單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂對缺氧缺血性腦病患兒血清NSE S-100B的影響

裴雪梅 高 然 張文武 張國英 萬勝明

廣東深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院新生兒科 深圳 518101

單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂對缺氧缺血性腦病患兒血清NSE S-100B的影響

裴雪梅 高 然 張文武 張國英 萬勝明

廣東深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院新生兒科 深圳 518101

目的 探討單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂（GM1）對缺氧缺血性腦?。℉IE）患兒血清NSE、S-100B水平的影響及其作用機(jī)制。方法 隨機(jī)選擇產(chǎn)科同期出生1d的健康足月新生兒20例作對照組，將40例HIE患兒隨機(jī)分為常規(guī)治療組（20例）和GM1治療組（20例），GM1治療組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上于生后第2天加用GM1靜滴，20mg/d，連續(xù)用藥7d。常規(guī)治療組進(jìn)行常規(guī)治療。3組新生兒均于生后第1天（治療前）、第8天（治療后）時采集血液標(biāo)本，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法進(jìn)行血清NSE、S-100B的檢測。結(jié)果 治療前，2組HIE患兒血清中NSE、S-100B的水平高于正常新生兒（P＜0.01）；常規(guī)治療組與GM1治療組血清NSE、S-100B水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。2組第8天血清NSE、S-100B水平均低于第1天（P＜0.01）。治療后，HIE患兒血清中NSE、S-100B水平高于正常對照組（P＜0.01）。GM1治療組血清NSE、S-100B水平下降率大于常規(guī)治療組（P＜0.01）。結(jié)論 HIE患兒腦組織中神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞均有不同程度的損傷，動態(tài)檢測血清NSE、S-100B水平，可能有助于HIE的早期診斷和判斷HIE腦損傷的修復(fù)程度，GM1對神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞均有修復(fù)作用。

單唾液酸四已糖神經(jīng)節(jié)苷脂（GM1）；缺氧缺血性腦?。℉IE）；神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）；S-100B

新生兒缺氧缺血性腦?。╤ypoxic-ischemic encephalopathy，HIE）是導(dǎo)致新生兒死亡和嬰幼兒神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙的主要原因之一。單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂（monosialotetrahexosylganglioside，GM1）可促進(jìn)神經(jīng)重構(gòu)，對缺氧缺血引起的腦損傷有修復(fù)作用，臨床已廣泛用于治療HIE，并取得明顯療效［1-3］，但其修復(fù)機(jī)制尚不明確。神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）是神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞產(chǎn)生的特異性生化標(biāo)志物，S-100B是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)記蛋白。正常情況下，血中NSE和S-100B含量甚少。本研究通過檢測HIE患兒在GM1治療前和治療后血清中NSE、S-100B水平的變化，了解神經(jīng)系統(tǒng)不同細(xì)胞的損傷程度，探討GM1修復(fù)作用的機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 納入對象 全部病例為2012-05—2013-08入住深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院的HIE患兒，符合HIE診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］和下列條件：（1）入院日齡≤24h，出生體質(zhì)量≥2 500g的足月新生兒。（2）無嚴(yán)重先天畸形，如膈疝、腦發(fā)育不全。（3）無大量顱內(nèi)出血、無嚴(yán)重呼吸道阻塞性疾病、無貧血。

按患兒出生時間編號，查隨機(jī)表格分為GM1治療組和常規(guī)治療組各20例，2組一般情況和臨床分度差異無統(tǒng)計學(xué)意義（HIE分度χ2＝0.410，P＞0.05）；隨機(jī)選擇產(chǎn)科同期出生1d的健康足月新生兒20例作對照組。保證3組性別、日齡、出生體質(zhì)量、胎齡、生產(chǎn)方式差異無統(tǒng)計學(xué)意義（性別：χ2＝2.545；日齡：F＝0.517；出生體質(zhì)量：F＝0.222；胎齡：F＝0.166；生產(chǎn)方式：χ2＝0.17；P均＞0.05）。

1.2 治療方法 根據(jù)新生兒HIE治療方案，對2組HIE患兒均進(jìn)行相同的常規(guī)治療（對癥和支持治療）。GM1治療組于出生24h后（第2天）靜滴GM1（申捷，齊魯制藥有限公司），20mg/d，連續(xù)用藥7d。

1.3 檢測指標(biāo)

1.3.1 標(biāo)本采集：2組HIE患兒均于出生后第1天和生后第8天（即GM1治療前和治療后）分別采取股靜脈血3mL，同時采取正常對照組新生兒股靜脈血3mL，置于無熱原和內(nèi)毒素的試管內(nèi)，3 000rpm離心10min，分離血清，去除溶血標(biāo)本，每份血清分為2份，按組標(biāo)記，-70℃冰箱保存待測。

1.3.2 指標(biāo)檢測：采用NSE試劑盒，用雙抗體夾心ABCELISA法進(jìn)行血清NSE的檢測；采用S100B蛋白試劑盒，用雙抗體夾心ABC-ELISA法進(jìn)行血清S100B的檢測（ELISA試劑盒有上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司提供）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)（ˉx±s）表示，進(jìn)行正態(tài)檢驗和方差齊性檢驗，組間比較采用配對設(shè)計的t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，均數(shù)的兩兩比較采用LSD檢驗。P ＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 治療前后各組血清NSE、S-100B水平變化比較（1）治療前（第1天），2組HIE患兒血清中NSE、S-100B的水平高于正常新生兒，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；常規(guī)治療組與GM1治療組血清中NSE、S-100B水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（2）3組第8天血清NSE、S-100B水平均低于第1天，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（3）治療后第8天，HIE患兒血清中NSE、S-100B水平高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

表1 3組治療前后血清NSE、S-100B水平變化比較（ˉx±s）

2.2 治療前后各組血清NSE、S-100B下降率比較 2組HIE患兒血清中NSE、S-100B水平下降率大于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；GM1治療組血清中NSE、S-100B水平下降率大于常規(guī)治療組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表2。

表2 治療前后3組血清NSE、S-100B下降率比較（ˉx±s）

3 討論

NSE主要存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中，正常血液中NSE含量甚微，波動范圍小，相對穩(wěn)定；腦損傷后神經(jīng)細(xì)胞受損，血腦屏障破壞，NSE釋放入腦脊液及血液。研究表明，NSE是早期判斷神經(jīng)細(xì)胞損傷的靈敏指標(biāo)，且與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)［5］，血清NSE水平可以評估HIE的嚴(yán)重程度和神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥發(fā)生率［6］。S-100B（S-100Bprotein，S-100B）是一種酸性鈣結(jié)合蛋白，分子是由α亞基和β亞基組成，特異性地存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的星形、少突、大、小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)，被認(rèn)為是神經(jīng)膠質(zhì)的標(biāo)記蛋白。研究表明，血清S-100B水平可作為腦損傷的敏感性和特異性標(biāo)記物［7-8］。本研究結(jié)果顯示，HIE患兒經(jīng)歷缺氧缺血以后，血清中NSE、S-100B水平均顯著升高，表明HIE患兒的神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞均受到不同程度的損傷。本文結(jié)果與上述文獻(xiàn)報道一致。由此可見，臨床上遇有缺氧缺血病史并有神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和體征的患兒，同時檢測外周血中NSE、S-100B水平的變化，則有助于了解患兒有無神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞損傷及其損傷程度。

本文結(jié)果顯示，對照組健康新生兒和HIE組患兒第8天血清NSE、S-100B水平均低于第1天水平，表明在正常情況下和疾病狀態(tài)下，NSE、S-100B水平在新生兒體內(nèi)可能存在自然降解過程。尚未見文獻(xiàn)報道這一現(xiàn)象，但新生兒屬于特殊的群體，體內(nèi)多種生化指標(biāo)可隨著日齡而變化（如白細(xì)胞、心肌酶、膽紅素等）。因此，在把NSE、S-100B水平作為判斷神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞損傷及其損傷程度的指標(biāo)時，應(yīng)考慮新生兒日齡因素對其造成的影響。本文結(jié)果顯示，治療后（第8天），HIE患兒常規(guī)治療組和GM1治療組血清中NSE、S-100B水平高于正常對照組，表明經(jīng)過7d治療后，神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞尚未完全恢復(fù)，仍需繼續(xù)治療?？赡苁且虮狙芯窟x擇的HIE患兒中重度的比例（65％）較大，腦損傷的恢復(fù)需要較長時間所致。

GM1是含唾液酸的糖神經(jīng)鞘脂，存在于哺乳類動物細(xì)胞膜，是神經(jīng)細(xì)胞膜的組成成分，在神經(jīng)發(fā)生、生長、分化過程中起必不可少的作用，對于損傷后的神經(jīng)修復(fù)也非常重要。研究表明，當(dāng)受到缺氧缺血刺激時，新生大鼠腦內(nèi)的GM1減少，從而引起神經(jīng)細(xì)胞死亡和大腦發(fā)育延遲［9］；外源性GM1對缺氧缺血引起的腦白質(zhì)損傷有保護(hù)作用，外源性GM1是唯一可以透過血腦屏障的一種節(jié)神經(jīng)苷脂，可進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，并整合到神經(jīng)細(xì)胞膜發(fā)揮作用［10］；GM1在圍生期缺血缺氧性腦損傷中具有雙重作用，急性期可拮抗興奮性氨基酸的興奮性神經(jīng)毒性，保護(hù)細(xì)胞膜完整性，抑制一氧化氮（NO）合成和凋亡；恢復(fù)期可增強(qiáng)神經(jīng)營養(yǎng)因子的作用，促進(jìn)修復(fù)［11］。本研究結(jié)果顯示，GM1治療組血清中NSE、S-100B水平下降率明顯大于常規(guī)治療組，即GM1對神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞均有修復(fù)作用。其修復(fù)機(jī)制可能為：在HIE患兒中，缺氧缺血使神經(jīng)細(xì)胞受到損傷，神經(jīng)細(xì)胞膜上的GM1減少，細(xì)胞膜的完整性受到破壞，血腦屏障的通透性增加，NSE、S-100B釋放入腦脊液及血液；而外源性的GM1可透過血腦屏障，進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，與神經(jīng)細(xì)胞膜結(jié)合，保證細(xì)胞膜的完整性，且能促進(jìn)神經(jīng)元萌發(fā)突起，提供充足的營養(yǎng)與能量，促進(jìn)受損細(xì)胞的修復(fù)和再生；同時可對抗興奮性氨基酸和自由基的神經(jīng)毒性，并減少自由基對細(xì)胞膜的損害。GM1對HIE患兒腦損傷的具體修復(fù)機(jī)制，以及是否可通過動態(tài)觀察血清中NSE、S-100B的水平調(diào)整臨床治療HIE的時間，為GM1的使用療程提供實驗室依據(jù)，有待進(jìn)一步研究。

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（收稿2014-03-05）

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1673-5110（2015）04-0064-02