標本，如真性紅細胞增多癥(polycythemia vera，PV)患者標本在使用常規離心手段時，不能產生足夠試驗用量的血清，需要反復離心，即浪費寶貴檢驗時間，也可能會影響檢驗結果，尤其是血糖的結果［1］，這可能因為PV患者紅細胞數量多，血液黏度大，標本前處理時間過長，會影響一系列生化檢測結果的準確性。由于使用常規3 000～3 500 rpm轉速的離心方法很難取得足夠臨床生化、免疫等檢查所需的血清，本文即探討怎樣快速、簡便、有效的分離PV患者標本，方便臨床實驗室實際工作的開展。

1 資料

1.1 一般資料 隨機選取2012年9月1日—2013年3月31日安徽醫科大學第四附屬醫院收治的PV患者12例，早晨空腹采集全血。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 用普通生化管采集檢測對象清晨空腹靜脈血，37℃水浴箱放置20 min，分離血清。所有試驗對象均在采血后立即送檢，各指標均在3 h內檢測完畢。

1.2.2 分離血清 將采集的每個病人的血標本分成4組，均置37℃水浴箱20 min，使用中佳KDC－28型低速離心機，第一組采用3 000 rpm轉速，第二組采用3 500 rpm轉速，第三組采用4 000 rpm轉速，第四組采用4 500 rpm轉速，以上各組均離心5 min，取其血清。

1.2.3 生化指標測定 采用德國SIEMENS Dimention全自動生化儀，試劑由SIEMENS公司提供。按操作說明書進行操作。測試的生化指標包括下列常用的16項:總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TBiL)、直接膽紅素(DBiL)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、谷氨酰轉肽酶(GGT)、乳酸脫氫酶(LDH)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、尿酸(URCA)、葡萄糖(GLU)、鉀(K)、鈉(Na)、氯(Cl)、鈣(Ca)。

1.3 結果判斷 在使用不同離心速度條件下產生的血清檢測的生化指標，其結果是否具有統計學差異。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0軟件進行統計學分析，計量資料采用(±s)表示，采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 比較不同離心速度分離血清的效果 4 500 rpm離心速度下有3支標本發生溶血(1/4標本發生溶血，不采用此方法)，3 000 rpm 組平均產生 315.8 μL 血清、3 500 rpm 組平均產生 448.3 μL 血清、4 000 rpm 組平均產生 723.3 μL血清，見表1。

2.2 比較不同離心速度對生化檢測指標的影響 取不同離心速度分離后的血清做生化檢測，比較各項檢測指標，差異沒有統計學意義(P＞0.05)，見表2。

表1 3 000 rpm組、3 500 rpm組與4 000 rpm組血清離心效果比較(血清產生量μL/5 mL標本)

表2 3 000 rpm組、3 500 rpm組與4 000 rpm組血清生化指標比較(n=12，±s)

表2 3 000 rpm組、3 500 rpm組與4 000 rpm組血清生化指標比較(n=12，±s)

注:3 000 rpm組，3 500 rpm組，4 000 rpm，三組相比，P ＞0.05 。

項目 3 000 rpm組 3 500 rpm組 4 000 rpm組F TP/g·L－175.33 ±4.36 75.40 ±4.27 75.43 ±4.28 3.31 ALB/g·L－1 42.21 ±1.36 42.19 ±1.39 42.02 ±1.42 2.58 TBiL/μmol·L－1 12.12 ±0.55 12.13 ±0.51 12.17 ±0.59 2.69 DBiL/μmol·L－1 5.31 ±0.26 5.33 ±0.22 5.35 ±0.27 3.31 ALT/U·L－1 47.32 ±2.91 47.30 ±2.66 47.31 ±2.79 3.12 AST/U·L－1 31.75 ±1.87 31.70 ±2.88 31.72 ±4.36 2.54 GGT/U·L－1 36.06 ±2.11 36.05 ±2.48 36.04 ±2.45 3.01 LDH/U·L－1 399.04 ±8.47 399.04 ±8.35 399.03 ±8.16 3.22 BUN/mmol·L－1 5.73 ±0.13 5.79 ±0.12 5.72 ±0.12 3.19 CREA/μmol·L－1 73.32 ±3.30 73.31 ±3.51 73.30 ±3.41 2.58 URCA/μmol·L－1 389.31 ±3.55 389.20 ±3.22 389.02 ±3.42 3.29 GLU/mmol·L－1 6.75 ±0.34 6.70 ±0.38 6.72 ±0.39 3.14 K/mmol·L－1 4.15 ±.0.22 4.18 ±0.26 4.14 ±0.25 2.79 NA/mmol·L－1 145.72 ±4.60 145.30 ±4.80 145.20 ±4.80 2.88 CL/mmol·L－1 102.03 ±3.30 102.08 ±3.50 104.08 ±3.55 2.68 CA/mmol·L －12.23 ±0.26 2.26 ±0.21 2.25 ±0.28 2.79

3 討論

真性紅細胞增多癥(polycythernia vera，PV)是一種病因不明的原發于造血干/祖細胞的骨髓增殖性疾病(myeloproliferattive disorders，MPD)，以紅系造血干細胞異常增殖為主，由于多能造血干細胞克隆性紊亂，導致形態較正常的紅細胞、白細胞、血小板及其祖細胞在缺乏特異性刺激因素的條件下也能異常增生并累積，但以紅系增生為主［2］。PV臨床特點表現為發病緩慢、病程較長、全血容量增多、血沉(ESR)明顯緩慢，血液黏滯性增高［3］，可導致成人全身各臟器血流緩慢和組織缺血，及皮膚、黏膜呈紅紫色，肝脾腫大等臨床癥狀［4］，還能影響新生兒全身各器官的血流速率，導致缺氧、酸中毒及營養供應減少。PV實驗室檢查特點是紅細胞計數和血紅蛋白含量明顯升高，紅細胞形態通常為小細胞低色素性，網織紅細胞(Ret)計數正常，但出血后可升高［5］。?？蓹z測到血小板形態和功能的異常，瑞氏染色薄血片可見成堆的血小板，偶可見巨型和畸形血小板［6］?；颊哐錖DH水平高于正常值，且與血紅蛋白量呈正相關，可通過血清LDH水平反映PV患者骨髓造血細胞的惡性增殖程度及判斷預后［7］。通過本次試驗可以看出，標本在前處理條件且離心時間相同，僅為離心轉速不同的情況下，其16項常規生化指標結果沒有顯著差異(P＞0.05)，而在4 500 rpm離心速度下標本易溶血，以4 000 rpm速度離心所得血清比3 000或3 500 rpm速度離心所得血清平均多一倍，足夠常規生化、免疫檢測的使用。這可能是由于PV患者血細胞數量(尤其是紅細胞數量)和血液黏度的增加等因素影響，導致使用常規3 000 rpm和3 500 rpm轉速的離心方法很難取得足夠臨床生化、免疫等試驗所需的血清。所以在日常工作中遇到PV患者時，可根據臨床檢測生化、免疫等項目的需要，要求護士抽取2～3管血標本，每管4 mL以上，收到標本后置37℃水浴箱20 min，而后離心時可以將離心機轉速調整至4 000 rpm，離心5 min，一般不會導致溶血，且可以得到足夠試驗用的血清。

［1］謝勇麗，張雅薇，袁拓萍，等.慢性增殖性血液病假性低血糖10例分析［J］.南昌大學學報(醫學版)，2011，51(12):56 －58.

［2］葉任高，陸再英 主編.內科學［M］.6版.北京:人民衛生出版社，2006:638.

［3］邊紅放，殷 麗.血液病與血流變學檢測結果分析與探討［J］.中國血液流變血雜志，2005，15(4):535，565.

［4］郭志雄.真性紅細胞增多癥26例臨床分析［J］.中國實用醫刊，2012，39(13):90.

［5］宋 軍，史 敏，高占璽，等.真性紅細胞增多癥與原發性血小板增多癥的實驗室檢查特征［J］.臨床檢驗雜志，2013，31(4):312.

［6］苗 苗，胡 榮，楊 威.真性紅細胞增多癥轉急性髓系白血病1 例［J］.中國實用內科雜志，2012，32(3):325－326.

［7］Xin CH，Xu JQ，Sui JR，et al.Analysis on 71 patients with polycythemia vera［J］.Journal of Experimental Hematology，2012，20(3):667－670.