淺談氯霉素的概況及其檢測方法

王仁華

摘要：氯霉素是由委內(nèi)瑞拉鏈霉菌產(chǎn)生的一種廣譜抗菌素，它有非常好的抗菌作用，因價格較低且效果好，而被廣泛應(yīng)用，作為豬、禽類和水產(chǎn)促生長的添加劑，但氯霉素對人體存在嚴(yán)重的毒副作用。因此準(zhǔn)確、靈敏的測定方法對于飼料安全極為重要，本文就氯霉素及其檢測方法做一概述。

關(guān)鍵詞：氯霉素；危害；檢測方法

1.氯霉素的基本性質(zhì)

氯霉素（Chloramphenicol，CAP），分子式為C11H12Cl2N2O5，分子量為323.13，無臭，味極苦，常態(tài)下呈針狀或是片狀的白色或是微黃色晶體，在干燥時不易分解較穩(wěn)定，熔點(diǎn)為149-153℃，煮沸時也不見分解，在酸性以及中性溶液中極穩(wěn)定不易分解，微溶于乙醚、氯仿以及水，水溶性為2.5g/L（25℃），易溶于乙醇、丙酮和乙酸乙酯等有機(jī)溶劑，不溶于苯和石油醚，遇堿類物質(zhì)則容易失效。氯霉素是一種有旋光活性的酰胺醇類抗生素，最開始是在鏈霉菌的發(fā)酵液中提取到，酰胺醇類抗生素是一類化學(xué)合成的廣譜抗生素。

2.氯霉素的應(yīng)用

氯霉素對革蘭氏陽性菌和革蘭陰性細(xì)菌有很強(qiáng)的抑制作用，是常見的用于治療傷寒桿菌、痢疾桿菌、大腸桿菌、流感桿菌、肺炎球菌等的抗生素。氯霉素作為一種具有旋光活性的廣譜抗生素，具有優(yōu)良的抗菌性以及可大量生產(chǎn)價格低廉，穩(wěn)定性較好被廣泛應(yīng)用于畜禽以及人類疾病的預(yù)防治療方面。

3.氯霉素的毒害作用

氯霉素固然有較好的抗菌作用，但它對人體存在極大的毒副作用，近年來在畜禽產(chǎn)品和畜禽體內(nèi)發(fā)現(xiàn)氯霉素的殘留量很大，將其毒副作用總結(jié)為以下幾個方面：氯霉素對骨髓造血機(jī)能會產(chǎn)生抑制作用，可引起血小板減少性的紫癜、粒細(xì)胞缺乏癥、再生障礙性貧血，少數(shù)可能進(jìn)展至粒細(xì)胞性白血病等?；覌刖C合征，如果嬰兒或是早產(chǎn)兒食用的乳制品或是母乳中含有氯霉素，嬰兒長期食用則會導(dǎo)致灰嬰綜合征，會出現(xiàn)皮膚呈灰色、呼吸紊亂、體溫下降、腹脹、嘔吐等癥狀，死亡率高達(dá)40%。對神經(jīng)系統(tǒng)的毒副作用主要是，可引起視神經(jīng)炎、視力障礙、多發(fā)性神經(jīng)炎和中毒性精神病等。胃腸道癥狀和口部癥狀，胃腸道癥狀有腹脹、腹瀉、惡心等，常見的口部癥狀是口部疼痛、口角炎、口腔黏膜充血等。

4.氯霉素的規(guī)定檢測限

氯霉素殘留問題引起國際組織和世界上許多國家和地區(qū)的高度重視，目前世界上許多國家禁止使用此類藥生產(chǎn)動物源性食品，我國農(nóng)業(yè)部已將氯霉素從2000年版《中國獸藥典》中刪除列為禁藥，在《動物性食品獸藥殘留規(guī)定》中規(guī)定可食部分不得檢出。自2001年以來，我國出口的水產(chǎn)品、蜂產(chǎn)品頻頻被進(jìn)口國檢出CAP殘留，目前世界各國不斷降低氯霉素的最高殘留量檢測限，日本2002年度對進(jìn)出口蜂蜜中氯霉素的檢測采用的高效液相色譜法，其檢測低限為0.1μg/kg。歐盟1992年對于氯霉素殘留檢測方法的檢測低限為10μg/kg，2004年歐盟將氯霉素的檢測低限降低為0.1μg/kg，美國FDA規(guī)定的檢出限也由原來的5μg/kg改為1μg/kg后又降為0.3μg/kg。

氯霉素雖然是一種有效的抗生素，但是毒副作用較大，不僅會帶來嚴(yán)重的食品安全問題，還會對人類的健康帶來嚴(yán)重的威脅因此對CAP的進(jìn)行快速、靈敏、簡便、準(zhǔn)確的檢測具有重要的意義。對氯霉素殘留的檢測方法大致可以分為三類：第一類是微生物測定法，第二類是免疫分析法，第三類是儀器分析法其中的微生物測定法和免疫分析法屬于現(xiàn)象反映篩選檢驗(yàn)方法，儀器分析法則是定量檢測的方法，除了主要的三類外還有其他的方法。

5.氯霉素殘留檢測方法

5.1 微生物測定方法

微生物法是根據(jù)氯霉素是屬于抗生素來設(shè)定的實(shí)驗(yàn)方法，原理是如果檢測的樣品中如有抗生素的殘留則會對實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)的細(xì)菌產(chǎn)生抑制其生長的作用形成抑菌圈，根據(jù)有無抑菌圈以及抑菌圈的大小來判定檢測結(jié)果微生物法可以根據(jù)檢測的抗生素的種類不同來培養(yǎng)不同的細(xì)菌。目前微生物測定法主要有棉簽法、杯碟法、紙片法、TTC法、戴爾沃檢測法、藍(lán)黃檢測法（BY法）、發(fā)光細(xì)菌法等。

5.2 免疫分析法

免疫分析法是以抗原與抗體特異性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析技術(shù)。自1975年Milstein和Kohler首次在體外用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備出均一性的單克隆抗體以來，免疫標(biāo)記技術(shù)便得到廣泛的應(yīng)用。通過查閱的資料知道免疫分析法有以下的幾種：酶聯(lián)免疫法（ELISA）也就是本次畢業(yè)設(shè)計(jì)所使用的方法，酶免疫標(biāo)記技術(shù)是用酶標(biāo)記的抗體與樣品中相應(yīng)的抗原反應(yīng)，然后與酶底物作用，形成有色沉淀物，進(jìn)而進(jìn)行觀察測定的技術(shù)。分為之間酶聯(lián)免疫分析和間接酶聯(lián)免疫分析，沈建忠等人用化學(xué)發(fā)光ELISA檢測了肌肉中氯霉素的殘留量，回收率在97-118%范圍內(nèi)。酶聯(lián)免疫法操作簡便，檢驗(yàn)快速，現(xiàn)象明顯但出現(xiàn)假陽性的現(xiàn)象。

其他的免疫分析法還有：放射免疫分析（RIA）、常用來檢測小分子農(nóng)獸藥的痕量殘留的免疫熒光分析法（FIA）、膠體金免疫層析（GICA）膠體金免疫層析檢測時間短，可以在較短的時間內(nèi)看到實(shí)驗(yàn)結(jié)果，無需設(shè)備，膠體金試紙條是一次性使用的，無需清洗避免了上一個樣品對下一次檢測的干擾。化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析法（CL—ELISA）與傳統(tǒng)的比色ELISA法相比，靈敏度可以提高幾倍到十幾倍，而且有著更低的檢測下限，比起ELISA，CL—ELISA所用時間更短檢測更為快速不需要長時間的孵育另外，化學(xué)發(fā)光反應(yīng)不需要加入終止試劑，樣品反應(yīng)結(jié)束后即可進(jìn)行檢測，由于化學(xué)發(fā)光免疫分析的結(jié)果由光子數(shù)表現(xiàn)出來，因此樣品的顏色不會對檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響，同時避免了比色ELISA中使用的致癌物質(zhì)，所以成為了ELISA法新的發(fā)展趨勢。還有磁分離酶聯(lián)免疫檢測方法（MAIA）和CHARMⅡ分析法等多種免疫分析的方法。

5.3 儀器分析法

儀器分析法是一種對設(shè)備要求較高的檢方法，檢測成本相對于微生物法和免疫分析法要高，但儀器分析法的準(zhǔn)確性以及權(quán)威性更大，常見的儀器分析法有：高效液相色譜法（HPLC），HPLC是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的一項(xiàng)高效、快速的分離分析技術(shù)，是殘留檢測中的常用方法。Wal等1980年首次研究報道了用液相色譜法測定牛奶中氯霉素的殘留，其檢出限為5μg/kg，回收率為72% ～9915%。此法精確度高，重復(fù)性強(qiáng)但是操作復(fù)雜費(fèi)時，儀器設(shè)備成本高。氣相色譜法（GC）王建華等研究報道了測定魚肉中氯霉素和甲砜霉素殘留量的毛細(xì)吸管氣相色譜法。當(dāng)添加水平為5μg/kg～20μg/kg時，回收率為80% ～108%。氣相色譜法具有分離效能高、選擇性高和靈敏度高的特點(diǎn)。并且檢測限低，但其由于受到氯霉素?fù)]發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，樣品前處理過程復(fù)雜、分析速度慢、儀器化程度高且價格昂貴，適用范圍比較小。

為了達(dá)到取長補(bǔ)短的效果，在不斷的研究過程中出現(xiàn)了聯(lián)用技術(shù)，即兩種或兩種以上的分析技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用，以達(dá)到取長補(bǔ)短的效果。聯(lián)用技術(shù)有氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC/MS），李鵬等用GC—MS法檢測了動物組織中氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素的殘留量，其中氯霉素的檢出限達(dá)到了0.03μg/kg，其他兩種物質(zhì)均為0.2μg/kg，回收率為80% ～111.5%。楊成對等建立了高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC/MS/ MS）測定對蝦中氯霉素殘留的方法，該方法快速、靈敏、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，定量檢測下限為0.07μg/kg，平均回收率在89%以上。聯(lián)用技術(shù)獎兩種分析技術(shù)相結(jié)合改善了某一種方法的不足提高檢測的準(zhǔn)確性。

6.總結(jié)

由于氯霉素的生產(chǎn)成本不高，可以大量的生產(chǎn)，應(yīng)用也比較多，危害較為嚴(yán)重，對于氯霉素的檢測需要有較為快速的方法?？偨Y(jié)查閱的文獻(xiàn)資料，對氯霉素有了新的認(rèn)識，也對氯霉素的檢測方法有了更多的了解。微生物法的優(yōu)點(diǎn)是：簡單、快速、費(fèi)用少；缺點(diǎn)是：易受干擾、檢測限高且靈敏度不高。免疫分析法的優(yōu)點(diǎn)是：操作簡便、特異性強(qiáng)，可以成批檢測，儀器化程度和成本低靈敏度高；缺點(diǎn)是：影響因素多，易出現(xiàn)假陽性，以及儀器分析法的優(yōu)點(diǎn)是：結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高、特異性強(qiáng)，可操作重復(fù)性高；缺點(diǎn)是：儀器設(shè)備要求高，分析速度慢，樣品處理過程復(fù)雜，成本較高。本次畢業(yè)設(shè)計(jì)選用的酶聯(lián)免疫法可以快速的檢測出氯霉素的含量，但要作為檢測定性的話還需要儀器法來進(jìn)一步確定，酶聯(lián)免疫只能有一個初步的檢測結(jié)果。在氯霉素的檢測方面需要多種方法相互配才能的得到一個更為準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。

參考文獻(xiàn)（略）