ADAM10在結直腸癌患者血清中的表達和臨床意義

鄭佳 盛顯倉 吳婧婧 張艷

ADAM10在結直腸癌患者血清中的表達和臨床意義

鄭佳 盛顯倉 吳婧婧 張艷

目的 探討去整合素-金屬蛋白酶10（ADAM10）在結直腸癌患者血清中的表達水平與結直腸癌發生、轉移的關系及臨床意義。方法 采用酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測158例結直腸癌患者、98例結直腸息肉患者及110例正常對照組中血清ADAM10、糖類抗原19-9（CA19-9）和癌胚抗原（CEA）濃度。結果 結直腸癌組血清ADAM10水平顯著高于結直腸息肉組和對照組（P＜0.001），腫瘤Dukes分期增加，結直腸癌組血清ADAM10水平進行性升高。結直腸癌患者血清ADAM10表達水平與性別、年齡、組織類型無關（P＞0.05），與分化程度、腫瘤的浸潤深度、有無淋巴結轉移及遠處轉移密切相關（P＜0.01）。ADAM10聯合CEA、CA19-9檢測，可以顯著提高腫瘤診斷的準確性。結論 ADAM10在結直腸癌的診斷中有臨床應用價值，有潛力成為新的腫瘤標志物。

去整合素-金屬蛋白酶10 結直腸癌 腫瘤標志物

結直腸癌是常見的消化道腫瘤，其發病率在我國逐年升高，嚴重威脅人類健康。去整合素-金屬蛋白酶10（ADAM10）屬于整合素金屬蛋白酶，在重塑細胞外基質和細胞遷移中有重要作用［1］。有資料顯示，ADAM10能夠參與腫瘤細胞轉移的病理過程［2］，在胃癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌、血液系統惡性腫瘤中的表達水平異常增高［3，4］，但在結腸癌中的表達情況少有報道。本文采用ELISA法探究ADAMl0在結腸癌患者血清中的表達情況及臨床意義。報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2010年6月至2014年3月在本院就診的結直腸癌患者158例，男93例，女65例；平均年齡59.3歲。所有患者均未行放化療，經病理檢查結果證實為結直腸癌。結直腸息肉患者98例，男57例，女41例；平均年齡51歲。經病理檢查結果證實為結直腸腺瘤性息肉。正常對照組共110例，男64例，女46例；平均年齡43歲。腸鏡檢查陰性，各項生化指標正常。

1.2 ADAM10、糖類抗原19-9（CA19-9）和癌胚抗原（CEA）檢測 （1）所有對象的血標本，均于次日晨空腹采集靜脈血4ml于EDTA真空采血管中，4000rpm離心15min后分離血清，于-80℃保存待測。（2）ADAM10檢測試劑盒購自上海晶美生物技術公司，CEA及CA199試劑盒由羅氏公司提供。（3）結直腸癌組、結直腸息肉組及健康對照組ADAM10血清濃度經ELISA方法測定后繪制標準曲線，計算上述三組樣本中血清ADAM10濃度。每個樣本的最小值重復測量2次，保證變異系數始終＜10%。取結直腸癌組、結直腸息肉組及對照組血清約1ml，采用IMMUL ITE 1000 分析系統（美國DPC公司）分析血清中CEA及CA19-9水平。

1.3 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件。計量資料以（x±s）表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清中ADAM10、CEA、CA19-9表達情況 見表1。

表1 三組血清AM10、CEA、CA19-9表達水平比較（x±s）

2.2 結直腸癌患者血清ADAM10水平與Dukes分期關系 結直腸癌患者Dukes A、B、C、D期患者血清ADAM10水平分別為（193.3±20.7） pg/ml、（277.1±28.5）pg/ml、（332.8±31.9） pg/ml、（384.4±36.1） pg/ml。Dukes分期增加，結直腸癌組血清ADAM10表達水平呈進行性上述趨勢，結直腸癌患者血清ADAM10表達水平與腫瘤Dukes分期呈正相關（P＜0.05）。

2.3 ADAM10與臨床病理參數的關系 見表2。

表2 結直腸癌患者血清ADAM10表達與臨床病理參數的關系

2.4 ADAM10、CEA及CA19-9診斷結直腸癌的價值及聯合檢測的意義 根據試劑盒說明書，確定ADAM10、CEA、CA19-9的臨界值分別為150pg/ml、5ng/ml、37U/ml，大于臨界值則為陽性。檢測結直腸癌組和對照組血清ADAM10、CEA、CA19-9水平，作ROC曲線。結果顯示，結直腸癌患者血清ADAM10的ROC曲線下面積顯著大于CEA和CA19-9（P＜0.05）。ADAM10、CEA、CA19-9單個指標檢測結直腸癌的敏感性分別為43.07%、28.5%、37.3%。三者聯合檢測結直腸癌的敏感性為60.7%。結果提示，ADAM10聯合其他腫瘤標志物檢測，能顯著增強腫瘤診斷的敏感性。

3 討論

結直腸癌的臨床表現常缺乏典型癥狀，一旦發現癥狀多屬中晚期。因此，早發現、早治療是提高該病治愈率的關鍵。有資料顯示，ADAM10在惡性腫瘤中有過表達現象，能與癌癥發生發展相關的關鍵信號分子相互作用［5］。WU等［6］報道ADAM10在腫瘤中表達升高，Black等認為ADAM10在重塑細胞外基質和細胞遷移過程中有重要的作用［1］。據國內外相關研究報道，ADAM10在腫瘤細胞生長、浸潤及轉移過程中，主要通過自身蛋白酶降解胞外基質蛋白，使癌細胞從腫瘤原發灶中游離出來，并通過自身整合素介導癌細胞與正常細胞反應，介導胞間信號傳遞，進而促進癌細胞向鄰近及遠處轉移［7］，如ADAM10可通過介導神經型鈣粘蛋白（N-cadherin）裂解從而促進膠質瘤細胞遷移［8］。Millichip等［9］研究發現ADAM10能降解基底膜IV型膠原，促進惡性腫瘤轉移。另有學者報道ADAM10可以降解淀粉前體蛋白和L1粘附分子，這有利腫瘤細胞突破細胞外基質而利于腫瘤轉移［10，11］。本文結果顯示Dukes分期增加，結直腸癌患者血清ADAM10水平進行性升高，提示ADAM10的過度表達與腫瘤的發生、生長、浸潤、轉移有關。單項檢測結直腸癌患者血清中ADAM10水平，其敏感性達43.0%，優于CEA和CA19-9。結直腸癌患者血清ADAM10聯合CEA及CA19-9檢測，診斷敏感性達60.7%，顯著高于單項檢測（P＜0.05）。傳統的腫瘤標志物CEA及CA19-9在結直腸癌組血清中的表達水平較結直腸息肉組和健康組明顯升高（P＜0.01）。結直腸癌患者血清ADAM10表達水平與患者的性別、年齡、組織類型無關（P＞0.05），與腫瘤的分化程度、腫瘤浸潤深度，有無淋巴結轉移及遠處轉移相關（P＜0.01），提示ADAM10在結直腸腫瘤的生長演化過程中起到重要作用。

1 Black RA, White JM． ADAMs: focus on the protease domain ．Curr Opin Cell Biol, 1998,10(5):654～659．

2 Satsuki Mochizuki, Yasunori Okada． ADAMs in cancer cell proliferation and progression． Cancer sci, 2007, 98(5):621～628．

3 Mazzocca A, Coppari R,De Franco R, et al． A secreted form of ADAM9 promotes carcinoma invasion through tumor-stromal interaction ．Cancer Res, 2005,65(11):4728～4738．

4 Zhao AJ, Zheng MG, Wang GC, et al．Silencing ABCEI increase E-cadherin expression and decrease cell invasion in 95D/NCI-H446 lung carcinoma cells．Prog Biochem Biophys, 2010, 37(8):892～896．

5 Stoeck A, Keller S, Riedle S, et al． A role for exosomes in the constitutive and stimulus-induced ectodomain cleavage of L1 and CD44．Biochem J,2006,393(Pt 3):609～618．

6 Wu E, Croucher PI, McKie N, et al． Expression of members of the novel membrane linked metalloproteinase family ADAM in cells derived from a range of haematological malignancies．Biochem Biophys Res Commun, 1997,235(2):437～442．

7 Rocks N, Paulissen G, Quesada Calvo F, et al． Expression of a disintegrin and metalloprotease (ADAM and ADAMTS) enzymes in human non-small-cell lung carcinomas (NSCLC) ．British Journal of cancer , 2006,94(5):724～730．

8 Kohutek ZA, diPierro CG, Redpath GT, et al． ADAM-10 mediated N-cadherin cleavage is protein kinase C-alpha dependent and promotes glioblastoma cell migration． Neurosci, 2009,29(14):4605～4615．

9 Millichip MI, Dallas DJ, Wu E, et al． The metallodisintegrin ADAM10(MADM) from bovine kidney has type IV collagenase activity in vitro． Biochem Biophys Res Commun, 1998,45(2):594～598．

10 Gavert N, sheffer M, Raveh S, et al． Expression of L1-CAM and ADAM10 in human colon cancer cells induces metastasis． Cancer Res, 2007, 67(16):7703～7712．

11 Kohga K, Takehara T, Tatsumi T,et al． Anticancer chemotherapy inhibits MHC class I-related chain． A ectodomain shedding by down regulating ADAM10 expression in hepatocellular carcinoma． Cancer Res, 2009, 69(20):8050～8057．

Objective To investigate the relationship between the expression lever of ADAM10 in serum of patients with occurrence and metastasis of colorectal carcinoma，and analyse its clinical significance. Methods Serum samples from 158 patients with colorectal cancer，98 patients with colorctal polyps and 110 healthy human were detected by double antibody sandwich ELISA method. At the same time，to determine the serum CA19-9，CEA evels in specimens. Results ADAM10 level in colorectal cancer patients was significantly higher than that patients with colorctal polyps and normal control.（P＜0.001）.Following with the increased Dukes stage，the serum ADAM10 level was increased. Serum ADAM10 level in the colorectal carcinoma was correlated with the differentiation，infiltration extent，lymphoid node diversion，distant metastasize（P＜0.01），and it was no relationship with the sex，age，structure type（P＞0.05）. ADAM10 combinations of CEA and CA19-9 can increased the positive diagnosis rate of tumor. Conclusion ADAM10 has a certain clinical value in diagnosis of colorectal cancer，has the potential to become a nover tumor marker.

ADAM10 colorectal cancer tumor marker

浙江省臺州市黃巖區基金（2011062-3）

318020浙江省臺州市第一人民醫院消化內科