乳腺浸潤性導管癌中PS2的表達及其與ER、PR的關系研究

通信作者：馬斌林,男,主任醫師,教授，博士生導師，研究方向：乳腺頭頸甲狀腺腫瘤,E-mail:doveydc@21cn.com。

乳腺浸潤性導管癌中PS2的表達及其與ER、PR的關系研究

董朝1, 賀家勇2， 楊樂1, 馬斌林1

(1新疆醫科大學附屬腫瘤醫院乳腺頭頸外科， 烏魯木齊830011;2烏石化職工醫院外科， 烏魯木齊830019)

摘要:目的探討乳腺浸潤性導管癌中雌激素調節蛋白(PS2)的表達及其與雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)的關系。方法收集新疆醫科大學附屬腫瘤醫院2008-2009年經病理確診并行外科手術治療的70例乳腺浸潤性導管癌組織石蠟標本，采用免疫組化法檢測PS2、ER、PR表達，分析PS2與ER、PR表達及臨床病理因素的相關關系。結果PS2、ER、PR陽性表達率分別為37.14%(26/70)、40.00%(28/70)、42.86%(30/70)。PS2在ER陽性和陰性病例中的陽性表達率分別為60.71%(17/28)和21.43%(9/42)，兩者差異有統計學意義(P<0.05)。PS2在PR陽性和陰性病例中的陽性表達率分別為66.67%(20/30)和15.00%(6/40)，兩者差異有統計學意義(P<0.05)。患者年齡、月經狀態與PS2蛋白表達無明顯關系(P>0.05)，PS2表達與ER呈正相關(γ-s=0.35,P=0.014)，PS2表達與PR呈正相關(γ-s=0.475，P=0.000)，PS2表達與患者組織分級及淋巴結轉移有關(P<0.05)。結論PS2表達與ER、PR及淋巴結轉移狀況與組織分級臨床因素有關。ER、PR、PS2綜合檢測對判定乳腺內分泌治療效果及預后具有重要意義。

關鍵詞：乳腺浸潤性導管癌； 雌激素調節蛋白； 雌激素受體; 孕激素受體； 臨床相關性

基金項目：新疆醫科大學科研創新基金(XJC201270)

作者簡介：董朝(1977-)，男，碩士，副主任醫師，研究方向：乳腺頭頸甲狀腺腫瘤。

中圖分類號：R737.9

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2015.03.024

[收稿日期：2014-05-04]

The research on the expression and the clinical correlation of PS2 and

ER, PR in breast infiltrating ductal carcinoma

DONG Chao1, HE Jiayong2， YANG Le1, MA Binlin1

(1DepartmentofMammary,HeadandNeckSurgery,AffiliatedTumorHospital,

XinjiangMedicalUniversity,Urumuqi830011,China;2DepartmentofSurgery，Staff-worker

HospitalofUrumqiPetrochemicalSubsidiaryChinaNationalPeroleum，Urumqi830019，China)

Abstract:ObjectiveTo study the expression of PS2 and the clinical correlation between PS2 and ER, PR in patients with breast infiltrating ductal carcinoma. MethodsDetect the expression of PS2, ER and PR in 70 cases of samples in patients with breast infiltrating ductal carcinoma by using immunohistochemical method. The clinical relevance of the PS2 with ER, PR and clinical factors were analyzed. ResultsThe positive rates of PS2, ER, PR were 37.14%(26/70), 40.0%(28/70), 42.86%(30/70) respectively. The positive expression rate of PS2 was 60.71%(17/28) for the ER positive group and 21.43%(9/42) for the ER negative group. There were significant differences (P<0.05). The positive rate of PS2 protein in PR positive group and negative group were 66.67%(20/30) and 15.00%(6/40) respectively. The menstrual status and age of patients had no significant effects on the PS2 protein expression (P>0.05). The expression of PS2 protein could be affected by the clinical stages and lymphatic metastasis (P<0.05). ConclusionThe expression of PS2 in breast infiltrating ductal carcinoma was significantly correlated with ER, PR and the pathological factors such as clinical stages and lymph node metastasis status. The comprehensive test of ER, PR, PS2 had great significance in determining the effect of endocrine treatment and prognosis of breast cancer.

Key words: breast infiltrating ductal carcinoma; estrogen receptor; progesterone receptor; clinical significance

乳腺癌是婦女最常見及發病率最高的惡性腫瘤，我國乳腺癌發病人數以每年3%左右的速率增長[1-3]。雌激素受體(estrogen receptor，ER)及孕激素受體(progesterone receptor，PR)對預測腫瘤的治療效果及判斷預后具有指導意義。雌激素調節蛋白(presenilin 2，PS2)是一種富有半胱氨酸的雌激素誘導蛋白，其表達水平對乳腺癌臨床內分泌治療及預測具有指導意義。本研究觀察70例乳腺浸潤性導管癌組織中PS2、ER和PR的表達情況，為乳腺癌的預后判斷及治療效果評價提供理論依據，現報道如下。

1資料與方法

1.1臨床資料收集新疆醫科大學附屬腫瘤醫院2008-2009年經病理確診并行外科手術治療的70例乳腺浸潤性導管癌患者的臨床病理資料，年齡36～78歲，平均(54±7.3)歲。左乳癌37例，右乳癌33例；伴淋巴結轉移者23例，無淋巴結轉移者47例。按WHO組織學分級標準：I級10例，II級36例，III級24例。納入標準：患者術前未接受新輔助放化療及內分泌治療。排除標準：患者病期較晚，無法行手術治療，有術前新輔助治療的患者。石蠟標本均經10%甲醛溶液固定，4 μm常規連續切片，做免疫組織化學染色。另一部分新鮮組織于-70℃低溫冰箱內放置保存，做進一步測試分析。

1.2主要儀器及試劑RM-2135型切片機(德國LEICA公司)，Olympus BX50顯微鏡(日本)，Pixe LINK 1394 顯微攝像儀(美國)，BM-II生物細胞包埋機(新安毅達)，TrionX-100曲拉通(Amresco)，HH-W21-600電熱恒溫培養箱(上海醫用恒溫設備廠)。ER、PR、PS2兔抗人單克隆抗體(美國Novus)、DAB染色試劑、蘇木素、甲苯胺藍、1%鹽酸酒精等均購自福州邁新生物技術有限公司。

1.3實驗方法免疫組織化學染色采用S-P法，經脫蠟水化及抗原修復后將切片置于新鮮配制的3%H-2O-2中浸泡30 min，以滅活內源性過氧化物酶活性，PBS沖洗5 min×3次，滴加10%正常山羊血清，室溫下置濕盒內20 min，以中和非特異性反應。滴加一抗溶液(ER、PR、PS2兔抗人單克隆抗體)于切片上， PBS滴加組為對照組，37℃恒溫箱內孵育過夜，取出，PBS洗3 min×3次，吸去水分，滴加二抗工作液，于濕盒內37℃孵育25 min。DAB底物顯色30 s，蘇木素復染30 s，1%鹽酸酒精分化3 s，流水沖洗10 min左右，顯微鏡下觀察及照相。

1.4結果判定方法ER、PR陽性判斷依據[2]：當尿素酶染色顯示細胞核有棕黃色顆粒出現時，即可判斷為陽性，PS2陽性染色為細胞漿中有棕黃色顆粒出現，也有可能少量會出現在細胞膜上。細胞比率≤10%為陰性，陽性細胞比率11%～40%為(+)，陽性細胞比率41%～70%為(++)，陽性細胞比率>70%為(+++)，(+)、(++)、(+++)視為陽性。

1.5統計學處理使用SPSS 19.0軟件進行統計學分析。組間均數比較采用t檢驗，組間率的比較用χ2檢驗，相關分析采用Sperman等級相關系數，以 P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1PS2的表達及其與ER、PR的關系ER陽性表達率為40.0%(28/70)，PR陽性表達率為42.86%(30/70)，PS2陽性表達率37.14%(26/70)。PS2在ER陽性組織中的陽性表達率為60.71%(17/28)，在ER陰性組織中的陽性表達率為21.43%(9/42)，兩者差異有統計學意義(P<0.05)。PS2在PR陽性組織中的陽性表達率為66.67%(20/30)，在PR陰性組織中的陽性表達率為15.00%(6/40)，兩者差異有統計學意義(P<0.05)。

表1　PS2表達及其與ER、PR的關系/例

2.2PS2蛋白表達與臨床因素的關系患者年齡及絕經與否對PS2蛋白表達無明顯影響(P>0.05)，PS2在組織學分級為I級病例組中陽性表達12例，陽性表達率為44.44%，明顯高于III級表達率27.27%(χ2=4.694，P=0.039)，PS2表達與淋巴結轉移有關，淋巴結轉移患者PS2的表達率明顯小于無淋巴結轉移患者(P<0.05)。PS2表達與ER呈正相關(r-s=0.35,P=0.014)，PS2表達與PR呈正相關(r-s=0.475，P=0.000)。

表2　PS2表達與臨床病理因素關系/例

3討論

乳腺癌在歐美國家婦女腫瘤發病率中居第一位，近年我國乳腺癌發病人數呈逐年上升趨勢[2,4]。乳腺癌生物學行為的相關研究亟待突破。ER、PR、PS2是作為乳腺癌診斷、治療及預后的重要預測因子，探討其在浸潤性導管癌中蛋白表達情況，具有重要意義[5-6]。

國內外眾多研究已經證實，ER、PR的表達情況能夠反映腫瘤對激素的響應[7-8]。ER的陽性表達率能夠反映出乳腺癌細胞對雌激素的敏感性和依賴性，ER陽性的乳腺癌預后較好，內分泌治療更加有效。PR是雌性激素與受體結合誘導產物，PR與ER的表達往往重疊，PR可有效反映ER的狀況，是表征ER的親和力的重要指標。由于ER可能與特異性的激素相結合，從而導致其發生變異，僅采用ER對乳腺癌內分泌治療效果進行預測效果較差，臨床常用ER、PR聯合作為乳腺癌內分泌治療的預測指標。Minckwitz等[9]研究發現，對乳腺癌患者的ER或PR呈陽性組進行內分泌治療，治療有效率達到70%，由此可見內分泌情況對于乳腺癌治療有重要的意義。本研究顯示，ER表達陽性率為40.0%(28/70)，PR陽性表達率為42.86%(30/70)，并且在ER為陽性的患者中，PR多為陽性。

PS2作為一種乳腺癌雌激素誘發蛋白，具有促進細胞能動性、細胞增生/分化等作用[10]。PS2對于乳腺癌具有特異性，是控制乳腺癌細胞轉錄的關鍵因素。PS2與ER、PR呈明顯正相關性，ER、PR為陽性的組織中，PS2也有較高的表達率。本研究中，ER陽性組織中的陽性表達率為60.71%(17/28)，在ER陰性組織中的陽性表達率為21.43%(9/42)，陽性表達組織中PS2表達率顯著高于ER陰性組織(P<0.05)，PS2與ER同為陽性或陰性(PS2++/ER++、PS2+-/ER+-)的表達符合率為71.43%(50/70)。在PR陽性組織中的陽性表達率為66.67%(20/30)，在PR陰性組織中的陽性表達率為15.00%(6/40)，PS2與PR同為陽性或陰性(PS2++/PR++、PS2+-/PR+-)的表達符合率為77.14%(53/70)。進一步使用Sperman等級相關系數計算結果得出，PS2的表達與ER呈正相關關系(γ-s=0.35，P=0.014)，與PR呈正相關關系(γ-s=0.475，P=0.000),表明PS2能夠用作對乳腺癌治療效果的預測及預后評估。

目前,對PS2的表達與月經情況、年齡、腫瘤組織學分級、淋巴結轉移等患者臨床因素相關性進行的研究結果存在較大爭議。本研究中乳腺癌患者是否絕經、年齡因素對PS2蛋白表達沒有明顯相關性(P>0.05)，PS2表達與臨床組織分級、淋巴結轉移有顯著相關性(P<0.05)。腫瘤組織學分級反映的是腫瘤的侵襲能力，對評估腫瘤的分化程度有重要作用。本研究中，PS2表達率隨組織學分級的增高而降低，在組織學分級為Ⅰ級者的PS2陽性表達率為44.44%，顯著大于乳腺癌Ⅲ級者的表達率(27.27%，P<0.005)，結果表明，PS2表達與乳腺癌的侵襲性密切相關。淋巴結轉移患者內分泌治療效果較差，并且患者易早期復發，PS2表達情況可用來預測淋巴結轉移情況。本研究顯示70例患者中，有32例無淋巴結轉移，其中PS2陽性表達19例(59.38%)，淋巴結轉移患者組織中，PS2陽性表達7例(18.32%)，兩組差異有統計學意義(P<0.05)。

綜上所述，PS2表達與ER、PR呈正相關，并與臨床分期和淋巴結轉移狀況病理因素有關。PS2是檢測內分泌治療效果的一個重要指標，將PS2與其他因素綜合分析，能有效地判斷患者預后，但PS2不能取代ER、PR，而是對ER、PR的補充。ER、PR、PS2在乳腺癌的發生、進展中可能起了協同作用，綜合檢測意義較大，一方面可以作為乳腺癌腫瘤發展情況的檢測指標；另一方面可用于判定乳腺內分泌治療效果和預后。

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(本文編輯楊晨晨)