鼻咽癌動(dòng)態(tài)增強(qiáng)MRI相關(guān)參數(shù)及其與DLC-1表達(dá)的關(guān)系

鼻咽癌動(dòng)態(tài)增強(qiáng)MRI相關(guān)參數(shù)及其與DLC-1表達(dá)的關(guān)系

周敬淳劉明張偉鄢敏袁家琳1張菁菁2

(深圳市人民醫(yī)院耳鼻咽喉科，廣東深圳518020)

摘要〔〕目的探討鼻咽癌動(dòng)態(tài)增強(qiáng)磁共振成像(MRI)/DCE-MRI相關(guān)參數(shù)及其與肝癌缺失基因(DLC)-1表達(dá)的關(guān)系。方法回顧性分析該院耳鼻喉科鼻咽癌患者89例均給予DCE-MRI檢查，獲取時(shí)間-信號(hào)曲線和最大上升斜率圖，檢查后經(jīng)鼻咽纖維鏡活檢采集鼻咽癌組織標(biāo)本，采用免疫組化方法檢測(cè)DLC-1表達(dá)。結(jié)果鼻咽癌活檢部位DCE-MRI相關(guān)參數(shù)〔最大上升斜率平均值(MMS)、最大線性斜率(LMS)與強(qiáng)化峰值(PV)〕、DLC-1表達(dá)與鼻咽癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有明顯相關(guān)性，其中臨床分期越高，合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者M(jìn)MS、LMS與PV越高，而DLC-1陽(yáng)性表達(dá)率越低(P<0.05)，DLC-1陽(yáng)性組MMS、LMS與PV值明顯低于DLC-1陰性組(P<0.05)，經(jīng)Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，MMS、LMS、PV與DLC-1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.514，-0.497，-0.494，P<0.05)。結(jié)論鼻咽癌DCE-MRI相關(guān)參數(shù)與DLC-1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，兩者均可作為鼻咽癌臨床病理特征的重要評(píng)估方法。

關(guān)鍵詞〔〕鼻咽癌；動(dòng)態(tài)增強(qiáng)磁共振；DLC-1

中圖分類號(hào)〔〕R739.63〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

基金項(xiàng)目：深圳市科技計(jì)劃項(xiàng)目技術(shù)開發(fā)技術(shù)創(chuàng)新計(jì)劃多方合作項(xiàng)目(No.CXZZ20140509151403304)

通訊作者：劉明(1956-)，男，博士，主任醫(yī)師，主要從事耳鼻咽喉-頭頸腫瘤研究。

1暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院深圳市人民醫(yī)院放射科

2北京大學(xué)深圳醫(yī)院耳鼻咽喉科

第一作者：周敬淳(1981-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事耳鼻咽喉-頭頸腫瘤研究。

肝癌缺失基因1，或腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子(DLC-1)是新型抑制癌癥基因，近期研究發(fā)現(xiàn)DLC-1在胃腸癌、乳腺癌、前列腺癌和肝細(xì)胞癌等惡性腫瘤中表達(dá)減弱，其中RhoGAP結(jié)構(gòu)域是DLC-1基因抑制癌癥的原因〔1〕。動(dòng)態(tài)增強(qiáng)磁共振成像(MRI)(DCE-MRI)是鼻咽癌的常見無(wú)創(chuàng)性診斷方法，其在鼻咽部良惡性腫瘤鑒別、鼻咽癌預(yù)后和療效評(píng)估中的價(jià)值顯著〔2〕。但關(guān)于DLC-1基因產(chǎn)物DLC-1蛋白在鼻咽癌中的表達(dá)及其與DCE-MRI特征的關(guān)系研究報(bào)道罕見，本研究就其相關(guān)性進(jìn)行探討。

1資料與方法

1.1臨床資料回顧性分析2014年1～11月我院耳鼻喉科鼻咽癌患者89例。納入標(biāo)準(zhǔn)：全部患者經(jīng)鼻咽纖維鏡活檢證實(shí)鼻咽癌病理診斷〔3〕，鼻咽癌病灶可測(cè)量，未接受任何抗腫瘤治療措施，接受鼻咽部DCE-MRI檢查。其中男61例，女28例，平均年齡(51.24±6.27)歲，臨床分期：Ⅱ期17例，Ⅲ期57例，Ⅳ期15例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移79例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移10例。

1.2DCE-MRI檢查方法①檢查步驟：采用西門子公司Avanto1.5T超導(dǎo)MRI系統(tǒng)，常規(guī)鼻咽部T1加權(quán)橫斷面、矢狀面和冠狀面平掃，MRI平面掃面后嚴(yán)格遵照以下標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描，取仰臥位，頭先位，采用頭頸聯(lián)合線圈，同時(shí)采用核磁共振專用高壓注射器(Medrad injector system，Pittsburgh)經(jīng)肘靜脈注入Gd-DTPA造影劑(Magevist)0.1 mmol/kg(美國(guó)拜耳公司生產(chǎn))，采用團(tuán)注法以4 ml/s速度完成造影劑注射后采用相同速度注入生理鹽水10 ml，注射造影劑同時(shí)開始行增強(qiáng)MRI矢狀面和冠狀面動(dòng)態(tài)掃描，選擇動(dòng)態(tài)增強(qiáng)FLASH成像序列參數(shù)：TR=38 ms，TE=4.8 ms，翻轉(zhuǎn)角30度，短陣64×128，視野23×17 cm2，時(shí)間分辨率2.5 s，連續(xù)掃描60次，第1～40次為預(yù)掃描，以確定信號(hào)強(qiáng)度基準(zhǔn)，增強(qiáng)掃描50次，共146 s。最后行常規(guī)軸位T1WI增強(qiáng)掃描，掃描參數(shù)同平掃T1WI，然后行冠狀位增強(qiáng)T1WI掃描。②DCE-MRI相關(guān)參數(shù)獲取：由專業(yè)MRI診斷醫(yī)師采用Functool 圖像分析軟件(GE公司)，采用盲法對(duì)動(dòng)態(tài)增強(qiáng)MRI圖像進(jìn)行后處理操作，測(cè)量動(dòng)態(tài)增強(qiáng)MRI參數(shù)，將動(dòng)態(tài)增強(qiáng)MRI掃描圖像輸至工作站，按同一位置的系列圖像所有像素點(diǎn)繪制時(shí)間-信號(hào)曲線，最大上升斜率(MRI參數(shù))=選取最陡段終止點(diǎn)(SI-post)與開始點(diǎn)(SI-pre)差值，即SI-post-SI-pre，獲取最大上升斜率圖。根據(jù)時(shí)間信號(hào)曲線測(cè)定最大信號(hào)強(qiáng)度值(SI-max)和起點(diǎn)信號(hào)強(qiáng)度值(SI-baseline)；根據(jù)最大上升斜率圖，選取鼻咽纖維鏡活檢部位(ROI1)和腫瘤實(shí)質(zhì)內(nèi)信號(hào)最強(qiáng)區(qū)域(腫瘤“熱點(diǎn)” 區(qū)域，ROI2)，計(jì)算ROI1與 ROI2的最大上升斜率平均值(MMS)、最大線性斜率(LMS)=(SI-post-SI-pre)/ SI-baseline×100%、強(qiáng)化峰值(PV)=(SI-max-SI-baseline)/ SI-baseline×100%。

1.3DLC-1表達(dá)測(cè)定方法①試劑與儀器：SP-9000通用型免疫組化試劑盒(美國(guó)ZYMED公司)，DLC-1兔抗人多克隆抗人抗體(美國(guó)Santa Cruz公司)，微波爐(Sanyo EM-501 s/500 s 日本)。②操作步驟：取病理科鼻咽癌病理組織，蠟塊切片脫蠟，采用3%H2O2處理10 min，蒸餾水洗滌6 min，放于乙二胺四乙酸(EDTA)緩沖液，100℃下微波爐抗原修復(fù)15 min，采用DLC-1抗體(1∶100)作為一抗染色，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木素伊紅(HE)復(fù)染，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明說(shuō)操作。③結(jié)果判定：細(xì)胞質(zhì)呈淺棕色至棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞，每張組織切片隨機(jī)選取3個(gè)高倍鏡視野，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目，取平均值，細(xì)胞無(wú)著色或陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目比例<10%評(píng)定為陰性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目比例位于10%～30%評(píng)定為弱陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目比例位于30%～60%評(píng)定為陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目比例>60%評(píng)定為強(qiáng)陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行單因素方差分析、t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)和Pearson相關(guān)性分析。

2結(jié)果

2.1DEC-MRI相關(guān)參數(shù)與鼻咽癌臨床病理特征的關(guān)系根據(jù)時(shí)間信號(hào)曲線，鼻咽癌DEC-MRI相關(guān)參數(shù)與鼻咽癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有明顯相關(guān)性，其中臨床分期越高，合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者M(jìn)MS、LMS與PV越高，不同臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度比較差異顯著(P<0.05)。見表1。

表1　DEC-MRI相關(guān)參數(shù)與鼻咽癌臨床病理特征的關(guān)系 ± s)

不同亞組間比較：P<0.05

2.2DLC-1表達(dá)與鼻咽癌臨床病理特征的關(guān)系鼻咽癌21例DLC-1陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為23.60%，DLC-1表達(dá)與鼻咽癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有明顯相關(guān)性，其中臨床分期越高，合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者DLC-1陽(yáng)性表達(dá)率越低(P<0.05)。見表2。

表2　DLC-1表達(dá)與鼻咽癌臨床病理特征的關(guān)系〔 n(%)〕

2.3DLC-1表達(dá)與鼻咽癌DEC-MRI相關(guān)參數(shù)的關(guān)系DLC-1陽(yáng)性組MMS、LMS與PV值明顯低于DLC-1陰性組(P<0.05)，經(jīng)Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，MMS、LMS、PV與DLC-1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.514，-0.497，-0.494，P<0.05)。見表3。

表3　不同DLC-1表達(dá)對(duì)鼻咽癌DEC-MRI相關(guān)參數(shù)的

3討論

鼻咽癌是鼻咽部上皮組織癌，大部分鼻咽癌集中于東南亞，我國(guó)廣東、廣西和湖南省均為鼻咽癌好發(fā)區(qū)域〔4〕。由于鼻咽癌病理與解剖的特異性，放化療是鼻咽癌的主要治療手段〔5〕。同時(shí)，隨著影像學(xué)技術(shù)提高，無(wú)創(chuàng)性MRI可初步作為鼻咽癌分期診斷的重要手段，DCE-MRI檢查通過多方位、清晰顯示腫瘤形態(tài)大小，周圍軟組織、腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及其血流灌注特點(diǎn)〔6〕。DEC-MRI檢查采用對(duì)比增強(qiáng)造影劑Gd-DTPA，Gd與DTPA相結(jié)合形成螯合物，毒性低，安全性能高，毒副作用發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)顯著降低〔7〕。DLC-1基因位于人類染色體8p21.3-22，全長(zhǎng)3.8 kb，含有14個(gè)外顯子，編碼1 091個(gè)氨基酸，123 kD蛋白質(zhì)組成，與鼠p122-RhoGAP基因具有86%同源性〔8〕。該基因在人類正常組織中廣泛表達(dá)，其中心肺組織表達(dá)量最高，DLC-1在乳腺癌、肝腸癌、前列腺癌和卵巢癌等多種惡性腫瘤中表達(dá)下降或缺失〔9〕。研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)轉(zhuǎn)染DLC-1-cDNA肝癌細(xì)胞系具有抑制惡性腫瘤繼續(xù)生長(zhǎng)的作用〔10〕。DLC-1蛋白是Rho家族小分子GTP酶活化蛋白(RhoGAP)，RhoGAP具有調(diào)節(jié)細(xì)胞信號(hào)分子，GAP結(jié)合的活化狀態(tài)向失活結(jié)合狀態(tài)GDP轉(zhuǎn)變。DLC-1蛋白通過下調(diào)RhoGAP活性發(fā)揮腫瘤生長(zhǎng)抑制作用。但關(guān)于鼻咽癌DEC-MRI相關(guān)參數(shù)與DLC-1的關(guān)系有待進(jìn)一步探討。

本文結(jié)果揭示了DCE-MRI相關(guān)參數(shù)與DLC-1表達(dá)緊密相關(guān)。本研究采用DCE-MRI參數(shù)包括反映信號(hào)強(qiáng)度變化快慢(MMS、LMS)和信號(hào)強(qiáng)度變化程度(PV)兩種類型指標(biāo)〔11〕。隨著鼻咽癌病情的發(fā)生和發(fā)展，腫瘤新生血管面積及其通透性增加，對(duì)比增強(qiáng)造影劑通過血管壁速度增快，DCE-MRI獲取時(shí)間-信號(hào)曲線(TIC)上升增快，其MMS、LMS增加。因此，MMS、LMS反映腫瘤血管灌注與Gd-DTPA滲漏，其中DLC-1與鼻咽癌強(qiáng)化快慢的DCE-MRI參數(shù)緊密相關(guān)。腫瘤信號(hào)強(qiáng)度變化程度(PV)反映單位體積Gd-DTPA含量，其與腫瘤血管灌注和細(xì)胞、血管外間隙體積相關(guān)，TIC最高點(diǎn)位于造影劑首次通過時(shí)段，鼻咽癌血管內(nèi)血流灌注量越多，強(qiáng)化峰值越大〔12〕。腫瘤新生血管生長(zhǎng)時(shí)MMS、LMS、PV值越大，反之，抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的DLC-1蛋白呈表達(dá)下降或缺失狀態(tài)。因此，DCE-MRI相關(guān)參數(shù)與DLC-1蛋白表達(dá)緊密相關(guān)，兩者均與鼻咽癌臨床病理特征有明顯相關(guān)性，主要體現(xiàn)在鼻咽癌臨床分期越高，合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者M(jìn)MS、LMS、PV明顯增加，而DLC-1蛋白表達(dá)顯著降低。

4參考文獻(xiàn)

1湯華，楊曉俊，趙鐵，等.DLC-1蛋白在胃癌中的表達(dá)及其臨床病理意義〔J〕.安徽醫(yī)學(xué)，2010;31(11):1328-31.

2田麗，劉立志，范衛(wèi)君.鼻咽癌 MRI 動(dòng)態(tài)增強(qiáng)參數(shù)與微血管密度和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的相關(guān)性研究〔J〕.中山大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)科學(xué)版，2009;30(3):336-40.

3盧小迪，朱小東，趙偉，等.抑制磷酸腺苷激活的蛋白激酶活性增強(qiáng)人鼻咽癌細(xì)胞放射敏感性〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2014;43(22):2900-2.

4Pan WL，Wong JH，F(xiàn)ang EF，etal.Preferential cytotoxicity of the type I ribosome inactivating protein alpha-momorcharin on human nasopharyngeal carcinoma cells under normoxia and hypoxia〔J〕.Biochem Pharmacol，2014;89(3):329-39.

5鮑志宇，崔英.VEGF和survivin與鼻咽癌的相關(guān)性研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2014;34(8):2315-6.

6胡麗霞，周亞燕，郭軼群，等.鼻咽癌DCE-MRI定量分析與乏氧誘導(dǎo)因子-1α表達(dá)的關(guān)系〔J〕.廣東醫(yī)學(xué)，2013;34(24):3757-61.

7陽(yáng)君，蘇丹柯，劉麗東，等.1.5TMRI擴(kuò)散加權(quán)成像對(duì)鼻咽癌頸部小淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移瘤的診斷價(jià)值〔J〕.實(shí)用放射學(xué)雜志，2014;30(5):736-9.

8宋明芮，蓋大偉，張曉云，等.抑癌基因 DLC-1 的研究進(jìn)展〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014;14(20):3970-2.

9宋明芮，成慧，張曉云，等.子宮頸鱗狀細(xì)胞癌中DLC-1和Cyclin D1的表達(dá)及其相關(guān)性分析〔J〕.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2014;30(8):871-5.

10馮湘玲，陳歡，劉衛(wèi)東，等.甲基轉(zhuǎn)移酶對(duì)鼻咽癌細(xì)胞中DLC-1基因表達(dá)的影響〔J〕.生命科學(xué)研究，2014;18(4):292-8.

11余小多，林蒙，黃曼妮，等.動(dòng)態(tài)增強(qiáng)MRI評(píng)估子宮頸鱗癌同步放化療療效〔J〕.臨床放射學(xué)雜志，2014;33(1):54-8.

12李艷玲，李潔，曹崑，等.乳腺癌DCE-MRI表現(xiàn)與分子標(biāo)志物的相關(guān)性〔J〕.中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù)，2014;30(7):1032-6.

〔2015-04-15修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)