二仙湯及其拆方對去卵巢大鼠更年期綜合征的影響

謝　珍劉　波　徐　彭　談偉鋒　周　年　曹　怡(江西中醫藥大學藥學院藥理學科組，江西　南昌　330004)

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二仙湯及其拆方對去卵巢大鼠更年期綜合征的影響

謝珍1劉波徐彭談偉鋒周年曹怡
(江西中醫藥大學藥學院藥理學科組，江西南昌330004)

〔摘要〕目的探討二仙湯及其拆方對去卵巢大鼠實驗性更年期綜合征的影響。方法以卵巢摘除SD雌性大鼠為動物模型，隨機分為模型組、二仙湯整方及其4個拆方組(二仙湯A方、B方、C方、D方、E方)，另設一組假手術組，連續給藥90 d，比較大鼠體重、血清性激素水平及胸腺、脾臟、子宮指數的變化，并對子宮進行組織學觀察。結果A方可顯著抑制因摘除卵巢引起的體重升高(P＜0. 01);與模型組相比，A方、C方及E方能顯著提高大鼠的胸腺系數(P＜0. 05)，E方可使脾臟系數明顯升高(P＜0. 05)，C方能顯著升高促黃體生成素(LH)水平(P＜0. 05)，除B方外，其余各方均可明顯提高卵泡刺激素(FSH)水平。組織學方面，A方、E方可增加腺體數目，除A方外，其余各方均使內膜增厚。結論二仙湯及其拆方緩解更年期綜合征的作用與從多環節調節生殖內分泌功能有關，且各個拆方起著不同的調節作用，具有臨床指導意義。

〔關鍵詞〕二仙湯及其拆方;更年期綜合征;卵巢摘除

1浙江省食品藥品檢驗研究院

第一作者:謝珍(1989-)，女，在讀碩士，藥師，主要從事內分泌代謝藥理學研究。

二仙湯是上海中醫藥大學已故名醫張伯訥教授針對圍絕經期綜合征研制的名方，主要由溫腎益精藥淫羊藿、仙茅、巴戟天，補血活血藥當歸和滋陰降火藥知母、黃柏六味中藥組成〔1〕，其中淫羊藿、仙茅為君，巴戟天為臣，知母、黃柏為佐，當歸為使，臨床上廣泛用于更年期綜合征、高血壓和絕經后骨質疏松的治療〔2〕。更年期綜合征是婦女絕經后卵巢功能衰退導致的生殖系統萎縮、自主神經系統功能紊亂的一組癥候群，是女性整體衰老的結果和早期表現。二仙湯的藥理研究涉及抗自由基作用〔3〕、增強下丘腦-垂體-性腺軸的功能〔4，5〕及提高免疫功能〔6〕等。二仙湯用于更年期綜合征的治療已經證實，本研究依據君、臣、佐、使的配伍關系對二仙湯進行拆方，研究二仙湯及其拆方對去卵巢大鼠體重、血清促黃體生成素(LH)、卵泡雌激素(FSH)、相關臟器指數及其組織學形態的影響，并比較各個拆方作用的不同。

1　材料與方法

1. 1實驗動物雌性SD大鼠，6月齡，體重230～250 g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供，許可證號: SCXK(湘)2009-0004，室溫控制在20～22℃，恒濕，光照與環境一致，實驗期間自由飲水，實驗前12 h禁食。

1. 2藥物飲片均購自南昌昌幫中藥行，由江西中醫學院中藥鑒定學科組付小梅副教授鑒定為朝鮮淫羊藿，仙茅，巴戟天，當歸，知母，黃柏。

1. 3儀器與試劑血清LH放射性免疫試劑盒(批號: 20130101)、血清FSH放射性免疫試劑盒(批號: 20130101)均購自濰坊三維生物工程集團有限公司; Access全自動微粒子免疫化學發光儀(美國Bekman公司產品);手動轉輪切片機、石蠟切片機(德國Leica公司產品);光學顯微鏡(日本Olympus公司產品)。

1. 4方法

1. 4. 1造模方法3%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔注射麻醉，雙側背部切口，揭開脂肪層，在卵巢和子宮交接處結扎，徹底切除兩側卵巢，逐層縫合皮膚。不做卵巢切除的大鼠則同樣切開腹腔，揭開脂肪層，將卵巢移出后復位，并不切除卵巢而縫合切口。手術第2天起進行陰道涂片檢查，連續觀察10 d，1次/d，不出現規則動情變化的大鼠為造模成功的大鼠，可供實驗用。

1. 4. 2動物分組共分為七組，其中篩選后的60只卵巢徹底切除的雌性大鼠，隨機分成六組，即模型組、二仙湯整方(A 方)及依據君、臣、佐、使配伍關系的二仙湯4個拆方組，即淫羊藿+仙茅(B方)、淫羊藿+仙茅+巴戟天(C方)、淫羊藿+仙茅+當歸(D方)、淫羊藿+仙茅+知母+黃柏(E方)，每組10只，以未作卵巢切除雌性大鼠(10只)為假手術組。

1. 4. 3藥物的制備與給藥統一煎煮標準為加入4倍體積水浸沒藥材3～5 cm，浸泡30 min后，先用武火煮沸，再改用文火慢煎50 min(期間如水過少可多加一定比例的水)。按原方比例2∶2∶2∶2∶1∶1，拆方藥物劑量與原方劑量一致，劑量分別為含生藥8，3. 2，4. 8，4. 8，4. 8 g/kg，假手術組、模型組均灌服純凈水，二仙湯整方及拆方組分別灌服相應的藥物煎煮液，每周稱量體重，隨體重調整藥量，給藥容積均為10 ml/kg，連續給藥90 d。

1. 4. 4血清LH、FSH的測定3%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈取血，4℃靜置4 h，3 000 r/min離心10 min，分離血清，－80℃保存，分別用血清LH、FSH放射性免疫試劑盒，在Access全自動微粒子免疫化學發光儀免疫分析系統上測定LH、FSH水平。

1. 4. 5臟器系數的測定及組織形態學觀察取血后，解剖取出胸腺、脾臟及子宮，精確稱重后，子宮放入10%甲醛溶液中固定，經脫水、石蠟包埋、脫蠟、切片(片厚4 μm)、蘇木精-伊紅染色、封片，在顯微鏡下進行觀察。

1. 5統計學處理采用SPSS20. 0統計軟件，行單因素方差分析。

2　結果

2. 1二仙湯及其拆方對大鼠體重的影響大鼠摘除卵巢恢復性飼養1 w后，各組動物體重均呈增長趨勢，E方動物體重增長最為明顯，至給藥后第4、8、12周，雙側卵巢摘除致大鼠體重明顯增加，與假手術組相比均有極顯著差異(P＜0. 01)，其中在給藥后第8周，A方大鼠體重與模型組相比顯著降低(P＜0. 01)，其他各組與模型組均無差異。見表1。

2. 2二仙湯及其拆方對大鼠臟器系數的影響與假手術組相比，模型組的子宮顯著降低(P＜0. 01)，可見大鼠去卵巢后子宮明顯萎縮，脾臟系數也有下降的趨勢，無統計學意義，但胸腺系數略微升高。與模型組相比，A方能使胸腺系數升高34%(P ＜0. 01)，C方及E方可使其升高26%、20%(P＜0. 05);脾臟系數方面，E方可使其顯著升高(P＜0. 05);整方及各個拆方均可不同程度的提高子宮系數，但無顯著差異，其中A方和C方效果較好。見表2。

表1　大鼠術后3個月體重變化(x ±s，n=10，g)

與假手術組比較: 1)P＜0．01;與模型組比較: 2)P＜0．01

2. 3二仙湯及其拆方對大鼠血清LH、FSH的影響與假手術組相比，模型組的血清LH水平大幅升高(P＜0. 01)，而FSH下降了56%(P＜0. 05)。與模型組相比，除A方和B方使LH有下降的趨勢，分別為6%、27%，其余各方均可使其提高，其中C方有顯著性(P＜0. 05);而除B方外，治療組的FSH均呈極顯著性提升，其中A方和E方的FSH水平與假手術組相比較為接近，B方可使其比假手術組降低39%。見表2。

2. 4二仙湯及其拆方對大鼠胸腺、子宮組織形態學的影響假手術組:大鼠的子宮管壁較厚，內膜下分布有大量的腺體，形態規則，腺腔大小不等，腺上皮以單層柱狀細胞為主;去卵巢模型組大鼠子宮體積變小，管壁明顯變薄，內膜下腺體減少，腺腔萎縮，血管擴張; A方:固有層腺體和血管豐富，與假手術組相近，上皮細胞排列較緊密; B方:內膜增厚明顯，腔面呈波浪狀，腺上皮細胞增高且相互擁擠，腺體稀少; C方:內膜增厚明顯，纖毛長而密，腺腔擴張，腺體間質細胞肥大，胞質多; D方:內膜增厚程度與C方相似，表層上皮細胞高柱狀游離，部分有被覆纖毛; E方:內膜顯著增厚，內膜上皮細胞排列整齊且緊密，腺體多，彎曲度增加。見圖1。

表2　各組大鼠胸腺、脾臟、子宮臟器系數及血清性激素水平的比較(x±s，n=10)

圖1　各組大鼠子宮組織形態的比較(HE，×200)

3　討論

更年期綜合征是因性激素分泌量減少，產生以自主神經功能失調為主的一系列癥狀，內分泌異常是其主要的特征。本文結果顯示大鼠摘除卵巢后，體重增長與假手術組相比速度加快，其中A方可顯著抑制因卵巢摘除引起的體重增長(P＜0. 01)，說明二仙湯整方在調節更年期體重變化方面有重要意義。

胸腺是中樞性免疫器官，是T淋巴細胞分化成熟的場所，脾臟是人體中最大的淋巴器官，含有大量的淋巴細胞和巨噬細胞，是機體細胞免疫和體液免疫的中心〔6〕。本研究發現造模后大鼠的胸腺系數較假手術組有升高的趨勢，脾臟系數則下降，而經治療后，各組的胸腺系數及脾臟系數均有不同程度的升高，其中A方、C方及E方可顯著提高胸腺系數，E方能使脾臟系數升高19%，提示二仙湯A方、C方及E方可以通過提高去卵巢大鼠的胸腺或脾臟系數來增強其免疫功能。

FSH、LH均由腺垂體分泌，其中FSH的主要作用為促進卵泡成熟，并可促進新細胞合成FSH受體;而LH作用于成熟的卵泡，引起排卵并生成黃體。由于卵巢摘除導致的雌激素不足，使下丘腦-垂體-卵巢軸之間的平衡失調，對下丘腦-垂體不能進行有效的負反饋而致使FSH、LH含量升高〔7〕，本文中LH與之符合，而模型組的FSH與假手術組相比顯著下降，可能與以下因素有關:體內雌激素在正常情況下大部分由卵巢分泌，但也存在非性腺器官的分泌，可對垂體產生負反饋來抑制FSH的分泌，且垂體FSH的釋放受卵巢激素的反饋抑制較LH敏感，此外，實驗采用6月齡的大鼠作為受試對象，此月齡大鼠正處于壯年時期，內分泌器官正處于功能旺盛階段，卵巢的摘除可作為一種刺激，可引起機體神經內分泌系統的應激反應，各系統功能的整合可能會激活其他內分泌腺的代償性功能增強，如腎上腺皮質等〔8〕，分泌產生更多的雌激素來對垂體形成負反饋。本文顯示君藥B方在降低FSH、LH水平方面藥力最為強烈，有君藥與佐藥組成的E方作用略緩和，提示可減緩君藥的烈性。

本研究結果表明各方均可不同程度的提高子宮系數，提示有緩解子宮萎縮的作用。還可改善去卵巢大鼠子宮的一些病理改變，且有不同的側重點，A方和E方可明顯增加腺體數目，B方、C方、D方及E方可使內膜增厚，顯示出改善子宮內膜狀態，維持內膜及腺體生長的作用，即二仙湯及其拆方具有一定營養子宮并改善其功能的作用。

綜上，二仙湯及其抗拒方可從多方面對生殖內分泌功能進行調節，使得機體的內環境達到相對穩定的狀態，且各個拆方作用的靶點不同，拆方的這種作用靶點的不同可提高用藥針對性，為臨床上二仙湯用于更年期綜合征的治療提供指導意義。

4參考文獻

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〔2014-06-25修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

通訊作者:劉波(1972-)，男，博士，副教授，碩士生導師，主要從事內分泌代謝藥理學研究。

基金項目:江西省自然科學基金資助項目(No．20151BAB205072; No．20114BAB205073);江西省科技計劃項目(No．20122BBG70090-1);江西省衛生廳中醫藥科研項目(No．2011A142; No．2012A031)

〔文章編號〕1005-9202(2015)20-5691-03;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2015. 20. 006

〔文獻標識碼〕A

〔中圖分類號〕R285. 5