腹腔鏡治療子宮內(nèi)膜異位癥性不孕對(duì)內(nèi)膜Galectin-3蛋白的影響

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(南方醫(yī)科大學(xué)附屬何賢紀(jì)念醫(yī)院，廣東 廣州 511400)

·臨床醫(yī)學(xué)·

腹腔鏡治療子宮內(nèi)膜異位癥性不孕對(duì)內(nèi)膜Galectin-3蛋白的影響

朱斌，薛玉珍*，惠薇

(南方醫(yī)科大學(xué)附屬何賢紀(jì)念醫(yī)院，廣東 廣州 511400)

目的通過檢測(cè)腹腔鏡治療子宮內(nèi)膜異位癥性不孕癥術(shù)后子宮內(nèi)膜Galectin-3蛋白表達(dá)變化，探討手術(shù)治療與子宮內(nèi)膜容受性的關(guān)系。方法采用免疫組化法，檢測(cè)子宮內(nèi)膜異位癥性不孕癥腹腔鏡治療術(shù)后Galectin-3蛋白表達(dá)。按照研究對(duì)象入組標(biāo)準(zhǔn)，選擇男方因素不孕癥組52例，子宮內(nèi)膜異位癥性不孕癥組54例，其中子宮內(nèi)膜異位癥Ⅰ～Ⅱ期組28例，子宮內(nèi)膜異位癥Ⅲ～Ⅳ期組26例。結(jié)果子宮內(nèi)膜異位癥性不孕癥組Galectin-3蛋白表達(dá)低于男方不孕癥組(P<0.05)；腹腔鏡手術(shù)治療子宮內(nèi)膜異位癥不孕癥術(shù)后，與術(shù)前比較Galectin-3蛋白表達(dá)升高(P<0.05)；子宮內(nèi)膜異位癥Ⅰ～Ⅱ期組與Ⅲ～Ⅳ期組分別于術(shù)前、術(shù)后比較，Galectin-3蛋白表達(dá)差異無顯著性(P>0.05)。結(jié)論子宮內(nèi)膜異位癥性不孕癥患者存在子宮內(nèi)膜容受性下降，腹腔鏡手術(shù)可通過上調(diào)Galectin-3蛋白表達(dá)改善子宮內(nèi)膜容受性。

子宮內(nèi)膜異位癥； 不孕癥； 腹腔鏡； 子宮內(nèi)膜容受性Galectin-3蛋白

子宮內(nèi)膜異位癥是引起不孕的常見原因之一，有研究表明子宮內(nèi)膜異位癥患者在位子宮內(nèi)膜容受性下降導(dǎo)致的著床失敗是其不孕原因之一。腹腔鏡檢查及手術(shù)治療可提高子宮內(nèi)膜異位癥受孕率。本文通過免疫組化法檢測(cè)子宮內(nèi)膜Galectin-3蛋白，探討腹腔鏡手術(shù)后子宮內(nèi)膜容受性變化，為腹腔鏡手術(shù)治療子宮內(nèi)膜異位癥性不孕癥提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料選擇2011年12月～2013年5月在何賢紀(jì)念醫(yī)院婦科因不孕癥就診患者106例，按照入組標(biāo)準(zhǔn)將患者分為子宮內(nèi)膜異位癥性不孕癥組54例，腹腔鏡檢查盆腔正常，最后確定因男方因素致不孕癥組52例；其中子宮內(nèi)膜異位癥不孕癥組根據(jù)手術(shù)中病變程度分為：Ⅰ～Ⅱ期組28例，Ⅲ～Ⅳ期組26例。三組平均年齡：Ⅰ～Ⅱ期組28.9±2.5歲，Ⅲ～Ⅳ期組29.2±2.3歲，男方不孕癥組28.5±3.1歲；三組平均不孕時(shí)間：Ⅰ～Ⅱ期組4.5±1.2年，Ⅲ～Ⅳ期組4.7±0.9年，男方不孕癥組5.1±0.8年。納入標(biāo)準(zhǔn)：夫妻正常性生活且未采取避孕措施1年以上未妊娠；月經(jīng)規(guī)律，B超等監(jiān)測(cè)提示有排卵；宮腔鏡檢查證實(shí)無宮腔內(nèi)病變；腹腔鏡術(shù)中美藍(lán)通液試驗(yàn)提示雙側(cè)輸卵管均通暢；經(jīng)腹腔鏡及病理檢查證實(shí)為子宮內(nèi)膜異位癥。排除標(biāo)準(zhǔn)：不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者；合并生殖器官腫瘤或其他局部或全身性惡性腫瘤者；合并子宮肌瘤、子宮腺肌瘤、子宮腺肌病、子宮內(nèi)膜息肉、多囊卵巢綜合征。

1.2子宮內(nèi)膜標(biāo)本采取各組患者均于腹腔鏡檢查前1個(gè)月經(jīng)周期的第19～24天(著床窗口期)，先取子宮內(nèi)膜做Galectin-3蛋白檢測(cè)，然后于術(shù)后第一個(gè)月經(jīng)周期的第19～24天取在位子宮內(nèi)膜進(jìn)行Galectin-3蛋白檢測(cè)。

1.3免疫組化檢測(cè)子宮內(nèi)膜Galectin-3蛋白將子宮內(nèi)膜組織用10%甲醛固定后石蠟包埋，切片厚4 μm，分別進(jìn)行HE和ABC免疫組化染色。脫蠟、消化、微波抗原修復(fù)、封閉、加入一抗(單克隆小鼠抗人Galectin-3蛋白，購自廣州市泉暉商業(yè)有限公司代理的德國(guó)徠卡原裝進(jìn)口免疫組化試劑公司)、二抗、DAB顯色、蘇木素復(fù)染、脫水后透明、中性樹膠封片。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗做陰性對(duì)照。每張免疫組織化學(xué)的標(biāo)本于顯微鏡下至少隨機(jī)取3個(gè)圖像框，用真彩色醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)每個(gè)圖像框的光密度和面積，相除得出單位面積的密度，取平均值代表該標(biāo)本的染色強(qiáng)度，即表示子宮內(nèi)膜Galectin-3蛋白的含量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，同一組間比較用配對(duì)t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1術(shù)前子宮內(nèi)膜Galectin-3蛋白表達(dá)采用免疫組化法，發(fā)現(xiàn)男方不孕癥組術(shù)前Galectin-3蛋白為1.60±0.02，子宮內(nèi)膜異位癥組術(shù)前Galectin-3蛋白為1.23±0.02，兩組比較差異有顯著性(t=79.945，P<0.05)，見圖1。

圖1 術(shù)前子宮內(nèi)膜Galectin-3蛋白的表達(dá) A：男方不孕癥組；B：子宮內(nèi)膜異位癥組

2.2腹腔鏡手術(shù)治療后子宮內(nèi)膜Galectin-3蛋白表達(dá)采用免疫組化法，發(fā)現(xiàn)腹腔鏡手術(shù)治療子宮內(nèi)膜異位癥Ⅰ～Ⅱ期組與Ⅲ～Ⅳ期組術(shù)前Galectin-3蛋白表達(dá)間差異無顯著性(P>0.05)；但術(shù)后兩組Galectin-3蛋白明顯升高，Ⅰ～Ⅱ期組手術(shù)前后比較，t=25.182，P=0.000，Ⅲ～Ⅳ期組手術(shù)前后比較，t=29.718，P=0.005，差異有顯著性(P<0.05)。見表2、圖2。

表2子宮內(nèi)膜異位癥各期組手術(shù)前后Galectin-3蛋白水平比較

組別n術(shù)前Galectin-3蛋白術(shù)后Galectin-3蛋白Ⅰ～Ⅱ期組281.23±0.031.43±0.03Ⅲ～Ⅳ期組261.23±0.021.44±0.03t0.5441.503P0.5890.139

圖2 子宮內(nèi)膜異位癥手術(shù)前后內(nèi)膜Galectin-3蛋白的表達(dá)A：Ⅰ～Ⅱ期組術(shù)前；B：Ⅰ～Ⅱ期組術(shù)后；C：Ⅲ～Ⅳ期組術(shù)前；D：Ⅲ～Ⅳ期組術(shù)后

3 討 論

子宮內(nèi)膜異位癥患者中約30%～40%的婦女伴發(fā)不孕[1-2]，按1985年美國(guó)生育學(xué)會(huì)(AFS)提出的修訂子宮內(nèi)膜異位癥分期標(biāo)準(zhǔn)，子宮內(nèi)膜異位癥根據(jù)手術(shù)中病變程度分為Ⅰ～Ⅳ期。對(duì)于Ⅲ～Ⅳ期子宮內(nèi)膜異位癥而言，導(dǎo)致其不孕的原因主要為盆腔解剖結(jié)構(gòu)破壞造成的輸卵管功能異常，從而導(dǎo)致受精卵運(yùn)輸障礙、卵泡發(fā)育異常、排卵障礙、黃體功能減退等[3-4]。而對(duì)于Ⅰ～Ⅱ期子宮內(nèi)膜異位癥，雖然已有大量文獻(xiàn)證實(shí)其能夠在多方面影響患者的生育能力，但其確切因素至今仍不清楚。

子宮內(nèi)膜容受性是指子宮內(nèi)膜處于一種允許胚胎定位、黏附、侵入并使內(nèi)膜間質(zhì)發(fā)生改變從而導(dǎo)致胚胎著床的狀態(tài)。子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎著床的敏感性可分為接受前期、接受期和非接受期。子宮內(nèi)膜只有在接收期才能接受胚胎植入，這一時(shí)期在人類相當(dāng)于月經(jīng)周期的第19～24天。Galectin-3是Galectin家族成員之一，Galectin-3基因在許多正常組織的上皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、活化細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)，具有多種生物學(xué)功能，包括細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、血管生成、腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化及細(xì)胞凋亡等[5-6]。Galectin-3還可以識(shí)別包括整合素、層黏連蛋白、纖維連接蛋白、含糖復(fù)合物的細(xì)胞外基質(zhì)等在內(nèi)的特異性配體，參與細(xì)胞黏附過程[7-8]。國(guó)內(nèi)學(xué)者在研究子宮內(nèi)膜容受性時(shí)發(fā)現(xiàn)，Galectin-3在子宮內(nèi)膜容受的接受期表達(dá)顯著上調(diào)[9]，并在著床過程的子宮內(nèi)膜免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。另有研究發(fā)現(xiàn)，Galectin-3人分泌期子宮內(nèi)膜比增生期高近3倍[10]，且此時(shí)期Galectin-3蛋白主要定位于子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞，說明Galectin-3可能與分泌期子宮內(nèi)膜的容受性相關(guān)。國(guó)內(nèi)孫曉煒等[11]研究表明子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜的Galectin-3蛋白表達(dá)明顯降低，這種變化可能影響了內(nèi)異癥患者在位內(nèi)膜容受性的建立，不利于胚胎著床。本結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜異位癥性不孕患者子宮內(nèi)膜Galectin-3蛋白表達(dá)明顯下降，與男方因素不孕癥比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示子宮內(nèi)膜異位癥可影響分泌期子宮內(nèi)膜容受性。

腹腔鏡檢查是子宮內(nèi)膜異位癥診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，術(shù)中對(duì)異位病灶進(jìn)行治療，可提高患者的妊娠率[12]。Coccia等[13]研究表明手術(shù)后的近期一段時(shí)間是妊娠最佳時(shí)期。也有研究顯示，腹腔鏡治療子宮內(nèi)膜異位癥對(duì)妊娠并無有利影響。因此腹腔鏡手術(shù)治療子宮內(nèi)膜異位癥仍存在很大爭(zhēng)議，需進(jìn)一步研究評(píng)估[14]。本文結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜異位癥性不孕癥各組術(shù)后子宮內(nèi)膜Galectin-3蛋白表達(dá)均升高，與同組術(shù)前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示腹腔鏡手術(shù)治療子宮內(nèi)膜異位癥性不孕可改善子宮內(nèi)膜容受性，推測(cè)可能為術(shù)后妊娠率提高的原因之一，為腹腔鏡手術(shù)治療子宮內(nèi)膜異位癥性不孕提供了理論依據(jù)。

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EffectofGalectin-3intheEndometriumonEndometriosis-associatedInfertilityAfterLaparoscopicSurgery

ZHU Bin，XUE Yuzhen，HUI Wei

(DepartmentofObstetricsandGynecology，HexianMemorialHospital，NanfangMedicalUniversity，Guangzhou，Guangdong511400，China)

ObjectiveTo investigate the expression of galectin-3 in infertile women with endometriosis after laparoscopic surgery.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expression of galectin-3 proteinin in endometriosis-associated infertility after laparoscopic surgery.According to the research subjects，52 cases of healthy women with male factor infertility and 54 cases with endometriosis(stageⅠ～Ⅱ 28 cases and stageⅢ～Ⅳ 26 cases) were analyzed.ResultsThe expression of galectin-3 in endometriosis-associated infertility was significantly lower than those of healthy women with male factor infertility(P<0.05)，while after laparoscopic surgery the expression was significantly higher than those before surgery(P<0.05).The expression of galectin-3 was not significantly different between different stages of endometriosis-associated infertility (P>0.05).ConclusionEndometriosis may decrease endometrial receptivity.The up-regulated expression of galectin-3 in the endometrium may be the reasons which lead to the improvement of endometrial receptivity in endometriosis-associated infertility after laparoscopic surgery.

endometriosis； infertility； laparoscopy； endometrial receptivity； galectin-3

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2015.04.012

2015-04-18；

2015-06-08

廣州市番禺區(qū)科技和信息化局基金項(xiàng)目(編號(hào)2012-Z-03-47).

*通訊作者，E-mail：xueyuzhen001@163.com.

R711.71

A

(此文編輯：蔣湘蓮)