牛胚胎移植效果的影響因素分析

高立芳， 黃德均， 蔣 安， 周 鵬， 張 健

(重慶市畜牧科學院，重慶 400015)

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牛胚胎移植效果的影響因素分析

高立芳， 黃德均， 蔣 安， 周 鵬， 張 健*

(重慶市畜牧科學院，重慶 400015)

影響牛胚胎移植妊娠率的因素很多。從供體牛、受體牛、操作人員的技術熟練程度以及移植后受體牛的飼養管理等方面對牛胚胎移植效果的影響因素進行了分析。

牛；胚胎移植；妊娠率；影響因素

胚胎移植是指將優良母畜的胚胎移植到生理環境相同的同種母畜子宮內進行孕育的過程。胚胎移植技術在國外已經是一項比較成熟的動物快速繁育技術。在國內，由于技術和管理上的問題，胚胎移植技術仍未得到廣泛應用。在國內，胚胎移植費用高、移植妊娠率低等問題嚴重影響此技術的應用和推廣。筆者對牛胚胎移植效果的影響因素進行了簡要分析。

1 供體牛

1.1 供體牛的選擇

供體牛是生產胚胎的主要載體，因此供體牛的選擇至關重要。選擇供體牛看重的是供體牛的遺傳學價值，有優良的基因，同時體況良好，繁殖性能強，無生殖疾病。選好供體牛后，應加強飼養管理，為其發情受孕生產胚胎做好體能儲備。

1.2 超排處理

在胚胎移植中，獲得大量可用胚胎的主要途徑就是超數排卵(簡稱“超排”)。理論上，經超排處理后排出的卵子越多越好，而如果1次排出的卵子太多，往往會因為促性腺激素劑量過大而影響胚胎的質量，導致受精率降低，同時胚胎的回收率也會有所降低。一般認為，牛和羊1次排出10～15枚卵子的超排效果較為理想。影響超排反應的因素也有很多，如供體牛的品種、遺傳特性、體況、年齡、季節、胎次、營養及超排使用的激素種類、超排程序、母牛卵巢所處的生理狀態和卵泡發育情況等。在超排激素使用方面，許多學者做了大量研究，研究結果也不盡相同。目前，大多使用FSH進行超排，連續注射3～5 d，每天2次，劑量依次遞減，效果較好。秦殿武等[1]使用不同廠家生產的FSH對草原紅牛進行超排處理，結果發現進口FSH比國產FSH效果理想，但成本較高。李銘等[2]使用國產FSH和進口FSH對牛進行超排，發現超排效果無明顯差異，但進口FSH的可用胚數和可用胚率都較高。王峰等[3]探討了不同品種、供體牛經產與否、不同營養水平、重復超排間隔時間、FSH開始注射時間等因素對供體牛超排效果的影響，結果表明經產供體牛的超排效果優于青年牛；不同營養水平和FSH開始注射時間對供體牛超排效果的影響極顯著，而供體牛品種和重復超排間隔時間對供體牛超排效果的影響不顯著。權富生等[4]對青年母牛和經產母牛超排的研究表明青年牛超排平均回收胚胎總數和可用胚數稍低于成年牛，但差異不顯著(P>0.05)，與王峰等[3]的研究結果不一致。超排效果主要決定于超排時卵巢上卵泡波所處的時間及可反應卵泡數量。供體牛超排是在發情周期的9～14 d，其中10～12 d超排效果較為理想。劉水濤等[5]研究表明由于注射FSH時卵泡波所處的階段不同，使母牛的卵泡發育出現了不一致的情況，所以個體間存在很大差異。因此，不同的品種、不同個體對超排反應差異極大，超排效果很不穩定。這直接影響著胚胎移植技術的應用與推廣。

1.3 精液和人工授精次數

精液對胚胎數量、胚胎質量有較大影響。為了得到較多發育正常的胚胎，要求使用活率高、密度大的精液。

供體牛經超排處理后，應認真觀察母畜發情表現，當母牛接受其他牛爬跨時開始推算人工授精時間，一般在超排母牛發情后的12 h或24 h進行人工授精。關于授精次數，一般進行2～3次人工授精，2次授精時間間隔8～10 h可提高母牛卵子的受精率，從而可以提高可用胚胎的回收率。

1.4 胚胎因素

胚胎質量是決定胚胎移植成敗的關鍵因素。目前，通過超排生產的體內胚胎的移植妊娠率為30%～60%，高于體外受精的體外胚胎的移植妊娠率(20%～40%)。同時，不同胚齡對移植的位置要求也不同。手術法移植時，將受精卵至16-細胞的胚胎移植到輸卵管中，而將16-細胞到囊胚期的胚胎移植到子宮角內。目前，大多數采用非手術法移植胚胎，通常是在供體發情后的第7(6～8)天采集胚胎，受體的移植時間是在發情后的第7天。胚胎發育階段應與受體牛的發情期相吻合，即桑椹胚、早期囊胚、囊胚分別移植給發情第6、7、8天的受體牛。大量研究表明，無論是體內生產的胚胎還是體外生產的胚胎，鮮胚的移植成功率比冷凍胚胎的移植成功率高10%左右。

2 受體牛

2.1 受體牛的選擇

受體牛為移植的胚胎提供子宮環境，移植后的胚胎要在其體內完成附植過程，并依賴受體牛的營養供應生長發育直到分娩。因此，受體牛的選擇與飼養管理對于提高受體牛的移植可利用率、移植后的妊娠率及產犢率方面起著至關重要的作用。付靜濤等[6]對受體牛的品種、年齡、胎次、體況以及同期發情時卵巢狀況進行了研究，結果發現這些因素影響著胚胎移植妊娠率，但無顯著差異。他們認為，受體牛應盡量選擇年齡2～6周歲、1～3胎經產牛、體況中等以上、無繁殖障礙的牛。

2.2 胚齡和受體的發情同步化程度

胚胎著床是一個復雜的生理過程，受體母畜排卵后為了受精卵著床，內分泌系統與子宮內環境發生相應的變化，為接納胚胎做充分準備。在受體牛方面，植入胚胎時其子宮內環境是否與胚齡相同是保證移植成功的關鍵，而簡單易行的判斷方法就是觀察受體牛是否處于發情期的第7天。

2.3 受體牛的黃體發育狀況

關于受體牛黃體狀況對胚胎移植妊娠率的影響報道很多，而國內外專家觀點不盡一致。理論上，將胚胎移植于有孕向發育子宮的任何一側均能正常妊娠，但是由于受黃體激素分泌因素的影響，以黃體側移植時能獲得較高的妊娠率。何光中等[7]研究了受體牛黃體等級和黃體位置對胚胎移植妊娠率的影響，結果發現左側、右側卵巢的黃體移植妊娠率存在差異，其中右側卵巢的黃體移植妊娠率大于左側，但差異無統計學意義。付靜濤等[6]報道左側黃體妊娠率高于右側，且差異有統計學意義。筆者認為，若要提高胚胎移植妊娠率，在胚齡與受體發情同步化的前提下，盡量將質量好的胚胎移植到黃體質量好的受體牛。

3 操作人員的技術水平

胚胎移植工作中除了胚胎室內熟練操作的專業人員外，同樣需要掌握專業技術的胚胎移植技術人員。操作人員的技術熟練程度也是影響胚胎移植妊娠率的重要因素之一。張震等[8]認為胚胎移植所用時間長短也會影響胚胎移植妊娠率。因此，操作人員在短時間內使移植槍順利通過子宮頸，將胚胎移植到子宮角1/3～1/2處，使子宮頸盡可能減少刺激，也是提高妊娠率的措施之一。

4 受體牛的飼養管理水平

受體牛的飼養管理工作絕不能忽視，特別是胚胎著床前期更應重視和加強受體牛的飼養管理。將受體牛單獨分開飼養管理，避免不必要的爬跨行為，防止各種意外造成流產。同時，不能飼喂霉變飼料，不能飲用冰冷的水。

5 小結

總而言之，牛胚胎移植妊娠率受多種因素的影響。在生產中，應盡可能地做好胚胎移植的各個環節，從而提高牛胚胎移植妊娠率。

[1] 秦殿武,王浩,王大廣,等.不同廠家FSH制劑對草原紅牛超排及預后效果觀察[J].吉林畜牧獸醫, 2009,261(12):3-4.

[2] 李銘,吳柱月,羅蒙和,等.不同FSH種類、劑量對不同品種肉牛超排效果的試驗[J].中國畜禽業, 2008(11):18-20.

[3] 王峰,黃春華,張東,等.多種因素對牛超數排卵效果影響的研究[J].中國農學通報, 2013,29(17):19-24.

[4] 權富生,馬會民,張涌,等.紅安格斯牛超數排卵和胚胎移植受體同期發情處理[J].中國畜牧雜志,2011,47(15):19-22.

[5] 劉水濤,張光偉,張建軍,等.超排后不同發情時間對荷斯坦青年母牛回收卵數和有效胚胎率的影響[J].黑龍江動物繁殖, 2011,19(4):24-25.

[6] 付靜濤,朱士恩,李樹靜,等.影響受體牛冷凍移植胚胎效果的主要因素[J].中國畜牧雜志, 2008,44(17):14-17.

[7] 何光中,龔銘,張向鵬,等.受體牛黃體位置及黃體等級對胚胎移植效果的影響[J].貴州農業科學,2008,36(3):108-109.

[8] 張震,蔣如明,劉瑞新,等`影響牛胚胎移植成功率的主要因素分析[J].河南畜牧獸醫,2007,28(5):8-9.

重慶市重點攻關項目“重慶現代牛羊產業科技支撐示范工程戰略規劃與管理創新”(cstc2014zktjccxbx0021)。

高立芳(1976- )，女，重慶人，助理研究員，碩士，從事草食動物胚胎方面的研究。*通訊作者，研究員，博士，從事牧草栽培方面的研究。

2015-11-13

S 823

A

0517-6611(2015)35-174-02