姬松茸多糖對糖尿病模型大鼠免疫功能的影響

姬松茸多糖對糖尿病模型大鼠免疫功能的影響

黃清松李紅枝鄭敏

(廣東藥學院基礎學院，廣東廣州510006)

摘要〔〕目的觀察姬松茸多糖對糖尿病大鼠免疫功能的影響。方法2月齡雌性SD大鼠隨機分為，對照組，模型組，姬松茸多糖低、高劑量組，每組10只。采用鏈脲佐菌素(STZ)誘發大鼠糖尿病模型，觀察姬松茸多糖對糖尿病大鼠體重，血糖水平，血CD4+、CD8+T細胞計數，血清腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-6水平以及胸腺、脾指數的影響。結果與模型組比較，姬松茸多糖組大鼠體質量，血CD4+、CD8+T細胞計數，胸腺、脾指數明顯升高(P<0.05或P<0.01)；血糖，血清TNF-α、IL-6水平明顯下降(P<0.05或P<0.01)。結論姬松茸多糖可干預糖尿病大鼠多項免疫指標，發揮輔助治療作用。

關鍵詞〔〕姬松茸多糖；糖尿病；腫瘤壞死因子；白細胞介素-6；胸腺指數；脾指數

中圖分類號〔〕R965.1〔

第一作者：黃清松(1966-)，男，碩士，高級實驗師，主要從事細胞生物學研究。

姬松茸為蘑菇科蘑菇屬真菌，富含蛋白質和糖類。姬松茸多糖是從姬松茸子實體中提取的有效活性成分，具有降血糖、提高免疫力、抗病毒、抗腫瘤等作用〔1～3〕。有關姬松茸藥用價值的研究多集中在抗腫瘤方面，其對糖尿病的相關研究報道較少。本研究通過對大鼠體質量，血糖水平，血CD4+、CD8+T細胞計數，血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)水平以及胸腺、脾指數的測定，探討姬松茸多糖對鏈脲佐菌素(STZ)誘導的糖尿病大鼠免疫功能的影響。

1材料與方法

1.1動物藥品及試劑2月齡，SPF級SD雌性大鼠，體重200～250 g，由廣東省醫學實驗動物中心提供，生產許可證號：SCXK(粵)2008-0002。姬松茸多糖由本研究組自制：取姬松茸原菌體1 000 g,加約5倍蒸餾水浸泡12 h,文火煮沸1 h,收集煎液,再加等體積的蒸餾水文火煮沸30 min,收集煎液。合并2次煎液,靜置12 h,過濾,濃縮至一定體積后,加入80%乙醇沉淀12 h,離心，收集醇沉物。醇沉物于恒溫干燥箱(75℃～80℃)至相對干燥,得姬松茸多糖粗制品,每克浸膏相當于生藥3.0 g。鏈脲佐菌素(STZ)為Sigma公司產品；血糖試劑盒為上海微晶生物技術有限公司產品；TNF-α、IL-6由北京東亞免疫技術研究所提供；紅細胞裂解液、小鼠抗大鼠CD4+R-PE、小鼠抗大鼠CD8+R-PE為Caltag公司產品。

1.2方法

1.2.1糖尿病模型制備〔4〕禁食12 h后，按劑量60 mg/kg一次性腹腔注射經微孔濾膜過濾滅菌STZ液(用0.1 mol/L檸檬酸鈉緩沖液稀釋至濃度1%)。72 h后連續3次隨機檢測血糖，凡血糖≥16.7 mmol/L即為成功糖尿病模型。

1.2.2分組與給藥取正常大鼠10只為對照組，取造模成功大鼠30只，隨機分為：模型組，姬松茸多糖低、高劑量組，每組10只。姬松茸多糖低、高劑量組分別灌胃(ig)相應劑量姬松茸多糖溶液，對照組和模型組ig相應容量生理鹽水，連續8 w。

1.2.3體重、空腹血糖(FPG)、TNF-α、IL-6的測定在末次給藥前12 h動物禁食，給藥2 h后，稱質量，眼球后靜脈叢毛細管取血，血液靜置后3 500 r/min離心10 min，取上清備用。按試劑盒說明書檢測血糖、TNF-α和IL-6水平。

1.2.4外周血CD4+、CD8+T細胞測定按1.2.3方法取血,肝素抗凝,測定管加熒光標記的抗體50 μl，后加入肝素抗凝全血50 μl,混勻，室溫孵育15 min，加入50μL溶血劑，PBS洗滌；0.5～1 ml PBS重懸細胞,上機進行檢測。

1.2.5脾臟、胸腺指數測定取血后脫頸椎處死大鼠，無菌條件下剖取胸腺和脾臟，剪去筋膜及脂肪，濾紙吸干后稱質量，計算：脾指數=脾質量(mg)/體質量(g)；胸腺指數=胸腺質量(mg)/體質量(g)。

2結果

2.1一般情況對照組大鼠體重明顯增加、精神狀況良好、反應靈敏、毛發光澤順滑、生長發育正常。模型組和姬松茸多糖組大鼠全部成模，均出現“三多一少”(即多飲、多尿、多食及消瘦)、弓背蛇體、精神萎磨、反應遲緩、毛豎而晦暗等癥狀，與對照組比較，差異顯著(P<0.05)。

2.2大鼠體重和FPG水平與對照組比較，模型組大鼠體重顯著下降(P<0.01)，FPG水平則顯著升高(P<0.01)。給予姬松茸多糖后，與模型組比較，姬松茸多糖高劑量組大鼠體重明顯升高(P<0.05)，FPG水平明顯下降(P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1　各組大鼠體重和

與模型組比較:1)P<0.05，2)P<0.01，下表同

2.3大鼠外周血CD4+、CD8+T細胞計數和CD4+/CD8+值與正常組比較，模型組大鼠血CD4+、CD8+T細胞計數均顯著下降(P<0.01)，CD4+/CD8+值明顯下降(P<0.05)。給予姬松茸多糖后，與模型組比較，姬松茸多糖低、高劑量組大鼠血CD4+、CD8+T細胞計數均明顯提高(P<0.05或P<0.01)，CD4+/CD8+值有升高趨勢，但無顯著差異(P>0.05)。見表2。

表2　各組大鼠外周血CD4 +、CD8 +T細胞計數和

2.4大鼠血清TNF-α、IL-6水平與對照組比較，模型組大鼠血清TNF-α、IL-6水平均顯著升高(P<0.01)。給予姬松茸多糖后，與模型組比較，姬松茸多糖低、高劑量組大鼠血清TNF-α、IL-6水平均明顯下降(P<0.05或P<0.01)。見表3。

表3　各組大鼠血清TNF-α、IL-6水平

2.5大鼠胸腺指數和脾指數與正常組比較，模型組大鼠胸腺、脾指數均顯著降低(P<0.01)。給予姬松茸多糖后，與模型組比較，姬松茸多糖低、高劑量組大鼠胸腺、脾指數均明顯升高(P<0.05或P<0.01)。見表4。

表4　各組大鼠胸腺指數和脾指數比較

3討論

糖尿病是一組以慢性糖、脂肪和蛋白質的代謝紊亂為特征的內分泌疾病，是由于胰島素分泌和(或)作用缺陷所引起。大量研究顯示,免疫功能紊亂是糖尿病患者病程加速和病情加重的重要原因〔5〕。

T淋巴細胞是機體最重要的免疫細胞群,按功能分為輔助性T細胞、細胞毒性T細胞和抑制性T細胞，根據細胞表面分子CD分為CD4+和CD8+兩大亞群。CD4+代表輔助性T細胞，CD8+代表抑制和細胞毒性T細胞，CD4+/CD8+細胞比值處于動態平衡,維持機體正常免疫應答。糖尿病時，機體免疫力下降,細胞免疫功能也明顯下降,易致感染。有研究證實,糖尿病合并感染組比較糖尿病未合并感染組，血清中CD4+、CD8+、CD4+/CD8+明顯下降〔6〕。

IL-6、TNF-α等是炎癥介導及免疫損傷的重要調節因子，對糖尿病的發生起著重要作用。IL-6是一種多功能的生物性細胞因子,可作用于內皮細胞，通過合成黏附分子和化學誘導分子，提高白細胞殺傷吞噬能力。糖尿病時，IL-6過度激活和擴增T細胞、B細胞，促進細胞凋亡而破壞胰島R細胞。TNF-α主要由單核細胞和內皮細胞產生,正常情況下，低水平的TNF-α可調節炎癥反應及促進組織修復，起到生長因子的作用。然而,糖尿病時異常增高的TNF-α可直接作用于胰島細胞、微血管等，造成組織損傷。

本研究提示姬松茸多糖可干預糖尿病大鼠多項免疫指標，為其輔助治療糖尿病提供了理論依據。

4參考文獻

1Mizuno M，Minato K，Ito H，etal.Antitumor polysaccharide from the mycelium of liquid cultured agaricus blazei murill〔J〕.Biochem Mol Biol Int,1999;47(4)：707-14.

2李師鵬，安利國．真菌多糖免疫活性的研究進展〔J〕.菌物系統，2001;20(4)：581-7.

3劉常金，谷文英.巴西蘑菇胞外多糖的分離及抗腫瘤活性研究〔J〕.食品與發酵工業，2001;27(11)：27-9.

4陳秋，夏永鵬，邱宗蔭.2型糖尿病大鼠模型的建立與評價〔J〕.天津醫藥，2006;6(3):33-5.

5姚旌旗,舒思潔,趙驥,等.脂糖舒對糖尿病大鼠血液T淋巴細胞亞群和免疫器官系數的影響〔J〕.山東醫藥,2006;46(7)：9-11.

6方榮,李紅.2型糖尿病伴感染患者T淋巴細胞亞群和自然殺傷細胞的測定及意義〔J〕.浙江醫學,2003;25(5)：263-5.

〔2012-10-10修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)