miR－126 rs4636297 G>A基因多態性與冠心病的相關性

·心腦血管及代謝性疾病·

miR-126 rs4636297 G>A 基因多態性與冠心病的相關性

岑錦明熊卿圓成捷陳宇寧劉新光熊興東楊希立

(佛山市第一人民醫院，廣東佛山528000)

摘要〔〕目的探討miR-126 rs4636297 G>A基因多態性與冠心病遺傳易感的關系。方法利用聚合酶鏈式反應-連接酶檢測反應(PCR-LDR)分析技術，對563例冠心病患者和646例對照個體的miR-126 rs4636297 G>A多態位點進行分型，采用非條件邏輯回歸分析該多態位點與冠心病易感的相關性。結果AA、AG、GG基因型在冠心病組中的分布頻率分別為2.1%、22.6%和75.3 %，在對照組中分別是1.7%、25.4%和72.9%，兩組間基因型頻率分布無統計學差異(χ2=1.525，P=0.466)。攜帶miR-126 rs4636297 A變異等位基因與冠心病的遺傳易感無明顯相關性(OR=0.92，95%CI=0.73～1.16，P=0.484)。結論miR-126 rs4636297 G>A多態位點與華南地區冠心病易感無相關性。

關鍵詞〔〕miR-126；單核苷酸多態性；冠心??；遺傳易感性

中圖分類號〔〕R349.3〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：國家自然科學基金(81170327)；廣東省自然科學基金(S2012010008219)；廣東省科技廳項目(2011B031800193)

通訊作者：楊希立(1963-)，男，碩士，主任醫師，主要從事冠心病的診療研究。

第一作者：岑錦明(1985-)，男，碩士，主治醫師，主要從事冠心病的診療研究。

Association analysis between miR-126 rs4636297 G>A polymorphism and the risk for coronary artery disease

CEN Jin-Ming，XIONG Qing-Yuan，CHENG Jie，etal.

Department of Cardiovascular Disease，the First People's Hospital of Foshan，Foshan 528000，Guangdong，China

Abstract【】ObjectiveTo investigate the relationship between the miR-126 rs4636297 G>A polymorphism and the risk for coronary artery disease in Southern Chinese population.MethodsThe genotypes of the miR-126 rs4636297 G>A polymorphism were determined in 563 coronary artery disease patients and 646 control blood donors by polymerase chain reaction-ligase detection reaction(PCR-LDR).Association between the polymorphism and the risk for coronary artery disease was evaluated by unconditional logistic regression analysis.ResultsThe frequency of AA，AG and GG genotypes in the case subjects were 2.1 %，22.6% and 75.3 % respectively and in the control subjects were 1.7%，25.4% and 72.9%.No significant difference was observed in the frequency of miR-126 rs4636297 genotypes between cases and controls(χ2=1.525，P=0.466).No significantly increased risk for coronary artery disease was observed for those carrying A variant allele(OR=0.92，95%CI=0.73～1.16，P=0.484).ConclusionsmiR-126 rs4636297 G>A polymorphism is not associated with coronary artery disease in Southern Chinese population，

【Key words】miR-126;Single nucleotide polymorphism;Coronary artery disease;Genetic susceptibility

目前有關冠心病遺傳易感的研究主要集中在蛋白編碼基因的多態性(SNPs)，而對于另一類重要的非蛋白編碼基因——miRNA基因的SNPs與冠心病遺傳易感的相關性分析尚待挖掘〔1〕。研究表明，miR-126在冠心病的發生過程中發揮重要角色〔2～5〕。最近有文獻報道在miR-126的初級轉錄本上有一個SNP位點miR-126 rs4636297〔6〕。迄今為止，有關miR-126 rs4636297 G>A多態性與冠心病的遺傳易感性尚未見報道。本研究采用聚合酶鏈式反應-連接酶檢測反應(PCR-LDR)技術檢測miR-126 rs4636297 G>A多態基因型在華南地區冠心病患者及對照人群中的發生頻率，探討miR-126 rs4636297 G>A多態位點與冠心病遺傳易感性的關系。

1資料與方法

1.1對象本研究包括646例對照組人群和563例冠心病患者。患者樣本隨機收集2011年3月至2013年5月在佛山市第一人民醫院治療，并且經冠狀動脈造影等檢查確診為冠心病的患者。冠心病診斷標準參照國際心臟病學會及WHO《缺血性心臟病的命名及診斷標準》，冠狀動脈造影時顯示主要動脈中至少有1支內徑狹窄>50%。對照組是經心臟核素掃描(ECT)、CT冠脈成像(CTA)或冠狀動脈造影等檢查排除冠心病的個體。所有冠心病患者和正常對照個體均為無血緣關系的華南地區漢族人群，排除先天性心臟病、心肌病、嚴重肝臟和腎臟疾病。每例標本都具備年齡、性別、有無吸煙、有無喝酒、收縮壓(SBP)和舒張壓(DBP)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、冠心病家族史等資料。在標本采集過程中，所有個體在入選時均告知其研究方法及意義，做到知情同意。本研究得到了佛山市第一人民醫院醫學倫理委員會的批準。

1.2基因組DNA抽提每份樣品均取靜脈血2 ml，EDTA-K2抗凝，按照TIANamp血液基因組DNA提取試劑盒(Tiangen)說明抽提外周血基因組DNA。-80℃保存備用。

1.3基因分型采用PCR-LDR方法對miR-126 rs4636297 G>A多態性進行基因分型。采用Primer Premier 5.0 軟件設計特異性引物。PCR反應的上游引物為5′TACTTTTGGTACGCGCTGTG 3′，下游引物為5′ CAGAGGTCTCAGGGCTATGC 3′，擴增目標片段長度為188 bp。多重PCR反應體系為20 μl，95℃預變性2 min，然后94℃30變性30 s，59℃退火1 min 30 s，72℃延伸1 min，共35次循環，最后72℃延伸10 min。3%瓊脂糖凝膠電泳檢測，觀察PCR產物的效果，確定其作為模板在LDR反應中加入的量。LDR反應體系為10 μl，95℃ 2 min，然后94℃變性15 s，50℃反應25 s，共30次循環。產物經ABI 377電泳測序，結果運用GeneMapper 4.0軟件進行數據分析。

1.4統計學分析采用SPSS13.0軟件，利用goodness-of-fitχ2檢驗多態位點的基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡；連續性變量資料采用t檢驗，分類變量資料采用χ2檢驗。Pearsonχ2檢驗比較組間基因型分布差異以及不同基因型間血壓、血糖和血脂水平的差異；非條件邏輯回歸計算比值比(OR)及其95%置信區間(CI)。

2結果

2.1冠心病組和對照組一般情況比較除總膽固醇(TC)外，其他變量的均數或分布在兩組間均有顯著差異(P<0.001)。值得注意的是，冠心病組SBP、DBP、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、LDL-C、飲酒、吸煙等變量顯著高于對照組。見表1。

2.2miR-126 rs4636297 G>A基因型的分布及Hardy-Weinberg 平衡檢驗本研究miR-126 rs4636297 G>A多態性的基因型分布頻率在華南地區對照人群中分別為72.9%(GG)、25.4%(AG)和1.7%(AA)。Goodness-of-fitχ2檢驗表明miR-126 rs4636297 G>A多態位點在對照組中符合Hardy-Weinberg 平衡(P=0.446)，表明本研究對照人群具有群體代表性，該人群的miR-126 rs4636297基因型分布可反映整體人群基因型的分布情況。

2.3miR-126 rs4636297 G>A多態性與冠心病遺傳易感的關系AA、AG、GG基因型在冠心病組中的分布頻率分別為2.1%、22.6%和75.3 %，在對照組中分別是1.7%、25.4%和72.9%，兩組間基因型頻率分布無統計學差異(χ2=1.525，P= 0.466)。非條件邏輯回歸分析發現，以AA基因型作參照，AG基因型和GG基因型分別與其比較，均與冠心病易感無相關性(OR值分別為0.70 和0.88，95%CI分別為0.24～2.09和0.30～2.54)。等位基因分析結果也顯示，攜帶miR-126 rs4636297 A變異等位基因與冠心病的遺傳易感無明顯相關(OR=0.92，95%CI=0.73～1.16，P=0.484)。在不同的遺傳模型下，該位點的基因型分布在病例組和對照組的差異也無統計學差異。見表2。

表2　miR-126 rs4636297 G>A多態性與

非條件邏輯回歸分析，并用年齡、性別、吸煙、喝酒、高血壓、糖尿病、高脂血癥和冠心病家族史等因素進行校正

3討論

心肌梗死后的血管再生、心肌重構，血管內皮細胞損傷與衰老等冠心病發生發展過程中發揮重要的作用〔2～5〕。這提示miRNAs基因的多態性可能與冠心病的遺傳易感性密切相關。

miR-126是一個重要的血管生成與發育相關的miRNA。它不僅可以通過靶向調控Spred1、PIK3R2和pak1等基因的表達來調節血管生成〔7～9〕，還可以調節細胞黏附分子1的表達和調控血管炎癥反應〔10〕。作為血管內皮細胞的前體細胞，血管內皮祖細胞不僅參與胚胎血管的生成，而且還參與出生后的血管生成過程。最近有研究發現，與健康對照相比，miR-126在冠心病患者的血管內皮祖細胞中低表達〔5〕。還有研究發現miR-126在冠心病患者的血漿中也顯著下調。相反，心肌中高表達的miR-133a和miR-208a在冠心病患者的血漿中高表達〔4〕。以上這些結果都提示miR-126的表達失調可能與冠心病的發生密切相關。miR-126 rs4636297是在miR-126的初級轉錄本上的一個SNP位點。有文獻報道，該SNP位點的G 等位基因顯著抑制Pri-miR-126加工為成熟體miR-126〔6〕。最近有文獻在大樣本量中(2 854份病例和3 188份對照)發現，miR-126 rs4636297在德國人群中并不影響乳腺癌的發病風險〔11〕。本研究結果發現miR-126 rs4636297 G>A多態位點并不影響個體患冠心病的發病風險，提示miR-126 rs4636297 G>A多態與華南地區人群的冠心病發生沒有相關性。

4參考文獻

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〔2014-11-13修回〕

(編輯袁左鳴)