腦膠質(zhì)瘤中絲氨酸蛋白酶抑制劑、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)及對(duì)血管生成的影響

韓　笑　吳瓊石楊　薇(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院腫瘤科，遼寧　錦州　00)

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腦膠質(zhì)瘤中絲氨酸蛋白酶抑制劑、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)及對(duì)血管生成的影響

韓笑吳瓊石1楊薇2(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院腫瘤科，遼寧錦州121001)

〔摘要〕目的檢測(cè)膠質(zhì)瘤中絲氨酸蛋白酶抑制劑(Mapsin)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和CD31標(biāo)記的微血管密度(MVD)的關(guān)系，分析其意義。方法以67例膠質(zhì)瘤患者的臨床資料和術(shù)后蠟塊組織作為觀察組，以非腫瘤性的腦組織(病理科存檔)40例作為對(duì)照組。應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)兩組中Mapsin、VEGF和CD31的表達(dá)。結(jié)果觀察組中Mapsin表達(dá)的陽(yáng)性率明顯低于對(duì)照組，VEGF表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，觀察組中MVD值明顯高于對(duì)照組，觀察組中Mapsin和VEGF的陽(yáng)性率、MVD值與腫瘤的最大徑、是否伴有壞死和Ki67增殖指數(shù)密切相關(guān)。相關(guān)分析顯示Mapsin和VEGF、Mapsin和MVD的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)性，VEGF和MVD的表達(dá)呈正相關(guān)性。結(jié)論膠質(zhì)瘤術(shù)后組織中Mapsin的陽(yáng)性率低、VEGF的陽(yáng)性率高、MVD值高，Mapsin對(duì)腫瘤血管生成可能具有抑制作用，Mapsin和VEGF共同調(diào)節(jié)著腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。

〔關(guān)鍵詞〕膠質(zhì)瘤;絲氨酸蛋白酶抑制劑(Mapsin);血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF);微血管密度(MVD);免疫組化

1遼寧醫(yī)學(xué)院教學(xué)部2遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院骨脊柱甲乳外科

第一作者:韓笑(1982-)，女，主治醫(yī)師，主要從事腫瘤學(xué)研究。

膠質(zhì)瘤發(fā)生年齡、性別、發(fā)生部位、生長(zhǎng)潛能、侵及范圍、形態(tài)特點(diǎn)均有所不同。越來(lái)越多證據(jù)表明這些不同是由于腫瘤轉(zhuǎn)化過(guò)程中基因和蛋白表達(dá)發(fā)生了變化〔1〕。膠質(zhì)瘤形成過(guò)程中間質(zhì)血管豐富，對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)有重要作用，同時(shí)也對(duì)判斷膠質(zhì)瘤的分級(jí)有重要幫助〔2〕。絲氨酸蛋白酶抑制劑(Mapsin)是1994年發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤抑制基因，在正常組織中有不同程度的表達(dá)，當(dāng)腫瘤性病變進(jìn)展時(shí)，其表達(dá)常丟失〔3〕。近年有研究顯示Mapsin可能對(duì)腫瘤間質(zhì)血管形成有一定抑制作用〔4〕。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是經(jīng)典的血管生成促進(jìn)因子，可以激活腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的活性，促進(jìn)腫瘤間質(zhì)的血管新生及管腔形成〔5，6〕。CD31是標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性蛋白，表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，其陽(yáng)性的管腔可以代表腫瘤間質(zhì)的微血管密度(MVD)〔7〕。本文檢測(cè)Mapsin、VEGF在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)，關(guān)注兩者與MVD的關(guān)系。

1　資料與方法

1. 1對(duì)象2010年1月至2014年2月行手術(shù)治療的腦膠質(zhì)瘤患者67例，留取患者的臨床資料和術(shù)后蠟塊組織，并經(jīng)病理醫(yī)生閱片復(fù)診，同時(shí)符合WHO中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。男37例，女30例;年齡51～86〔平均(62. 7±5. 5)〕歲。同期非腫瘤性的腦組織(病理科存檔)40例為對(duì)照組，男20例，女20例;年齡52～83〔平均(64. 5±5. 6)〕歲。兩組一般臨床資料無(wú)明顯差別，具有可比性。

1. 2 Mapsin、VEGF和CD31的檢測(cè)Mapsin、VEGF和CD31的試劑均為濃縮液，首先按不同比例進(jìn)行稀釋后行預(yù)實(shí)驗(yàn)，預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均由病理醫(yī)師判讀，選擇染色最理想的濃度用于正式的實(shí)驗(yàn)操作中。正式標(biāo)本中Mapsin、VEGF和CD31中檢測(cè)應(yīng)用免疫組化二步法，均由病理科技師進(jìn)行操作，嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，做好切片質(zhì)量的控制，減少人為誤差。

1. 3 Mapsin、VEGF和CD31結(jié)果判讀Mapsin和VEGF均以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)深棕色為陽(yáng)性反應(yīng)的細(xì)胞，隨機(jī)選擇3個(gè)上皮細(xì)胞密集且染色較為集中的區(qū)域(熱點(diǎn)區(qū))，計(jì)算陽(yáng)性率(400 倍)，取平均值。以＜25%為陰性，以≥25%為陽(yáng)性。MVD的計(jì)數(shù)采用Weidner法〔3〕，其判定不以是否形成管腔或者管腔中有無(wú)紅細(xì)胞為計(jì)數(shù)單位，凡是出現(xiàn)與鄰近的微血管明顯分離，染色陽(yáng)性的單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或者內(nèi)皮細(xì)胞族作為一個(gè)血管計(jì)數(shù)。將切片置于40倍顯微鏡下確定最高血管密度區(qū)域，即熱點(diǎn)區(qū)，然后再于400倍視野下計(jì)數(shù)，選擇3個(gè)最高血管密度區(qū)進(jìn)行微血管計(jì)數(shù)，然后求其平均值作為該病例的MVD值。

1. 4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13. 0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)或線性相關(guān)性分析。

2　結(jié)果

2. 1兩組Mapsin、VEGF陽(yáng)性率和MVD值的比較觀察組中Mapsin的陽(yáng)性率明顯低于對(duì)照組，觀察組中VEGF的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，觀察組中MVD值明顯高于對(duì)照組。見(jiàn)表1。

表1　兩組中Mapsin、VEGF陽(yáng)性率和MVD值的比較〔n(%)，x±s〕

2. 2 Mapsin、VEGF和MVD在觀察組不同臨床特征中的比較觀察組中Mapsin和VEGF的陽(yáng)性率、MVD值與腫瘤的最大徑、是否伴有壞死和Ki67增殖指數(shù)密切相關(guān)。見(jiàn)表2。

表2　 Mapsin、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率和MVD在觀察組不同臨床特征中的比較〔n(%)，x±s〕

2. 3觀察組中Mapsin、VEGF和MVD的相關(guān)性Mapsin和VEGF(r=－0. 45，P = 0. 048 3)、Mapsin和MVD(r =－0. 49，P = 0. 045 3)的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)，VEGF和MVD的表達(dá)呈正相關(guān)性(r=0. 55，P=0. 010 9)。

3　討論

膠質(zhì)瘤病變進(jìn)展過(guò)程具有以下特點(diǎn):①可發(fā)生在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的任何部位，特別是大腦半球;②好發(fā)于成年人和老年人;③組織學(xué)特點(diǎn)和生物學(xué)行為變化很大;④向周?chē)瓦h(yuǎn)處腦組織彌漫浸潤(rùn)與組織學(xué)分級(jí)無(wú)明顯關(guān)系;⑤腫瘤形成后具有惡性程度不斷增加的傾向，直到發(fā)展為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤。以上因素均與腫瘤形成過(guò)程中蛋白表達(dá)失調(diào)和間質(zhì)血管增生有關(guān)〔8〕。Mapsin是從正常乳腺上皮細(xì)胞中分離出來(lái)的cDNA序列中，含有2 548個(gè)核苷酸，其編碼的蛋白是絲氨酸蛋白酶抑制劑的一種，具有375個(gè)氨基酸，內(nèi)部有8個(gè)半胱氨酸殘基，具有特異的三維結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的作用〔9，10〕。馬瑛等〔11〕通過(guò)對(duì)35例上皮性卵巢癌標(biāo)本進(jìn)行Mapsin表達(dá)的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)Mapsin在卵巢癌中表達(dá)下降，同時(shí)與VEGF具有負(fù)相關(guān)性，認(rèn)為Mapsin對(duì)上皮性卵巢癌的血管生成、腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有明顯的抑制作用。VEGF是當(dāng)今研究最多的血管生成因子，可以誘導(dǎo)基質(zhì)血管形成，也可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生。其表達(dá)與多種因子具有協(xié)同作用〔12，13〕。VEGF分泌增多時(shí)可以使血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，同時(shí)引起血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、重塑，使血管內(nèi)皮細(xì)胞形成枝芽狀生長(zhǎng)，同時(shí)經(jīng)血流沖擊形成管腔〔14〕。

本文結(jié)果提示Mapsin正常表達(dá)具有抑制腫瘤形成的作用，而低表達(dá)是誘發(fā)膠質(zhì)瘤形成的因素。Mapsin高表達(dá)時(shí)抑制腫瘤的機(jī)制有:①有效地抑制血管生成;②可以增加細(xì)胞的黏附能力，抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移〔15〕;③結(jié)合Ⅰ型和Ⅱ型膠原，增加細(xì)胞的黏附作用，抑制腫瘤細(xì)胞的遷移作用;④對(duì)腫瘤的侵襲性生長(zhǎng)有一定抑制作用〔16，17〕。本文結(jié)果提示膠質(zhì)瘤中存在著大量的血管生成促進(jìn)因子和較高密度的微血管，使腫瘤細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)豐富，代謝活躍，細(xì)胞增生繁殖能力增強(qiáng)。Mapsin低表達(dá)時(shí)可以促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)，加速腫瘤細(xì)胞的壞死形成，同時(shí)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的失控性增殖過(guò)程，使腫瘤的侵襲能力增強(qiáng)，腫瘤的進(jìn)展加快。Mapsin高表達(dá)是抑制VEGF表達(dá)及血管密度形成的因素，而低表達(dá)時(shí)可以促進(jìn)VEGF的分泌，高效促進(jìn)腫瘤的血管新生〔18，19〕。

綜上，膠質(zhì)瘤術(shù)后組織中Mapsin的陽(yáng)性率低、VEGF的陽(yáng)性率高、MVD值高，Mapsin與VEGF、MVD具有協(xié)同作用，Mapsin對(duì)腫瘤血管生成可能具有抑制作用，共同調(diào)節(jié)著腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。

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〔2014-07-16修回〕

(編輯苑云杰)

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2015)20-5831-03;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2015. 20. 071

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R739