氣相色譜法對丹參中有機氯農藥殘留的分析研究

李妮娜，王舉濤

(安徽中醫藥大學藥學院，現代中藥安徽省重點實驗室，安徽合肥 230031)

中草藥被用做藥品和食材已有數千年的歷史［1］，與西藥和化學藥品相比，中藥具有標本兼治、療效溫和確切、毒副作用小等優勢。隨著回歸自然的潮流，中草藥受到越來越多人的歡迎。如今為了滿足中草藥的生產需求，現代農業大量的使用農藥來控制農作物生長期間的病蟲害以提高產量。由于缺乏對農藥本身的性質、農藥對中草藥的作用機制、農藥殘留特性和規律以及農藥對環境的影響等方面的認識，往往造成中草藥中農藥殘留污染［2］。

有機氯農藥由于其殺蟲效果顯著、曾是各國用量最大的殺蟲劑，其使用歷史長、范圍廣、用量大，雖已禁用多年，但由于穩定性高、半衰期長，不易降解和代謝，長期積存于植物和土壤中，至今果蔬、中草藥、土壤中檢出率仍相當高。

丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根莖，具有血祛瘀，通經止痛，清心除煩，涼血消痛功效［3］。隨著對中藥丹參的研究，發現丹參制劑［4－7］及其單組份—丹參多酚酸［8－9］具有顯著的治療作用。因此保證其質量對臨床安全有效的使用非常重要。本實驗運用氣相分析方法對不同產地不同批次的丹參藥材進行了測定分析。

1 材料

1.1 儀器 GC2014型氣相色譜儀(日本島津)，63Ni ECD電子捕獲檢測器，超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，旋轉蒸發儀 (鄭州長城科公貿有限公司)。

1.2 藥材 丹參藥材采集于亳州藥材市場，來自四川、山東、河北、山西4個產地。

1.3 試劑 農藥對照品液:α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、P.P’-DDE、O.P’-DDT、P.P’-DDD、P.P’-DDT，濃度均為 100 mg·L－1，購于農業部環境保護科研檢測所。其編號分別為:GSB05－2276－2008、GSB05－2277－2008、GSB05－2278－2008、GSB05－2279 －2008、GSB05 －2280 －2008、GSB05－2281－2008、GSB05－2282－2008、GSB05－2283－2008，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 彈性石英毛細管柱(30 m×0.25 mm ×0.25 μm)rtx-5，進樣口溫度 230°C，檢測器溫度300°C，分流進樣，分流比 20∶1，程序升溫初始溫度105°C，每分鐘升 6°C 至 200°C，保持 10 min。再每分鐘升6°C至240°C，保持15 min。載氣為高純氮(99.99%)。在此條件下對照品、樣品中各農藥出峰順序見圖1及圖2。

2.2 對照品混合儲備液的制備 用石油醚將濃度均為 100 mg·L－1的 α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、P.P’-DDE、O.P’-DDT、P.P’-DDD、P.P’-DDT分別制成濃度均為4 mg·L－1的單標儲備液。精密量取上述各單標儲配液0.5 mL置10 mL容量瓶中，用石油醚(60～90°C)定容至刻度，得各成分濃度均為0.2 mg·L－1的混合溶液，作為對照品混合儲備液。

2.3 供試品溶液的制備 參考《中國藥典》2010年版第一部制備方法［3］:取樣品于60°C干燥4 h，粉碎成細粉，過60目篩。取約2 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，加水20 mL浸泡過夜，精密加丙酮40 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用丙酮補足減失的重量，再加氯化鈉約6 g，精密加二氯甲烷30 mL，稱定重量，超聲處理15 min，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失的重量，靜置(使分層)，將有機相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100 mL具塞錐形瓶中，放置4 h。

精密量取35 mL，置50 mL圓底燒瓶中，置40℃水浴上旋蒸濃縮至近干，加少量石油醚(60～90℃)如前反復操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚(60～90℃)溶解并轉移至10 mL具塞刻度離心管中，加石油醚(60～90℃)精密稀釋至5 mL，小心加入硫酸 1 mL，振搖 1 min，離心(3 000 r·min－1)10 min，精密量取上清液2 mL，置具刻度的濃縮瓶中，連接旋轉蒸發器，40℃下旋蒸溶液至適量，精密稀釋至l mL，即得。

2.4 線性關系考察 精密量取“2.2”項下的對照品混合儲備液，各0，0.05，0.25，0.5，2.5 mL 于 5 個10 mL容量瓶中，用石油醚(60～90℃)定容至刻度，制成每升含有 0，1，5，10，50 μg 的溶液。分別取1 μL注入氣相色譜儀，每個濃度平行進樣3次，以平均峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，計算回歸方程和相關系數。有機氯農藥混合對照品溶液在0～50 μg·L－1線性關系良好，如表1。

表1 有機氯農藥線性相關方程

2.5 檢測限 按照上述供試品制備的方法制備不含藥材的空白供試品溶液，精密吸取空白供試品溶液與濃度為1 μg·L－1的有機氯混合對照品溶液各1 μL注入氣相色譜儀，測得8種有機氯農藥的最低檢測限均 ＜0.01 ×10－6。

2.6 精密度試驗 取50 μg·L－1的對照品混合溶液連續進6次，方法精密度的峰面積RSD(%)值分別為:α-BHC:2.58、β-BHC:2.12;γ-BHC:1.9;δ-BHC:2.9;P.P’-DDE:2.26;O.P’-DDT:0.97;P.P’-DDD:2.3;P.P’-DDT:1.75，結果顯示方法的精密度符合要求。

2.7 重復性試驗 稱取丹參樣品6份，每份2 g，按供試品溶液制備的方法進行處理，上述色譜條件進行分析，計算丹參藥材中有機氯農藥的殘留量，結果丹參中的 α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、P.P’-DDE、O.P’-DDT、P.P’-DDD、P.P’-DDT 峰面積RSD(%)值均＜3.0%，結果表明該方法具有一定的重復性且重復性符合要求。

2.8 穩定性試驗 取50 μg·L－1的對照品混合溶液在 0，6，12，18，24，48 h 不同的時間進行測定，方法穩定性的峰面積 RSD(%)值分別為:α-BHC:1.57%;β-BHC:1.48%;γ-BHC:1.79%;δ-BHC:2.49%;P.P’-DDE:1.82%;O.P’-DDT:2.27%;P.P’-DDD:1.64%;P.P’-DDT:2.32%，結果顯示該方法的穩定性符合要求。

2.9 加樣回收試驗 在丹參樣品中，分別加入一定量的對照品，按供試品溶液制備的方法進行處理，分別取1 μL注入氣相色譜儀中，經6次平行測定，測得含量并計算回收率，計算結果如表2。

表2 有機氯農藥加樣回收率試驗 /ng

2.10 樣品測定 不同產地的丹參藥材按上述供試品溶液的制備方法進行處理，平行處理2次，取1 μL注入氣相色譜儀中，每份供試品測定3次，結果分析見表3。

表3 不同丹參藥材中有機氯農藥的含量/ng·g－1

3 討論

本實驗建立了中藥丹參中有機氯農藥六六六(BHC)和滴滴涕(DDT)殘留量的彈性毛細管氣相色譜分析方法，對以后研究其他中藥中有機氯農藥殘留的研究提供了一定的參考價值。從樣品的測定分析結果來看，丹參藥材中有機氯農藥BHC和DDT的異構體均有檢出。另外有研究指出，從實際情況看農藥污染并不一定是中藥材在種植期間使用農藥造成的，還有可能是因為種植土壤和空氣中殘留的農藥對中藥材的間接污染以及中藥材在采收、加工、貯存、運輸過程中造成的污染［10－11］。因此，在種植中藥材時不僅要嚴格控制農藥的使用，選擇合適的土壤種植中藥材及避免農藥的間接污染也及其重要。農藥殘留量是影響中藥材質量的重要因素之一，同時成為中藥材走向國際市場的攔路虎［12］，因此，降低中藥材中農藥殘留量成為目前急需解決的問題。

［1］劉曉亮，李雪生，劉邵文，等.中草藥中13種代表性農藥多殘留的分散固相凈化與氣相色譜－質譜法測定［J］.分析化學研究報告，2013，41(4):553 －558.

［2］黃曉會，薛健，吳曉波，等.根莖類中藥材有機氯及菊酯類農藥多殘留分析［J］.中成 藥，2012，34(1):100 －104.

［3］國家藥典委員會.中國藥典(一部)［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:283，附錄:IXQ.

［4］趙紅莉.酚妥拉明聯合丹參粉針劑治療新生兒硬腫癥療效觀察［J］.中國優生優育，2013，19(6):480 －481.

［5］賀文煜，鄭國榮，徐維田.丹參制劑治療急性胰腺炎的機制研究［J］.醫學綜述，2012，18(5):763 －765.

［6］陳永蘭.丹參黃芪注射液合用治療冠心病心絞痛的療效觀察［J］.北方藥學，2012，9(11):4 －5.

［7］劉文彬，梁 慶，王 暉，等.外用丹參酮乳膏抗痤瘡藥效及機制［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18(14):212 －216.

［8］衛銀芝，趙 芳，熊世熙，等.丹參多酚酸鹽對糖尿病心肌病保護作用及可能機制［J］.安徽醫藥，2013，17(10):1656－1659.

［9］習詩良.丹參多酚酸對佐劑型關節炎大鼠的治療作用［J］.安徽醫藥，2013，17(7):1101 －1103.

［10］傅巧真，路俊仙，王 萌，等.中藥材農藥殘留原因及防治措施的研究進展［J］.時珍國醫國藥，2014，25(4):925 －927.

［11］李寶芬.中藥材農藥殘留研究概況［J］.中醫雜志，2012，53(22):1969－1972.

［12］胡一晨，萬 麗，楊 芳，等.中藥中農藥殘留的限量標準及相關研究現狀［J］.中藥與臨床，2012，3(1):48 －51.