IHC與FISH檢測118例乳腺浸潤性導管癌HER-2的對比分析*

朱文標鄭少秋盧善明謝壽城

IHC與FISH檢測118例乳腺浸潤性導管癌HER-2的對比分析*

朱文標①鄭少秋①盧善明①謝壽城①

目的：比較IHC與FISH檢測乳腺浸潤性導管癌HER-2的一致性。方法：分別用IHC和FISH對118例乳腺浸潤性導管癌HER-2進行檢測，比較兩者檢測結果的相關性。結果：118例浸潤性乳腺導管癌標本，IHC檢測結果為：14例為（-）；20例為（1+），55例為（2+），29例為（3+）。FISH檢測結果為：53例為＞2.2，64例為＜1.8，1例為1.8-2.2。IHC檢測HER-2陽性的病例FISH檢測中陽性符合率96.6％（28/29），IHC檢測HER-2陰性的病例FISH檢測均為陰性，符合率100％（34/34）。IHC檢測HER-2（2+）的55例患者中有25例經FISH檢測證實HER-2陽性，30例呈陰性。FISH檢測共發現5例17號染色體多體，其發生率為4.24％。IHC檢測到8例乳腺癌HER-2表達存在異質性，異質性在FISH檢測中亦得到證實。結論：IHC與FISH檢測乳腺浸潤性導管癌HER-2具有高度一致性，免疫組化HER-2（2+）病例需行FISH檢測。

浸潤性導管癌； HER-2； 免疫組織化學； 熒光原位雜交

正確檢測和評定乳腺癌的HER-2蛋白表達和基因擴增狀態對乳腺癌的臨床治療和預后判斷至關重要，HER-2檢測結果不僅涉及患者的預后評估，而且是篩選是否適合針對HER2的靶向治療的先決條件，并且可以對內分泌治療、化療方案的選擇起到指導作用[1]。近年，乳腺癌組織中HER-2狀態檢測的應用技術越來越多。大致分為：（1）基于HER-2蛋白水平的檢測，如免疫組織化學（IHC）。（2）基于HER-2基因DNA水平的檢測，如熒光原位雜交（FISH）。本文收集本科行IHC檢測及FISH的乳腺浸潤性導管癌病例118例，比較IHC與FISH檢測乳腺浸潤性導管癌HER-2的一致性，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013年11月-2014年10月本科行IHC檢測及FISH的乳腺浸潤性導管癌病例，共118例。均為女性，其中穿刺標本12例，切除標本106例。

1.2 方法 HER-2基因擴增檢測試劑盒購于廣州安必平公司。免疫組化HER-2/neu多克隆抗體購自福州邁新。

1.3 檢測結果判定標準 參照《乳腺癌HER2檢測指南（2014版）》[2]對檢測結果進行判定，并由本院2名經專業培訓的病理醫師進行判讀。

1.3.1 IHC檢測HER-2的判定方法 對乳腺浸潤性癌的癌細胞膜進行定位后染色。（1）陰性：存在≤10％的不完整細胞膜染色，或者無浸潤性癌細胞的染色，則記為（-）；（2）弱陽性：＞10％的浸潤癌細胞呈現不完整的、微弱的細胞膜染色，記為（1+）；（3）可疑陽性：有兩種情況，第一種為＞10％的浸潤癌細胞呈現不完整和/或弱至中等強度的細胞膜染色，第二種為≤10％的浸潤癌細胞呈現強而完整的細胞膜染色，記為（2+）；（4）強陽性：＞10％的浸潤癌細胞呈現強而完整的細胞膜染色，記為（3+）[3]。

1.3.2 FISH檢測HER-2的判定方法 首先對HE染色切片中的癌細胞區域進行確定，并選擇出滿意的雜交信號區域，采用100倍油鏡經特意性單通道濾光片對癌細胞核中FISH結果進行觀察，并進行cutoff值和信號計數的計算。按照試劑說明書的要求，記錄60個相連續的癌細胞核中的雙色信號：（1）如紅色、綠色兩種信號的比值大于2.2，或者眾多信號間連接成團時，則不用計數，可歸入基因擴增；（2）如兩信號的比值處于1.8-2.2之間，則重新再計數60個相連續的癌細胞。若結果同前，則在FISH的檢測報告中注釋；（3）如紅色、綠色兩信號間比值小于1.8，不存在HER-2基因的擴增；如不同癌細胞中的HER-2基因擴增現象具有異質性，則需要另選癌區及計數，并注明在檢測報告中[4]。

1.4 統計學處理 本研究中數據的收集與處理均由本院數據處理中心專門人員進行，以保證數據真實性與科學性。初步數據錄入EXCEL（2003版）進行邏輯校對與分析；并應用SPSS 22.0對資料進行一般描述，計數資料用（％）表示，采用 χ2檢驗；并進行IHC及FISH一致性檢驗，計算kappa值和P值，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 IHC及FISH檢測結果 IHC檢測結果為：（-）病例比例為11.86％；（1+）病例占16.95％，（2+）病例占46.61％，（3+）病例占24.58％。FISH檢測結果為：53例為比值＞2.2，64例比值＜1.8，1例比值為1.8-2.2。見表1。

表1 本組浸潤性乳腺癌IHC及FISH檢測HER-2的基因分布情況比較 例（％）

2.2 本組118例病例中HER-2在伴或不伴17號染色體患者中的基因分狀態分布狀況分析 IHC檢測到8例乳腺癌HER-2表達存在異質性，其發生率為6.78％，異質性在FISH中亦得到證實。FISH檢測共發現5例17號染色體多體，其發生率為4.24％，均為IHC（3+）病例。見表2。

表2 本組浸潤性乳腺癌HER-2的基因分布狀況分析 例（％）

2.3 IHC及FISH檢測一致性分析 IHC陽性病例29例，FISH檢測比值＞2.2有28例，1例為1.8-2.2；IHC陰性病例34例，FISH檢測比值均為＜1.8。免疫組化陽性病例及陰性病例與FISH符合率為98.41％（62/63），kappa值為0.968，P=0.000，具有高度一致性。

3 討論

HER-2是人類17q21染色體上的基因。該基因的表達不僅和腫瘤的發生、發展相關，更是臨床預后評估的重要指標[5]。乳腺癌組織中HER-2狀態檢測的應用技術越來越多，關于基于HER-2蛋白水平的檢測，與基因HERR-2的DNA水平的檢測相比，哪種方法更為準確可靠，大多數學者的爭論甚多，而爭論的焦點在于對17號染色體的多體性的認識[6]。目前研究顯示整條17號染色體的多體罕見，CEPl7的多體并不能代表整條第17號染色體多體，部分乳腺癌中17號染色體存在HER-2基因和著絲粒的共同擴增[7]。越來越多的學者認為，HER2拷貝數對于HER2基因擴增的判斷更為重要[8]。因此，美國ASCO/CAP 2013版HER-2檢測指南及我國《乳腺癌HER2檢測指南（2014版）》[2]均強調質量控制，同時推薦了IHC及ISH（in situ hybridization，原位雜交）兩種方法。

研究資料顯示，IHC檢測為-、1+、2+、3+中FISH的符合率分別分：100％、100％、45.45％、96.55％；同時在本研究的118例病例中，IHC與FISH檢測乳腺浸潤性導管癌HER-2的結果具有高度一致性。與Viale等學者的研究結果相似[9]。IHC是一項廣泛而實用的技術，具有檢測成本低、操作簡單、耗時短、可實現自動化檢測和染色后切片便于存檔等優點，閱片時可同時進行組織形態學評價，因此，成為乳腺癌患者檢測HER-2擴增最常使用的方法[10]。但IHC是一種半定量的方法，結果判定的標準為描述性語言，判讀的主觀影響較大，未經嚴格培訓的醫師判定一致性偏低，較多的病例歸入不確定病例[11-12]。盡管ISH成本較貴，但具有高度的穩定性及重復性，尤其是雙探針FISH加入了17號染色體著絲粒探針作為內對照。乳腺癌中常見17號染色體的多體現象，在CEP17中平均每個細胞中都至少3個。相關研究顯示，17號染色體的多體會增加浸潤導管癌中HER-2基因的拷貝數，從而導致了HER-2基因蛋白的過表達，最終造成了IHC檢測假陽性結果[13]。FISH的結果判定更為客觀，主觀影響很小，經培訓的醫師間判定的一致性極高，已成為HER-2檢測的“金標準”[14]，可作為IHC的有益的補充。經閱讀相關文獻并結合本研究實踐后，我們認為免疫組化法檢測為（3+）的病例中，IHC和FISH具有較高一致性，可作為診斷的直接依據；而對于診斷為（-）和（1+）的病例而言，IHC結果為陰性者，可選擇性予以FISH檢測；但檢測結果為（2+）的患者，由于兩種檢測方法的一致性較一般，因此需重點對患者予以FISH檢測[15-16]。

綜上所述，對于IHC 2+的病例，建議行FISH檢測。對于大多數IHC 2+的病例，FISH均能明確HER-2狀態，當然，對于FISH無法確定HER-2狀態的標本，應積極選擇其他方法（如PCR、RNA-ISH等）進行檢測。

[1]趙偉志，葉曉霞.乳腺浸潤性微乳頭狀癌臨床病理學觀察及免疫組化分析[J].中國醫學創新，2014，3（19）：40-43.

[2]《乳腺癌HER2檢測指南（2014版）》編寫組.乳腺癌HER2檢測指南（2014版）[J]. 中華病理學雜志，2014，43（4）：262-267.

[3]Susini T，Bussani C，Marini，et al.Preoperative assessment of HER-2/neu status in breast carcinoma： the role of quantitative realtime PCR on core-biopsy specimens[J].Gynecologic Oncology，2010，116（2）：234-239.

[4]譚敏華，雷偉華，譚冬玲，等.浸潤性乳腺癌ER、PR、HER-2、E-cadherin、CK5/6檢測與臨床預后關系[J].臨床與實驗病理學雜志，2011，27（9）：933-938.

[5]趙坡，姜學革，李曉瑛，等.FISH檢測乳腺癌HER-2基因擴增及17號染色體多體狀況及其臨床病理學意義的分析[J].中華腫瘤防治雜志，2011，18（9）：680-683.

[6]王立波，王彥榮，席妍，等.mTOR在HER-2陰性乳腺癌中的表達及意義[J].中國實驗診斷學，2014，19（8）：1262-1264.

[7]Goud K I，Dayakar S，Vijayalaxmi K，et al.Evaluation of HER-2/ neu status in breast cancer specimens using immunohistochemistry（IHC） &；fluorescence in-situ hybridization （FISH） assay[J].The Indian journal of medical research，2012，135（3）：312-317.

[8]張江宇，王頎，郜紅藝，等.IHC和FISH檢測乳腺癌HER-2表達的對比研究[J].中華腫瘤防治雜志，2013，20（6）：436-439.

[9]Poonam Panjwani，Sridhar Epari，Arti Karpate，et al.Assessment of HER-2/neu status in breast cancer using fluorescence in situ hybridization &；immunohistochemistry：Experience of a tertiary cancer referral centre in India[J].The Indian Journal of Medical Research，2010，132（3）：287-294.

[10]舒文環，仲偉霞.乳腺癌原發灶與轉移灶HR和HER-2一致性的研究現狀[J].中華腫瘤防治雜志，2011，18（9）：734-736.

[11]劉琪，左文述，王新昭，等.乳腺癌原發灶和淋巴結轉移灶激素受體及HER-2與Ki-67表達相關性分析[J].中華腫瘤防治雜志，2013，20（15）：1153-1157.

[12]曹丹霞，何建蓉，沈坤煒，等.激素受體和HER-2及Ki-67預測乳腺癌新輔助化療療效價值的分析[J].中華腫瘤防治雜志，2012，19（13）：1000-1003.

[13]Han Zhang，Guoping Ren，Xiaoling Wang，et al.HER-2 gene amplification by fluorescence in situ hybridization（FISH） compared with immunohistochemistry （IHC） in breast cancer：a study of 528 equivocal cases.[J].Breast Cancer Research and Treatment，2012，134（2）：743-749.

[14]呂海軍，李峰，吳明霞，等.PCR分析FISH與IHC檢測人乳腺癌組織中HER-2表達的差異性[J].中國保健營養（中旬刊），2013，15（5）：51-52.

[15]張青，李小歡，楊真，等.110例乳腺癌患者HER-2基因擴增狀況及其與臨床病理特征的關系[J].中國醫藥導報，2013，10（11）：86-88.

[16]Al Khattabi H，Kelany A，Buhmeida A，et al.Evaluation of HER-2/ neu gene amplification by fluorescence in situ hybridization and immunohistochemistry in saudi female breast cancer[J].Anticancer Research，2010，30（10）：4081-4088.

The HER-2 Contrast Analysis on 118 Cases with Breast Invasive Ductal Carcinoma by IHC and FISH Detection/

ZHU Wen-biao，ZHENG Shao-qiu，LU Shan-ming，et al.//Medical Innovation of China，2015，12（11）：005-007

Objective：To compare the consistency of HER-2 in breast infiltrating ductal carcinoma by IHC and FISH detection.Method：HER-2 of 118 cases with breast invasive ductal carcinoma were tested by FISH and IHC detection，and compared the results correlation.Result：118 specimens of invasive ductal carcinoma were seleced， The results tested by IHC were as follows：14 cases（-）；20 cases（1+），55 cases（2+），29 cases （3+）.The results tested by FISH were as follows： 53 cases ＞2.2， 64 cases ＜1.8，1 case was 1.8-2.2.HER-2 positive coincidence rate was 96.6％（28/29） by IHC detection in positive cases by FISH detection，HER-2 negative by FISH were in negative of IHC detection， the coincidence rate was 100％（34/34）.25 HER-2 positive cases by FISH detection were among 55 cases of HER-2（2+） by IHC detection， and 30 were the negative.5 cases on chromosome multi-body in 17 were found by FISH detection，its incidence rate was 4.24％.HER-2 expression in 8 cases with of breast cancer exists heterogeneity by IHC detection，and the heterogeneity was also confirmed in FISH detected.Conclusion：HER-2 of breast infiltrating ductal carcinoma by IHC detection was high consistency with FISH detection，HER-2 cases（2+） by immunohistochemical need to be detected by FISH.

Infiltrating ductal carcinoma； HER-2； Immunohistochemistry； Fluorescence in situ hybridization

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.11.002

2014-11-07） （本文編輯：陳丹云）

梅州市科技計劃項目（2012B68）

①廣東省梅州市人民醫院 廣東 梅州 514031

朱文標

First-author’s address：Meizhou People’s Hospital，Meizhou 514031，China