YAP和TAZ在老年腦膠質瘤中的表達及臨床意義

YAP和TAZ在老年腦膠質瘤中的表達及臨床意義

聶柳郭洪志1劉興吉2夏鷹金虎林佳

(海口市人民醫院神經外科，海南海口570208)

摘要〔〕目的探討Yes相關蛋白(YAP)和轉錄輔助激活蛋白(TAZ)在老年人腦膠質瘤組織中的表達及其與臨床病理參數之間的相關性。方法收集52例手術切除的老年腦膠質瘤組織及12例正常腦組織，運用免疫組化技術檢測YAP和TAZ蛋白表達情況，分析YAP和TAZ蛋白表達狀態與腦膠質瘤組織學分級的相關性。結果腦膠質瘤組織中YAP蛋白的陽性表達率顯著高于對應的正常腦組織；YAP蛋白高表達與高組織學分級(Ⅲ+Ⅳ)顯著相關(P<0.05)；TAZ蛋白在腦膠質瘤組織中的陽性表達率顯著高于正常腦組織(P<0.05)；TAZ蛋白高表達也與高組織學分級(Ⅲ+Ⅳ)顯著相關(P<0.05)。結論腦膠質瘤組織中YAP和TAZ高表達且與惡性臨床病理參數相關，YAP和TAZ異常表達和核內蓄積可能是促進腫瘤進展的重要因素。

關鍵詞〔〕Yes相關表白；轉錄輔助激活蛋白；膠質瘤

中圖分類號〔〕R73〔文獻標識碼〕A〔

通訊作者：劉興吉(1966-)，男，博士，副教授，主要從事顱腦腫瘤、腦外傷等方面的研究。

1遼源市中心醫院神經外科2吉林大學第一醫院神經外科

第一作者：聶柳(1975-)，男，碩士，副主任醫師，主要從事顱腦腫瘤、外傷等方面的研究。

惡性神經膠質瘤是最常見的原發性腦惡性腫瘤，Hippo信號通路在調控細胞生長、增殖和凋亡過程中發揮重要作用〔1〕，Yes相關蛋白(YAP)及其種內同源基因-含PDZ結合修飾的轉錄輔助激活蛋白(TAZ)是Hippo通路的下游效應分子，通過核內調控基因表達促進腫瘤發生發展〔2〕。YAP異常活化與多種人類腫瘤不良預后相關〔3～5〕。TAZ在乳腺癌腫瘤發生和轉移中發揮重要作用〔6〕，在非小細胞肺癌中敲低TAZ表達能抑制細胞增殖和降低細胞惡性程度〔7〕。本文旨在檢測YAP和TAZ在人腦膠質瘤中的表達并評估其臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料收集我院病理科2009～2014年保存切經術后病理學證實的腦膠質瘤組織石蠟標本52例，男33例，女19例，年齡60～72歲，中位年齡66.7歲。參考WHO神經系統腫瘤分類系統(2000年)進行腫瘤分級：Ⅰ級11例，Ⅱ級14例，Ⅲ級20例，Ⅳ級7例。同時收集腦外傷或腦出血手術中在手術非功能區入路過程中必須切除的腦組織標本作為對照組，共12例，男7例，女5例，年齡61～69歲，中位年齡65.8歲。所有標本使用均獲得患者知情同意。

1.2方法采用標準生物素-鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP)法，對4 μm石蠟切片進行免疫組織化學染色。石蠟切片脫蠟、水化，0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0)熱修復抗原，室溫冷卻20 min；3 mol/L Trixon-X 100處理30 min，30 mol/L雙氧水-甲醇封閉內源性過氧化物酶活性。正常血清封閉非特異性結合，將兔抗人YAP抗體(H-125，sc-15407，Santa Cruz，USA)或鼠抗人TAZ抗體(ab118373，Abcam，USA)加于切片4℃孵育過夜。沖洗后，滴加生物素標記的二抗工作液，室溫孵育30 min。滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育30 min。滴加二氨基聯苯胺(DAB)顯色，蘇木蘇輕度復染。酒精梯度脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

1.3結果判定標準用陽性細胞百分比聯合染色強度進行評分，陽性細胞百分比：>75%=4分、51%～75%=3分、26%～50%=2分、6%～25%=1分、≤5%=0分；染色強度：強陽性=3分、中度=2分、弱陽性=1分、陰性=0分，評分相乘≥1分則判定為陽性表達〔8〕。

1.4統計學方法應用SPSS13.0軟件進行χ2檢驗。

2結果

2.1YAP蛋白在腦膠質瘤及正常腦組織中的表達免疫組化染色檢測腦膠質瘤組織和正常腦組織中YAP蛋白表達，陽性反應為黃色或棕色顆粒，結果顯示YAP蛋白表達主要定位于細胞核。YAP在腦膠質瘤組織中的陽性表達率〔80.8%(42/52)〕顯著高于正常腦組織〔8.3%(1/12)〕(χ2=20.036，P<0.05)。見圖1。

2.2YAP蛋白表達與腦膠質瘤組織學分級的相關性YAP蛋白在96.3%(26/27)的高組織學分級(Ⅲ+Ⅳ)腦膠質瘤組織中呈陽性表達，而在低組織學分級(Ⅰ+Ⅱ)的腦膠質瘤組織中陽性表達率為64.0%(16/25)，差異具有統計學意義(χ2=6.762，P<0.05)。

2.3TAZ蛋白在腦膠質瘤及正常腦組織中的表達免疫組化染色檢測腦膠質瘤組織和正常腦組織中TAZ蛋白表達，陽性反應為黃色或棕色顆粒，結果顯示TAZ蛋白表達主要定位于細胞核(圖2)。TAZ在腦膠質瘤組織中的陽性表達率〔78.8%(41/52)〕顯著高于正常腦組織〔16.7%(2/12)〕(χ2=14.395，P<0.05)。

圖1　YAP蛋白在腦膠質瘤組織及正常腦組織中的表達 (SP，×400，標尺：100 μm)

圖2　TAZ蛋白在腦膠質瘤組織及正常腦組織中的表達 (SP，×400，標尺：100 μm)

2.4TAZ蛋白表達與腦膠質瘤組織學分級的相關性TAZ蛋白在92.6%(25/27)的高組織學分級(Ⅲ+Ⅳ)腦膠質瘤組織中呈陽性表達，而在低組織學分級(Ⅰ+Ⅱ)的腦膠質瘤組織中陽性表達率為64.0%(16/25)，差異具有統計學意義(χ2=6.363，P=0.012)。

3討論

在過去的20年期間，針對惡性神經膠質瘤的診斷和處理措施持續進展，但腫瘤患者的預后改善不顯著，中位生存時間仍只有12～15個月，惡性神經膠質瘤的高侵襲性及放化療抵抗是導致患者預后不良的主要原因，因此尋求新的治療方法及靶點是當前的研究熱點〔1〕。Hippo信號通路最初在黑腹果蠅中被發現，其發揮抑制細胞生長和促進凋亡的功能，一系列的激酶級聯反應構成了該通路，其終末效應分子是YAP蛋白，Hippo信號通路抑制YAP活化，從而導致YAP被14-3-3ε蛋白扣留在細胞質而被泛素蛋白酶體系統降解〔5〕。而在腫瘤細胞中Hippo信號通路失活，YAP蛋白因泛素蛋白酶解途徑受阻而核內蓄積，其與TAED結合后啟動下游靶基因表達，發揮促進細胞增殖和抑制凋亡的功能，進而促進腫瘤發生發展〔9〕。研究證實YAP過表達誘導人乳腺上皮細胞(MCF10)發生上皮間質轉化(EMT)并抑制凋亡和促進細胞在軟瓊脂上錨定非依賴性生長〔10〕。在裸鼠中YAP與cIAP1協同刺激腫瘤生長，而且，肝臟特異性過表達YAP的轉基因小鼠表現為肝臟體積明顯增大并最終發生腫瘤〔11〕。研究證實多種人類惡性腫瘤中存在YAP蛋白過表達和核內蓄積，如惡性間皮細胞瘤、肝細胞癌、卵巢癌、結直腸癌和乳腺癌〔3～5〕，本研究提示YAP蛋白異常表達可能與腫瘤分化有關。

TAZ是YAP的種內同源基因，作為一個轉錄輔助因子與多個轉錄因子相互作用〔12〕。研究表明TAZ促進EMT介導的腫瘤進展，TAZ通過調整Runx2和PPARγ依賴的基因表達調控間質干細胞分化，并通過控制Smad的定位調控干細胞自我更新〔13〕。TAZ在乳腺癌和非小細胞肺癌進展中發揮重要作用。重要的是，TAZ陰性表達的結腸癌患者具有更好的預后，提示TAZ可能作為結腸癌潛在的治療靶點〔5〕。提示TAZ可能促進腦膠質瘤發生發展。初步推測在腦膠質瘤中YAP和TAZ可能是一個癌基因，發揮促進腫瘤惡性進展的功能，但具體的功能及精確的分子機制有待進一步研究。

4參考文獻

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〔2014-12-20修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)