豬藍耳病與豬瘟混合感染的診斷報告

李樹東

（1.黑龍江農業經濟職業學院動物科技分院，黑龍江 154041；2.牡丹江浩博動物保健科技服務中心，黑龍江 牡丹江 154041）

豬藍耳病與豬瘟混合感染的診斷報告

李樹東1，2

（1.黑龍江農業經濟職業學院動物科技分院，黑龍江 154041；2.牡丹江浩博動物保健科技服務中心，黑龍江 牡丹江 154041）

黑龍江省牡丹江市某豬場飼養生產母豬120余頭，2015年5月產房哺乳仔豬和保育仔豬開始發病，10～15日齡哺乳仔豬表現為腹瀉排黃色水樣糞便、發熱、食欲廢絕、呼吸加快（40～60次/min），呈腹式呼吸，已有5窩感染發病，幾乎全部死亡。保育豬主要表現為消瘦、發熱、喘，慢慢陸續發生死亡。母豬最近曾有1窩發生流產、死胎。為了確診該豬場發病病因，對病死仔豬進行剖檢，應用PCR、RT-PCR方法對常見豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、偽狂犬病病毒（PRV）、豬2型圓環病毒（PCV2）進行了檢測，對送檢的3份豬血清進行抗體檢測，細菌的分離鑒定。經檢測，病死哺乳仔豬豬瘟病毒和豬藍耳病病毒均為陽性；保育仔豬藍耳病陽性；細菌培養分離試驗未分離到致病菌。現將有關診斷報告如下。

豬藍耳病；豬瘟；混合感染；診斷

1 材料與方法

1.1 對發病豬進行剖檢

主要的病變發生在肺部，肺臟心葉發生對稱性肉樣變，肺臟水腫、充血、淤血，肺臟彌散性間質性肺炎的癥狀均有不同程度出現，喉頭未見異常，懷疑存在支原體的繼發感染（圖1）。全身淋巴結腫大、出血（圖2）。腎呈土黃色，表面凹凸不平（圖3）。脾臟邊緣發黑、梗死、不整（圖4）。腦充血、胃底充血，其他臟器未見異常。

1.2 病料采集及豬場免疫情況

圖1 肺臟肉樣變

圖2 淋巴結腫大出血

圖3 腎臟表面凸凹不平

圖4 脾臟發黑梗死

采取送檢新鮮死亡的仔豬的扁桃體、肺臟、腦組織和淋巴結。該豬場進行過豬瘟免疫（21 d），豬偽狂犬病免疫（3 d，28 d）。

1.3 酶和其他試劑

Taq DNA聚合酶、dNTPs、DEPC水、DL2 000 Marker、總DNA抽提試劑盒均購自上海生工生物有限公司，豬瘟RT-PCR診斷試劑盒，豬繁殖與呼吸綜合征病毒RT-PCR診斷試劑盒、豬偽狂犬病PCR診斷試劑盒購自北京世紀元亨動物防疫技術有限公司。豬瘟抗體檢測試劑盒、豬藍耳病檢測試劑盒、豬偽狂犬病gB抗體檢測試劑盒購自美國IDEXX生物試劑公司。

1.4 引物設計與合成

根據GenBank發表的PCV2用Oligo6.0軟件設計引物。

1.5 病毒核酸檢測

豬瘟病毒、豬藍耳病病毒、豬偽狂犬病病毒的擴增分別用豬瘟RT-PCR診斷試劑盒、豬藍耳病RT-PCR診斷試劑盒、豬偽狂犬病毒PCR診斷試劑盒進行，PCR產物經1.2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。豬2型圓環病毒擴增應用總DNA抽提試劑盒提取模板，體外擴增反應條件95 ℃ 2 min；（94 ℃ 30 s，50 ℃ 40 s，72 ℃ 40 min）×35個循環，72 ℃延伸10 min，PCR產物經1.2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定。

1.6 豬ELISA抗體檢測結果

將送檢3份血樣離心分離血清，將稀釋后的血清加入檢測板，進行 ELISA實驗，將檢測板放入酶標儀內測各孔的OD值。

2 試驗結果

2.1 RT-PCR擴增后結果

豬瘟檢測結果進行RT-PCR擴增后，PCR產物用1.2%瓊脂糖進行凝膠電泳后在凝膠成像系統中觀察，可見到232 bp左右的基因條帶，大小與CSFV預期基因相符。

豬繁殖與呼吸綜合征病毒檢測結果進行RT-PCR擴增后，PCR產物用1.2%瓊脂糖進行凝膠電泳后在凝膠成像系統中觀察，可見到432 bp左右的基因條帶，大小與PRRSV預期基因相符（見圖5）。

圖5 CSF、PRRS擴增結果

2.2 豬偽狂犬病病毒、豬2型圓環病毒

豬偽狂犬病病毒、豬2型圓環病毒檢測結果，將PCR擴增產物用1.2%瓊脂糖進行凝膠電泳，結果未見到目的基因。

2.3 抗體檢測結果

將送檢3份血樣離心分離血清，將稀釋后的血清加入檢測板，進行 ELISA實驗，將檢測板放入酶標儀內測各孔的OD值，結果見表1。

3 結果分析及防控建議

3.1 豬瘟結果分析

該豬場哺乳仔豬豬瘟病原檢測為強陽性，血清學檢測結果顯示，送檢豬只豬瘟的抗體是合格的，說明哺乳仔豬發病主要是以窩為單位，發病的主要原因是母豬免疫不好或帶毒造成的，建議對初生仔豬進行超免，對母豬群進行抗體檢測，對不合格母豬進行豬瘟疫苗的補免，之后再進行檢測，將抗體值是陰性的母豬淘汰。

3.2 豬藍耳病結果分析

哺乳仔豬和保育豬藍耳病抗原均為陽性，說明豬群正存在藍耳病的暴發流行，是豬大批死亡的原因所在。從藍耳病抗體檢測結果分析，S/P值在未免疫疫苗的情況下還是比較高的。建議措施：

1）對發病豬立即隔離。發病較重的仔豬進行淘汰，病死豬深埋。對豬舍和用具進行徹底消毒。

2）控制發病豬群的繼發性細菌感染，即做好藥物保健和預防，應用藥物替米考星、支原凈等對母豬進行凈化。發病仔豬治療以補充電解質和對癥用藥為主，控制繼發感染。使用減毒活疫苗，對初生仔豬和母豬進行免疫。

3）進行疫苗免疫，建議使用弱毒苗，對空懷期母豬進行免疫，對新生仔豬7 d免疫。

4 討論

該場是我國北方中小型養豬場和散戶的典型代表，這些豬場往往在管理上和疫病防控上存在諸多的漏洞，沒有科學的管理和免疫程序，發生傳染病往往沒有科學的實驗室診斷而延誤病情，這些豬場診斷疾病主要是依靠基層有經驗的獸醫剖檢進行診斷，但現在的疾病從眼觀上病變都不是十分的明顯、典型，而且混合感染、繼發感染都比較嚴重，臨床發病越來越嚴重，藥物濫用而不見效果。有時豬場老板對獸醫人員的疾病診斷產生質疑和不信任感，使得治療執行力下降，延誤最佳治療時機[1-2]。中小型養豬場和散戶中豬病的流行和泛濫是以上諸多原因造成的。

該場仔豬的死亡主要是藍耳病暴發的結果，就目前我國豬藍耳病的發病情況來看，無論什么季節都會有豬藍耳病發病的案例，但是發病最密集的季節為夏秋季，一般情況下豬藍耳病發病時會呈現成片感染趨勢，受感染豬群的發病率以及死亡率都非常高[3-4]。對于藍耳病的防控應做到掌握和了解本場感染和流行狀況，主要應用血清學抗體檢測技術。對于藍耳病陰性豬場，不使用疫苗是最佳的手段，此外，應該做好生物安全措施，豬場進行閉群飼養，盡量避免引種，如確實需要引種，必須檢測和檢疫，絕對不能引入陽性豬。還需定期對豬場進行監測，保持藍耳病陰性狀態。對藍耳病穩定而不活躍的豬場（母豬群陽性，但繁殖性能不受影響；生長豬群無感染），應做到以下幾點：應盡量不用減毒活疫苗免疫，此外還應加強母豬的飼養管理，定期監測其感染狀況；強化豬場的消毒與衛生，防止母豬排毒在豬場內傳播；后備陰性母豬配種前與經產母豬混群飼養；監測生產豬群的血清學。對藍耳病穩定而活躍的豬場（母豬群陽性，但繁殖性能不受影響；生長豬群有感染，臨床發病，因繼發感染有一定死亡率；病毒在豬場內傳播），應強化豬場的消毒衛生，降低或杜絕病毒在豬場內傳播；適當使用減毒活疫苗，依據實驗室確診的生長豬群的感染和發病階段，提前3～4周為生產豬群進行一次免疫，豬群穩定后應立即停止使用活疫苗[5]；控制感染豬群的繼發性細菌感染，即做好藥物保健和預防。

表1 豬抗體水平檢測結果

[1] 葛玉.仔豬藍耳病與豬瘟混合感染的診治報告[J].北方牧業，2012(23)，21.

[2] 張立娟，劉超，韓艷玲.豬瘟和豬藍耳病感染的診斷與防治[J].畜牧獸醫科技信息，2009(3)，78.

[3] 高建華，田克恭，遇秀玲，等.藍耳病問題面面觀[J].今日養豬業，2015(2)：54-57.

[4] 張建新，王旭田，司獻軍.高致病性豬藍耳病及其防控[J].中國動物保健，2007（7）：17-18.

[5] 李華， 楊漢春， 郭玉璞. 豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）感染的免疫學研究進展[J]. 中國獸醫雜志，1999， 25(9)：40-42.

2015-07-17）

黑龍江省教育廳高職高專科學研究項目（項目編號：12525074）

李樹東，男，碩士，1982年出生，研究方向：動物傳染病診斷檢測工作。