家兔肝臟鑄型透明標(biāo)本的制作

李方正+杜晟+宮辰+孟德志+牟澤華+崔錫峰

摘要：配制不同顏色環(huán)氧樹脂填充劑對家兔肝臟各管道進(jìn)行灌注，然后采用透明處理得到肝臟的鑄型透明標(biāo)本。該標(biāo)本保留肝臟的實(shí)質(zhì)外形，能夠分辨出肝臟各葉和膽囊等結(jié)構(gòu)，能清晰顯示后腔靜脈、肝靜脈和門靜脈的分支以及各管道在實(shí)質(zhì)中的位置和走向。

關(guān)鍵詞：家兔；肝臟；鑄型透明標(biāo)本；制作

中圖分類號：S829.11文獻(xiàn)標(biāo)識號：A文章編號：1001-4942（2015）04-0120-03

家畜解剖學(xué)是形態(tài)學(xué)科學(xué)，在教學(xué)過程中使用動物標(biāo)本可以讓學(xué)生更好地理解和記憶動物有機(jī)體的結(jié)構(gòu)特征。解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的標(biāo)本類型有骨骼標(biāo)本、干制標(biāo)本、浸制標(biāo)本、斷層標(biāo)本、鑄型標(biāo)本和透明標(biāo)本等。鑄型透明標(biāo)本是將鑄型和透明標(biāo)本制作過程相結(jié)合而制成的能保留器官外形和顯示內(nèi)部管道的標(biāo)本。鑄型透明標(biāo)本采用鑄型劑灌注器官的血管、腔、竇等結(jié)構(gòu)，然后采用藥物或物理方法將組織、器官處理后使其折光系數(shù)與透明劑折光系數(shù)相近，達(dá)到透明的效果[1～4]。

環(huán)氧樹脂是分子中含有兩個(gè)或兩個(gè)以上環(huán)氧基團(tuán)的有機(jī)高分子化合物，其環(huán)氧基團(tuán)可與多種類型的固化劑發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)而形成硬度高、柔韌性好、對酸、堿及大部分溶劑穩(wěn)定的固體高聚物[5，6]。我們將環(huán)氧樹脂E44配制成不同顏色的填充劑，分別對肝臟的血管進(jìn)行灌注，然后將肝臟實(shí)質(zhì)進(jìn)行透明處理，得到肝臟鑄型透明標(biāo)本，以期為獸醫(yī)教學(xué)和臨床提供好的解剖學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料和藥品：新鮮兔肝臟、環(huán)氧樹脂E44、鄰苯二甲酸二丁酯、乙酸乙酯、乙二胺、丙烯顏料、福爾馬林溶液、酒精、氫氧化鉀、過氧化氫、丙三醇等。

試驗(yàn)器械：手術(shù)刀、手術(shù)剪刀、鑷子、止血鉗、注射器、針頭、電子天平、燒杯、量筒、標(biāo)本缸等。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1取材家兔放血致死剖開腹腔，取下肝臟的時(shí)候?qū)⒑笄混o脈、門靜脈留長些以方便插管。將取下的肝臟用生理鹽水沖洗，用注射器吸取血管內(nèi)殘留的血液，將肝臟表面用脫脂棉吸干凈。

收稿日期：2015-01-05

基金項(xiàng)目：青島農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生科技創(chuàng)新基金項(xiàng)目“動物肝臟鑄型透明標(biāo)本的制作”（0501）

1.2.2填充劑的配制量取50mL環(huán)氧樹脂E44，加入乙酸乙酯（稀釋劑）10mL和鄰苯二甲酸二丁酯（增塑劑）15mL；根據(jù)灌注不同管道的要求，向配制的填充劑中加入紅色或藍(lán)色丙烯顏料；在灌注前加入乙二胺（固化劑）10mL。

1.2.3肝臟血管灌注用玻璃活塞注射器（采用尖端磨成鈍圓的16號獸用針頭）吸取配制的紅色和藍(lán)色填充劑各10mL左右迅速進(jìn)行灌注，待肝臟膨脹后用手揉搓以使填充劑更好地注入微細(xì)血管。

1.2.4透明處理將灌注后的肝臟靜置4～5h，然后置入10%福爾馬林溶液固定10d以上，清理肝臟標(biāo)本的韌帶、脂肪等。將固定后的肝臟移入蒸餾水洗滌后置入2%過氧化氫溶液漂白10d，以除去血污和色素；漂白后的肝臟依次入梯度酒精脫水（70%酒精2d→80%酒精2d→95%酒精12d→95%酒精Ⅱ2d→無水酒精Ⅰ4d→無水酒精Ⅱ4d）；將脫水后的肝臟置入2%氫氧化鉀溶液中軟化約20～30d，當(dāng)肝臟達(dá)到半透明效果后移入梯度丙三醇（50%丙三醇、70%丙三醇和100%丙三醇）中進(jìn)行透明，每級丙三醇的時(shí)間約為2d，最后用100%丙三醇保存。

2結(jié)果與分析

采用此方法制作的標(biāo)本表面沒有明顯的損傷，保留了肝臟的實(shí)質(zhì)外形，能夠分辨出左外葉、左內(nèi)葉、右內(nèi)葉、右外葉和膽囊等結(jié)構(gòu)。而且能清晰地顯示后腔靜脈、肝靜脈和門靜脈的分支以及各管道在實(shí)質(zhì)中的位置和走向，見圖1。

3討論

目前制作鑄型標(biāo)本常用填充劑有明膠、淀粉[3，7]、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯塑料（ABS）[2，8]、聚氯乙烯（PVC）、過氯乙烯（CPVC）、自凝牙托材料和環(huán)氧樹脂等[9]。不同灌注材料符具優(yōu)缺點(diǎn)，且制作鑄型透明標(biāo)本采用的填充劑還要不溶于后續(xù)透明處理用的各種試劑。我們采用的環(huán)氧樹脂E44是包含環(huán)氧基的低分子化合物，在常溫下呈液體狀態(tài)，但因?yàn)槠湔吵矶容^大而流動性差，不宜直接灌注微細(xì)管道。因此，我們采用乙酸乙酯作為稀釋劑對環(huán)氧樹脂進(jìn)行稀釋以增加其流動性，乙酸乙酯是非活性添加劑，只混合于樹脂中，并不與樹脂發(fā)生固化反應(yīng)。稀釋后的環(huán)氧樹脂可以一次完成灌注，不需要補(bǔ)充灌注。由于環(huán)氧樹脂固化后硬度較大而柔韌性不足，鑄型細(xì)小管道后容易斷裂，因此我們加入增塑劑（鄰苯二甲酸二丁酯）增加環(huán)氧樹脂固化后的韌性。配制的填充劑在加入固化劑后要立刻進(jìn)行灌注，灌注時(shí)宜采用玻璃活塞注射器，邊注射邊用手輕輕揉搓標(biāo)本，以使填充劑能充滿末梢血管。如果灌注的標(biāo)本過大，填充劑要分次配制，以免時(shí)間過長填充劑發(fā)生固化。固化后的環(huán)氧樹脂顆粒小，可以填充到微細(xì)血管；而且柔韌性好、支撐力強(qiáng)、收縮率小，是比較理想的灌注材料。

此標(biāo)本能夠在保留肝臟實(shí)質(zhì)外形的基礎(chǔ)上顯示出門靜脈、肝靜脈和肝管的走向和分支，可以幫助學(xué)生更好地理解和記憶其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，是動物解剖學(xué)實(shí)驗(yàn)非常好的教具，同時(shí)總結(jié)出動物器官鑄型透明標(biāo)本的制作程序，可為其它器官的標(biāo)本制作提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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