CD133與VEGF蛋白在卵巢癌中的表達及意義

CD133與VEGF蛋白在卵巢癌中的表達及意義

孫志強 任洪波 段愛紅 申自瑋 馬 英 郭 燕

目的運用免疫組化法檢測CD133和VEGF蛋白在卵巢癌中的表達，并分析它們與臨床病理參數的相關性及生物學意義。方法采用免疫組化法檢測60例上皮性卵巢癌組織中CDl33及VEGF的表達情況。結果（1）隨卵巢癌分化程度降低，CD133及VEGF的陽性表達率增高，三組間比較差異均有統計學意義（P＜0．05）。（2）Spearman相關性分析顯示CD133表達與VEGF的表達呈正相關（r＝0．663，P＜0．05）。結論CDl33及VEGF的表達與上皮性卵巢癌的惡性程度有相關性，且兩因子間呈正相關。

卵巢癌；VEGF；CDl33；免疫組織化學

卵巢癌是女性的常見惡性腫瘤之一，起病隱匿，多數患者至晚期確診，近年來隨著腫瘤細胞減滅術滿意度不斷提高及術后輔助治療的不斷提高、完善，五年生存率有所提高，但仍徘徊在30%～50%。本課題通過免疫組織化學法檢測上皮性卵巢癌組織中CDl33與VEGF（vascular endothefial growth factor，血管內皮生長因子）蛋白的表達，探討兩者在上皮性卵巢癌發生、發展中的生物作用及應用價值，進一步探索兩者與卵巢癌的關系，為卵巢癌的早期診斷、治療及預后提供理論指導。

1 材料與方法

1.1 研究對象

收集2007年1月～2012年12月在河北省邯鄲市中心醫院婦科就診的上皮性卵巢癌患者共60例。60例患者行卵巢癌全面分期手術或腫瘤細胞減滅術，且患者術后均經病理確診，其臨床病歷資料具有完整性?；颊吣挲g30～72歲，漿液性腺癌22例，黏液性腺癌21例，宮內膜樣癌17例。按組織學分級G1、G2、G3分別為19例、21例、20例。本研究的60例患者在術前均未進行放療、化療及生物治療。

1.2 方法

標本常規用10%福爾馬林液固定，石蠟法包埋，切片厚度4 μm，然后用免疫組化法染色?？谷薈Dl33多克隆抗體購自上?；蛴邢薰荆üぷ鳚舛?：350稀釋，濃縮型），抗人VEGF單克隆抗體購自北京博奧森生物技術有限公司（工作濃度1：150稀釋，濃縮型）。

1.3 判斷標準

胞膜和胞漿內有棕黃色顆粒為CDl33蛋白陽性判斷標準。于400×高倍鏡下每張切片隨機選取10個視野，每個視野中計數100個癌細胞中的陽性個數，并計算平均陽性細胞的百分比。陽性細胞＞10%定為陽性，陽性細胞＜10%或者癌細胞全不著色定為陰性。

VEGF染色后陽性表現為境界清晰的棕黃色或棕褐色顆粒，以細胞漿內存在為主。以胞核、胞漿均無著色或單純核膜著色，無胞漿著色定為陰性；核膜、胞漿同時著色則定為陽性。計分標準：在400×光鏡下隨機選取10個高倍視野，計算平均陽性細胞百分率，結合染色強度來進行評分。最終得分為兩者乘積：0分陰性“－”，1～6分為陽性“＋”。

1.4 統計學方法

運用SPSS 17.0統計學軟件對相應數據進行處理，計數資料用χ2檢驗，Spearman檢驗用于相關性分析，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 CD133、VEGF在上皮性卵巢癌組織中表達與臨床病理的關系

胞膜和胞漿內出現棕黃色顆粒是CDl33蛋白染色陽性表現，CD133在上皮性卵巢癌的表達情況見圖1，在高分化（G1）、中分化（G2）、低分化（G3）組織中分別為31.6%，57.1%，85.0%，三者相比差異具有有統計學意義（P＜0.05），見表1。

細胞漿內出現棕黃色或棕褐色顆粒為VEGF染色陽性表現，VEGF在上皮性卵巢癌的表達情況見圖2，在高分化（G1）、中分化（G2）、低分化（G3）組織中分別為47.4%、66.7%、90.0%，三者相比差異具有有統計學意義（P＜0.05），見表1。

2.2 上皮性卵巢癌組織中CD133與VEGF表達的相關性

上皮性卵巢癌組織中CD133和VEGF共表達25例，VEGF表達陽性而CD133陰性表達者16例，CD133陽性表達而VEGF陰性表達者10例；計數資料的相關分析結果顯示，在卵巢上皮性癌中CD133與VEGF的表達具有相關性（r＝0.663， P＝0.04）。

圖1 CD133在卵巢癌中的表達（400×）；圖2 VEGF在卵巢癌中的表達（400×）

3 討論

CDl33是由865個氨基酸組成的分子量為120 kDa的跨膜糖蛋白，在內皮祖細胞，間質干細胞［1］等細胞中均有特異表達［2］。研究表明，CD133在細胞膜的形成及生理作用中發揮重要作用。后來的研究發現正常的非淋巴造血組織中也能檢測到CDl33蛋白的表達［3］。CDl33蛋白目前主要用于腫瘤干細胞的研究［4］。這類陽性細胞僅占腫瘤細胞的極少數，卻具有自我增殖、自我更新、自我分化的能力。CDl33陽性細胞在大量動物實驗也被證實具有強烈的致瘤性，而CDl33陰性腫瘤細胞大多不具有致瘤性。CDl33陽性細胞表達與多種腫瘤干細胞（Cancer Stem Cells，CSC）具有相關性，因此我們認為CDl33陽性細胞具有腫瘤的惡性表型和浸潤能力［5］，具有腫瘤干細胞的生物學特性。

眾所周知，任何腫瘤組織的生長、侵潤及轉移，均需要具備適合腫瘤干細胞生長的微環境，腫瘤微環境中最重要的因素之一是新生血管，缺乏新生血管甚至可直接抑制腫瘤干細胞更新。腫瘤的血管生成是極其復雜的過程，目前發現，VEGF是高度特異性促血管生長因子之一，通過影響腫瘤血管生成途徑促進腫瘤的進展［6］。腫瘤血管目前被認為是腫瘤發生的重要表現并作為腫瘤生態系統中重要因素參與并影響腫瘤的生物學行為［7］。

研究認為，腫瘤干細胞與腫瘤血管微環境之間作用是雙向的，它們之間的作用互相促進，互為因果［8］。神經膠質瘤干細胞生長的培養基中，CD133＋腫瘤干細胞的VEGF水平高于CD133－；同時CD133＋神經膠質瘤干細胞移植到裸鼠后形成的腫瘤具有高表達VEGF的表現，而CD133－干細胞同樣移植到裸鼠后則幾乎不能形成腫瘤［9］。本研究結果顯示CD133蛋白表達與VEGF表達在上皮性卵巢癌組織中具有密切相關性，CD133陽性蛋白在上皮性卵巢癌細胞表達高于VEGF，這充分提示了CD133＋上皮性卵巢癌細胞可能通過高表達VEGF而刺激轉移病灶，促使新生血管形成，因此為適合繼發病灶生長創造了一個腫瘤微環境。隨著腫瘤組織惡性程度的增高，兩者水平也隨著升高，也說明該類患者進展更加迅速，更易復發和轉移。

綜上，CD133與VEGF在上皮性卵巢癌組織中的表達具有相關性，通過高表達VEGF，CD133＋上皮性卵巢癌干細胞可能促進上皮性卵巢癌侵襲轉移，從而使卵巢癌患者的術后生存受到影響?？傊?，聯合檢測CD133與VEGF可用于臨床預測上皮性卵巢癌患者術后復發及轉移風險，可作為判斷上皮性卵巢癌惡性程度、侵襲及預后的重要指標，但仍需進一步研究加以證實CD133與VEGF的相互作用及其機制。

表1 不同分化程度卵巢癌組織中CD133和VEGF表達情況

參考文獻

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Expression and Significance of CD133 and VEGF Protein in Ovarian Cancer

SUN Zhiqiang REN Hongbo DUAN Aihong SHEN Ziwei MA Ying GUO Yan Central Hospital of Handan City，Department of Neurosurgery，Handan 056001，China

ObjectiveUsing immunohistochemical methods to detect CD133 and VEGF protein expression in ovarian cancer，and analyzing their correlation with the clinical pathological parameters and biological significance．MethodsUsing immunohistochemical method to detect CDl33 in 60 cases of epithelial ovarian cancer tissue and the expression of VEGF．Results（1）With the decreasing of ovarian cancer differentiation degree， the positive expression rate of CD133 and VEGF was obviously increased， compared between the three groups，the difference was statistically significant（P＜0．05）． （2）The Spearman correlation analysis showed positive correlation between the expression of VEGF and expression of CD133（r＝0．663，P＜0．05）．ConclusionCDl33 and VEGF expression correlated with the malignant degree and epithelial ovarian cancer，and the two factors were positively correlated．

Ovarian cancer，VEGF，CDl33，Immunohistochemistry

R737．31

B

1674-9316（2015）27-0171-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2015．27．127

056001 河北省邯鄲市中心醫院神經外三科