地中海藍鐘花(Scilla peruviana)的葉片胚狀體誘導及不定芽發生

地中海藍鐘花(Scillaperuviana)的葉片胚狀體誘導及不定芽發生

屈云慧，楊春梅， 吳麗芳*， 單芹麗

(云南省農業科學院花卉研究所，云南昆明 650205)

摘要[目的]建立地中海藍鐘花(Scilla peruviana)的離體快繁體系。[方法]以地中海藍鐘花的葉片為外植體進行離體培養，研究不同培養基對葉片誘導胚狀體及不定芽發生的影響。[結果]適于地中海藍鐘花葉片愈傷組織誘導及胚狀體發生的培養基為MS+ 6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L，不定芽分化培養基為MS+ 6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.5 mg/L。[結論]該研究為地中海藍鐘花的快速穩定繁殖提供較好的技術支持。

關鍵詞地中海藍鐘花；胚狀體；快繁體系

中圖分類號S188

作者簡介屈云慧(1972- )，女，云南大理人，研究員，博士，從事園藝植物組織培養相關生物技術研究。*通訊作者。

收稿日期2015-06-02

Embryoid Induction and Adventitious Buds ofScillaperuviana

QU Yun-hui，YANG Chun-mei，WU Li-fang*et al(Flowers ResearchInstitute of Yunnan Agriculture SciencesAcademy，Kunming,Yunnan 65020)

Abstract[Objective] The aim was to establish in vitro rapid system for Scilla peruviana. [Method] Using leaves of Scilia Peruriana as explants，the effect of different culture medium on embryoid induction and adventitious buds of Scilla peruviana was studied. [Result] The results showed that MS+ 6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L culture medium was suitable for embryoid induction and adventitious buds of Scilla peruviana; MS+6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.5 mg/L was suitable for differentiation of adventitious bud. [Conclusion] The study provided technical support for quickly stable reproduction of Scilla peruviana.

Key wordsSciliaperuviana; Embryo genesis; Rapid propagation system

地中海藍鐘花(Scillaperuviana)為多年生草本植物，地下具鱗莖。原產于葡萄牙、阿爾及利亞等國，是單子葉植物亞綱百合科綿棗兒屬植物。其抗寒耐貧瘠，葉片基生，披針形，平鋪地面呈蓮座狀，開花之后逐漸豎起，蘭紫色多朵小花排成頂生的總狀花序。其花株叢低矮，花序碩大，是配植庭園的好材料，也適于盆栽觀賞，在國外廣為引種和栽培。

因其有性繁殖較困難且難以保持母本的優良性狀，在我國境內極少引種。筆者以地中海藍鐘花的葉片為材料進行培養，在不同基本培養基中附加不同濃度的植物生長調節劑對其進行誘導，獲得高頻不定芽和體細胞胚，以期為地中海藍鐘花的快速穩定繁殖提供技術支持。

1材料與方法

1.1材料及處理取地中海藍鐘花(圖1a)新萌發的葉片為外植體，用自來水沖洗干凈后，75%乙醇浸泡1～2 min，再用0.1% HgCl2溶液消毒15～20 min，無菌水沖洗4～5次。

1.2方法將葉片切成1 cm大小的段。將葉片切塊平放到附加不同激素的MS培養基上[1-2]，每瓶培養基放置6～8個葉片切塊。試驗設置3個重復，每個重復8瓶。接種50 d后統計誘導出胚狀體的數量及其誘導率。對誘導培養的各階段形態進行拍照。

1.3培養條件培養基中蔗糖30 g/L，瓊脂6 g/L，pH 5.8。在培養室內培養，培養溫度(25±2)℃，光照12 h/d，光照強度2 000～3 000 lx(2只日光燈)。

2結果與分析

2.1不同激素配比對誘導率及形態發生的影響地中海藍鐘花的葉片切塊在不同激素配比的誘導培養基中較易產生愈傷組織及胚狀體，切塊邊緣產生愈傷組織的幾率高，而切塊表面易產生胚狀體(圖1b)。在供試的9個處理中均有愈傷組織及胚狀體的產生，總體誘導率均在80%以上。由表1可知， 6-BA濃度高時誘導愈傷組織的效果較好，NAA與6-BA的濃度比例相當時，有利于胚性愈傷組織的產生。總體來看，處理③愈傷組織的誘導頻率最高，達到89.4%，其次為處理⑥，誘導頻率為73.4%；在胚狀體的誘導上，處理②的誘導頻率最高，為87.6%；培養基中NAA濃度較高時(0.5 mg/L)或6-BA濃度較低時有少量根的再生。

表1　不同激素配比對誘導率及形態發生的影響

注：外植體均為靠近葉片基部的切塊。

在地中海藍鐘花葉片的誘導培養中，葉片的取材部位對誘導結果有一定的影響。靠近葉片基部較厚的葉片切塊較易產生愈傷組織及胚狀體的分化，葉尖部位的切塊只能誘導出少量愈傷組織，無胚狀體的產生。所以，在外植體處理時，一般選擇生長健壯的葉片，而且在處理過程中，將葉片靠近頂部1/3的部位切去，只選擇剩下的2/3葉片作為外植體。適于葉片胚狀體發生的培養基為MS+ 6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，胚狀體的誘導率達87.6%。

2.2不同激素配比對愈傷組織的繼代、胚狀體的形成與分化的影響將誘導出的愈傷組織轉接到繼代與分化培養基上進一步培養，在適宜的分化培養基上，繼代培養約30 d部分愈傷組織逐漸出現綠色不規則突起(圖1c)，其他愈傷組織則逐漸失去分化能力，直至褐化死亡。

由表2可知，在所有供試培養基上，均有愈傷組織和不定芽的發生，部分配比的培養基上有根系發生，不同濃度NAA與6-BA的配比對愈傷組織分化不定芽的培養差異明顯。6-BA 2.0 mg/L時，愈傷組織分化率較高，但部分出現玻璃化現象，且分化的不定芽葉片呈筒形，不能正常伸展；愈傷組織分化不定芽的分化率與6-BA濃度呈反向相關，表現為隨著6-BA濃度的降低，分化率提高，且不定芽生長正常；愈傷組織出愈率與不定芽分化率與NAA的濃度關系不大，這與瞿素萍等[3]的研究結果相符。該研究結果表明，以6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.5 mg/L時，不定芽的誘導率最高，達到86.4%(圖1d)。

表2　不同激素配比對愈傷組織分化不定芽的影響

3討論

通過誘導地中海藍鐘花的鱗莖腋芽的萌發以及叢生芽的形成，顧福根等[4]已成功獲得再生植株，但未見建立地中海藍鐘花組培快繁體系并進行種苗擴繁生產的報道。該研究采用地中海藍鐘花新萌發的葉片切塊在適宜的誘導培養基上建立了組培種苗生產的快速繁殖體系。葉片的取材和消毒都十分方便，而且在取材過程中不損耗母株，適于引進品種的規模化繁殖與快速生產。

在地中海藍鐘花的繼代培養中，隨著繼代次數的增加，植株體內會有一定的激素累積，需根據再生芽的生長狀況適時進行培養基中激素濃度的調整，逐步降低激素的用量，以保證種苗無(低)變異的發生，不斷獲得健壯的增殖苗。

參考文獻

[1] 孫駿威，方曉峰，陳珍.不同植物生長調節劑對黃秋葵組織培養的影響[J].北方園藝，2012(7)：139-141.

[2] 鄭志明，孫駿威，陳珍.不同植物生長調節劑對綿棗兒組織培養的影響[J].貴州農業科學，2014，42(3)：27-30.

[3] 瞿素萍，熊麗，王繼華，等.綿棗兒葉片植株再生體系的建立[J].植物生理學通訊，2006，42(1)：69.

[4] 顧福根，萬志剛，趙旭平.地中海綿棗兒的組織培養與植株再生[J].植物生理學通訊，2007，43(1):118.