膠體金免疫層析試紙條與ELISA檢測豬藍耳病抗體的比對試驗

宋忠旭，雷 彬，李良華，孫 華，彭先文，梅書棋，李明波，陳明銀，吳 飆

（1.湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所，湖北 武漢 430064；2.武漢市江夏區畜牧獸醫局，湖北 武漢 430200；3.通城縣畜牧獸醫局，湖北 咸寧 437400）

膠體金免疫層析試紙條與ELISA檢測豬藍耳病抗體的比對試驗

宋忠旭1，雷 彬1，李良華1，孫 華1，彭先文1，梅書棋1，李明波1，陳明銀2，吳 飆3

（1.湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所，湖北 武漢 430064；2.武漢市江夏區畜牧獸醫局，湖北 武漢 430200；3.通城縣畜牧獸醫局，湖北 咸寧 437400）

膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍耳病抗體的結果中強陽性、中陽性、弱陽性、陰性分別為48.67%、18.58%、31.86%、0.88%，檢測豬藍耳病抗體合格率99.12%；ELISA檢測豬藍耳病抗體合格率95.58%，符合率為96.43%。膠體金免疫層析試紙條能夠評價豬藍耳病疫苗臨床免疫狀況，可進行豬藍耳病抗體的定性檢測。

豬藍耳病；膠體金免疫層析試紙條；ELISA ；抗體比對

豬藍耳病又稱豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS），是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的以母豬繁殖障礙、呼吸系統疾病、高熱和神經癥狀為特征的傳染病，是影響養豬生產的最重要疫病之一[1]。

結合前期豬群PRRS臨床流行病學、PRRSV感染和抗體狀況的監測分析，我們確定母豬免疫方案是產后3周接種豬藍耳病JXA-1R活疫苗，并與豬瘟疫苗間隔1周以上。為了驗證免疫效果，用IDEXX公司ELISA試劑盒進行血清抗體檢測，同時，進行了膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍耳病抗體的比對試驗，現將試驗結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 血清樣本的采集

抽樣113頭免疫豬藍耳病疫苗后3～4周的成年母豬，前腔靜脈采血，離心血液，將同一頭豬的血清分成2份，一份用于ELISA檢測豬藍耳病抗體，另一份用于膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍耳病抗體。

1.2 ELISA檢測豬藍耳病抗體

將用于ELISA檢測的血清，冷藏送至華中農業大學，用美國IDEXX公司ELISA試劑盒進行檢測，依據標準為國家生豬產業技術體系方法，IDEXX：S/P≥0.4判定為陽性；S/P＜0.4判定為陰性。

1.3 膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍耳病抗體

1）膠體金免疫層析試紙條，由河南省農業科學院動物免疫學重點實驗室提供，密封、干燥、4 ℃保存。

2）將試紙條從冰箱中取出，待其恢復至室溫再打開密封使用。

3）根據已編號的待檢血清樣品份數取出稀釋杯，每杯加入200μL（約7滴）的稀釋液，取1μL的待檢樣品加入對應的稀釋杯中混勻，1∶200稀釋樣品，取出試紙卡編號、平放，取稀釋好的樣品溶液100μL（約4滴）加入相應的試紙卡樣品中，靜置5～10 min后觀察結果。

4）結果判定：對照樣品 陽性對照應出現兩條紅線（檢測線和質控線），陰性對照只出現一條紅色質控線。

被檢樣品 視窗區出現兩條紅色線（檢測線和質控線），檢測線明顯強于質控線時判為強陽性，可記為“+++”；檢測線與質控線顯色強度相當時判為中陽性，可記為“++”；檢測線明顯弱于質控線時判為弱陽性，可記為“+”；只出現一條紅色質控線時判為陰性，可記為“-”；質控線不顯紅色時，表示操作有誤或試紙失效。

2 結果

膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍耳病抗體，結果如表1。膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍耳病抗體與ELISA法檢測豬藍耳病抗體，比對結果見表2。

表1 膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍耳病抗體結果

表2 膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍耳病抗體與ELISA法檢測豬藍耳病抗體比對結果

3 討論

1）膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍耳病抗體的結果中強陽性、中陽性、弱陽性、陰性分別為48.67%、18.58%、31.86%、0.88%，說明膠體金免疫層析試紙條能夠評價豬藍耳病疫苗臨床免疫狀況，為豬藍耳病免疫提供參考。

2）膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍耳病抗體合格率99.12%，ELISA檢測豬藍耳病抗體合格率95.58%，膠體金免疫層析試紙條比ELISA法檢測豬藍耳病抗體敏感，與金顏輝等的結果不一致[2]，與劉凱等的結論不一致[3]，影響膠體金標記蛋白質質量的因素很多[4]，說明膠體金免疫層析試紙條還需要進一步調整和完善，但是，膠體金免疫層析試紙條檢測豬藍耳病抗體與ELISA檢測豬藍耳病抗體符合率為96.43%，說明膠體金免疫層析試紙條可以進行豬藍耳病抗體的定性檢測。

3）膠體金免疫層析試紙條可用于檢測豬藍耳病毒感染或活疫苗免疫后血清抗體，只要知道豬群藍耳病的免疫背景，就可以診斷豬群是否感染了豬藍耳病，是未來畜禽疾病診斷的一種新的手段[5]。

4）產品包含試紙條、樣品稀釋液、稀釋杯、滴管、陽性對照和陰性對照，操作簡便。

4 結論

由于膠體金免疫層析試紙條中膠體金標記蛋白質是一物理結合過程，結合牢固，很少引起蛋白質活性改變，所以試劑非常穩定，不受溫度等外界因素影響，可隨身攜帶，隨時檢測，檢測結果也可長期保存，能夠用于豬血清中豬藍耳病抗體的定性檢測，非常適合于基層獸醫和相關技術人員、養殖場戶對豬藍耳病的診斷、抗體水平的快速監測。

[1] 孫淑清，王劍.斷奶仔豬藍耳病的診治[J].中國獸醫科技，2003，33(11)：61-62.

[2] 金顏輝，黃印堯，張長弓，等.應用金免疫層析技術檢測豬瘟抗體的研究[J].中國動物檢疫，2004，21(5)：26-27.

[3] 劉凱，劉忠清，李文德.牛出血性敗血癥膠體金免疫層析快速診斷方法的建立[J].動物醫學進展，2012，33(11)：134-136.

[4] 黃芬，葉紹輝，龔振明.免疫層析快速診斷試紙條的制備及其應用[J].當代畜牧，2006（8）：20-22.

[5] 張鳳珍.免疫膠體金技術的基本原理及其在獸醫臨床中應用的研究進展[J].畜牧獸醫科技信息，2009（1）：7-9.

2015-08-22）

國家科技支撐計劃項目(2011BAD28B01-3)、國家生豬產業技術體系項目(CARS-36)、湖北省農業科技創新中心創新團隊項目(2011-620-001-003)、湖北省重大人才工程高端人才引領培養計劃

宋忠旭（1969-），男，高級畜牧師，研究方向豬育種及生產管理，E-mail:songzx365@163.com

梅書棋（1971-），男，研究員，研究方向豬遺傳育種，E-mail:msqlfe@163.com