胸腔積液腺苷脫氨酶檢測聯合酶聯免疫斑點實驗在結核性胸膜炎診斷中的價值

黃紅麗施承宏

胸腔積液腺苷脫氨酶檢測聯合酶聯免疫斑點實驗在結核性胸膜炎診斷中的價值

黃紅麗①施承宏①

目的：研究胸腔積液腺苷脫氨酶（ADA）檢測聯合酶聯免疫斑點實驗（T-SPOT）在結核性胸膜炎診斷中的價值。方法：選取112例結核性胸膜炎患者作為觀察組，42例非結核引起的滲出性胸腔積液患者為對照組，兩組患者均進行胸腔積液ADA檢測及T-SPOT實驗。結果：兩組患者胸腔積液檢測結果，ADA敏感性87.50%，特異性88.09%；T-SPOT敏感性為89.28%，特異性為92.85%。兩種方法聯合檢出陽性率為95.54%，與T-SPOT.TB（89.28%）及胸腔積液ADA（87.50%）陽性率比較差異有統計學意義（P＜0.05）。結論：兩種方法聯合檢測可提高結核性胸膜炎診斷率，對結核性胸膜炎診斷提供很好的依據，是結核性胸膜炎較好的實驗室診斷手段，具有較高的應用價值和廣闊的應用前景。

胸腔積液腺苷脫氨酶； 酶聯免疫斑點實驗； 結核性胸膜炎； 診斷

結核病是嚴重危害人類健康的慢性傳染性疾病，是單一致病菌所致的傳染性疾病中死亡率最高的疾病，是全球共同關注的一個嚴重公共衛生問題。據世界衛生組織估計，2011年全世界范圍新增結核患者870萬例，死于結核的人數約140萬[1]。由于結核菌復雜的生物學特性，導致結核病的診斷較復雜，易誤診、漏診。世界衛生組織2004年的報告顯示，結核病的確診率僅37%，即使在發達國家也僅有50%的結核病例通過細菌學方法被證實[2]。結核性胸膜炎的診斷同樣較為困難。因此尋找一種快速、準確、可靠的診斷方法十分迫切，可避免誤診、漏診，對于控制結核病疫情亦十分重要。為提高結核性胸膜炎的診斷率，現將本院154例胸腔積液患者作胸腔積液腺苷脫氨酶（ADA）檢測及酶聯免疫斑點實驗（T-SPOT）檢測結果進行分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2010年1月-2014年3月收治的胸腔積液患者154例為研究對象。根據患者的臨床癥狀、胸腔積液常規實驗室檢查及肺部影像學等檢查診斷的結核性胸膜炎112例為觀察組，其中男84例，女28例，年齡6～80歲，平均（35.28±14.38）歲。非結核引起的滲出性胸腔積液42例為對照組，其中男30例，女12例，年齡11～77歲，平均（49.94±17.14）歲。對照組中有8例為惡性胸腔積液（6例肺癌，1例白血病，1例胸膜間皮瘤），29例為肺炎引發的滲出性胸腔積液，1例胸腔積液與肺間質纖

維化有關，1例與自身免疫性溶血有關，2例為心衰所致，1例為尿毒癥所致。所有患者均經組織學、病理學活檢確診。兩組患者在性別、年齡等一般資料上比較差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 ADA儀器、試劑、檢測方法及結果判斷 采用奧林巴斯Au5400型全自動生化分析儀器，采用寧波美康公司生產的試劑盒，參照試劑盒中提供的方法，用速率法檢測ADA活性，正常參考值為（14.4±7.1）U/L。具體方法：給予患者常規胸穿，取大約5 mL胸腔積液，離心之后取清液進行送檢。當患者的胸腔積液腺苷脫氨酶（ADA）含量大于45 U/L時，可被確診為結核性胸膜炎，記為顯性[3-4]。

1.3 T-SPOT.TB儀器、試劑、檢測方法及結果判斷 采用海爾Biosafety Cabinet生物安全柜，REVCO CO2孵育箱。T-SPOT.TB試劑盒由上海長征復星公司提供。具體檢測方法：按照試劑盒說明書采集外周靜脈血4 mL，肝素抗凝，分離外周血單個核細胞（PBMCs），用細胞培養基AIMV 重懸細胞，并將濃度調整至2.5×106/mL。在已包被抗IFNγ單抗的96孔板上，分別加入50 μL細胞培養基作為空白對照，50 μL植物血凝素作為陽性對照，以50 μL結核分枝桿菌特異性ESAT-6和CFP-10作為刺激原。然后在每個孔中加入100 μL上述細胞懸液。把96孔板放在37 ℃孵箱培養16～20 h后， 用PBS液洗板4次，加入堿性磷酸酶標記的二抗，在2～8 ℃下孵育1 h。孵育后再用PBS液洗板4次。最后每孔加入顯色底物BCIP/NBTPLUS， 室溫中靜置7 min后蒸餾水終止反應。陽性結果判斷標準：（1）如果空白對照孔斑點數＜5個，檢測孔斑點數減去空白對照孔斑點數≥6；（2）如果空白對照孔斑點數≥6個，檢測孔斑點數必須＞2倍的空白對照孔斑點數[2]。

1.4 治療 112例結核性胸膜炎患者均給予規范抗結核藥物治療，即口服“異煙肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇”片（具體用量根據患者體重按照藥品說明書中要求給予）強化治療2～3個月后，再繼續口服“異煙肼、利福平”片鞏固治療至9～12個月。大量胸腔積液患者在抗結核治療的同時給于加用糖皮質激素（強的松片）后，逐漸減量至停用。所有患者全身癥狀消失，血沉正常，胸腔積液逐漸吸收，病情穩定后出院，給予門診督導化療，隨訪病情無反復。

1.5 統計學處理 應用SPSS 13.0軟件進行統計學分析，計數資料用率或構成比表示，多個樣本率的比較采用 χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ADA檢測不同性質胸腔積液敏感性及特異性比較 ADA檢測結核性胸膜炎的敏感性為87.50%，特異性為88.09%。見表1。

表1 ADA檢測不同性質胸腔積液敏感性及特異性比較

2.2 T-SPOT.TB檢測不同性質胸腔積液敏感性及特異性比較 T-SPOT.TB檢測結核性胸膜炎的敏感性為89.28%，特異性為92.85%。見表2。

表2 T-SPOT.TB檢測不同性質胸腔積液敏感性及特異性比較 例（%）

2.3 112例結核性胸膜炎胸腔積液ADA檢測聯合T-SPOT.TB檢測陽性率為95.54%。見表3。與胸腔積液ADA（87.50%）及T-SPOT.TB（89.28%）陽性率比較差異有統計學意義（P＜0.05）。

表3 112例結核性胸膜炎胸腔積液ADA檢測聯合T-SPOT.TB檢測結果 例

3 討論

胸腔積液病因較復雜，腫瘤、炎癥、結核等均可導致患者出現胸腔積液，結核性胸膜炎是國內非惡性胸腔積液最常見的病因。目前主要是依據患者的臨床癥狀，給予胸腔穿刺，行胸腔積液常規實驗室檢查，再結合肺部影像學、結核菌素試驗、結核抗體等檢查來診斷結核性胸膜炎，隨后給予診斷性抗結核治療，再根據療效來印證診斷的正確性，有時難免會出現誤診、漏診。診斷結核性胸膜炎的金標準是胸腔積液中找到抗酸桿菌，但胸腔積液涂片找抗酸桿菌的陽性率低，僅7%～13%[5-6]。雖然胸膜病理組織學活檢的陽性率較高，可達50%～80%，經胸腔鏡診斷陽性率可高達86%～97%，但這些都是有創性檢查，不可能常規應用于臨床實踐[7]。而胸膜活檢、內科胸腔鏡創傷性大，存在一定危險，不容易被患者所接受，且受醫院條件制約，不易廣泛推廣。

胸腔積液腺苷脫氨酶（ADA）檢測是目前常用于診斷結核性胸膜炎的實驗室檢查項目之一。腺苷脫氨酶是前T淋巴細胞分化淋巴細胞過程中不可缺少的酶，體內分布廣泛，ADA活性與淋巴細胞的激活和分化有關，ADA的增高考慮存在細胞免疫反應。結核性胸膜炎因為結核分枝桿菌對單核巨噬系統起到了激活作用，顯著增多了淋巴細胞，在人體組織中，含有較多腺苷脫氨酶的細胞和組織主要有淋巴細胞與肺組織[4]。結核引起的細胞免疫由T淋巴細胞介導，腺苷脫氨酶不斷釋放入血，因此腺苷脫氨酶在胸腔積液的含量比較高。結核性胸腔積液中ADA含量明顯高于惡性胸腔積液[8-9]。測定胸水中ADA活性不僅對結核性胸膜炎的診斷具有重要意義，而且對滲出液的鑒別診斷具有非常重要的參考價值[10]。本文結核性胸膜炎患者胸腔積液ADA敏感性87.50%，特異性88.09%，與文獻報道基本一致[11]。腺苷脫氨酶用于結核性胸膜炎的早期診斷具有重要的價值，能夠提高診斷的特異性，目前已被廣泛應用。

酶聯免疫斑點試驗是一種新型的免疫學技術，從單細胞水平檢測分泌抗體細胞或分泌細胞因子細胞，由ELISPOT發展而來的T-SPOT.TB技術用于檢測結核感染后特異性T細胞分泌的90%以上，且r干擾素對結核的特異性和敏感性均非常高；T-SPOT.TB檢測只與外周血液中結核特異抗原刺激產生效應T細胞有關，與感染部位無關，采血簡便易行，實驗室血液檢查2 d可得到檢驗結果，可使患者得到早期診斷與及時治療。因肺外結核不容易得到細菌學證據，T-SPOT.TB檢測的優勢亦加明顯。

2008年Pai等[12]對T細胞IFN-r釋放試驗的應用研究進行了綜述， T-SPOT.TB總的敏感性為90%（86%～93%），總特異性為93%（86%～100%）。霍菲菲等[11]對肺外結核的研究結果提示T-SPOT.TB對肺外結核診斷的敏感性為93.5%。杜巖清等[14]對結核性胸膜炎的研究結果提示T-SPOT.TB在結核性胸膜炎的診斷中敏感性91.9%，特異性90.6%，診斷準確率91.3%。本組研究提示其敏感性為89.28%，特異性為92.85%，與國內外報道相當。T-SPOT.TB是結核性胸膜炎良好的實驗室診斷手段。

ADA等單項指標用于鑒別診斷時都存在假陽性和假陰性，只分析一個指標是不足于有效鑒別胸腔積液的性質[15]，而聯合檢測可以提高胸腔積液性質的確診率。本組資料顯示：胸腔積液ADA聯合T-SPOT.TB檢查陽性率（95.54%）與T-SPOT.TB（89.28%）及胸腔積液ADA（87.50%）陽性率比較差異有統計學意義（P＜0.05）。

綜上所述，T-SPOT.TB技術簡便、快速，有較高的敏感性和特異性，胸腔積液ADA也具有較高的敏感性和特異性，兩種方法聯合檢測可提高結核性胸膜炎診斷率，能為結核性胸膜炎的診斷提供很好的依據，是結核性胸膜炎較好的實驗室診斷手段，具有較高的應用價值和廣闊的應用前景。

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The Value of Adenosine Deaminase from Pleural Effusions and T-SPOT in Diagnosis of Tuberculous Pleurisy/

HUANG Hong-li，SHI Cheng-hong.//Medical Innovation of China，2015，12（08）：010-012

Objective：To study the value of adenosine deaminase from pleural effusions and T-SPOT in diagnosis of tuberculous pleurisy.Method：Selected 112 cases of tuberculous patients as the observation group，42 cases of patiens with non-tuberculous exudative pleural effusion to the control group， two groups of patients were detected both ADA and T-Spot.Result：Two groups of patients with Pleural effusion test results，the sensitivity of ADA and T-Spot were 87.50% and 89.28%，respectively.The specificity of ADA and T-Spot were 88.09% and 92.85%.Combination of two methods of detection positive rate was 95.54%.Two detection methods there was statistically different （P＜0.05）. Conclusion：Combination of two methods can improve the positive rate，the diagnosis of tuberculous pleurisy provide a good basis，a better laboratory diagnostic tool，has a high value and broad application prospects.

ADA； T-Spot； Tuberculous pleuritis； Diagnosis

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.08.004

2014-10-21） （本文編輯：陳丹云）

①昆明市第三人民醫院 云南 昆明 650041

黃紅麗

First-author’s address：The Third People’s Hospital in Kunming， Kunming 650041，China