奧沙利鉑聯合地塞米松對肺腺癌A549細胞增殖的影響

奧沙利鉑聯合地塞米松對肺腺癌A549細胞增殖的影響

李力，鄧敏

(湖北省武漢市普仁醫(yī)院，湖北武漢430081)

摘要：目的：研究奧沙利鉑聯合地塞米松對肺腺癌A549/DDP細胞及肺腺癌患者外周純化Th17細胞的影響。方法：使用不同濃度的奧沙利鉑(0.3125μg/mL、0.625μg/mL、1.25μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL)及地塞米松(1nmoL/L、10nmoL/L、100nmoL/L、200nmoL/L、500nmoL/L、1000nmoL/L)在不同時間點(24h、48h、72h)干預人肺腺癌A49/DDP細胞及Th17細胞，通過細胞增殖抑制實驗、細胞凋亡實驗檢測肺腺癌細胞生長抑制率及細胞凋亡情況，結果：在1nmoL/L～200nmoL/L時地塞米松對肺腺癌A549細胞增殖無抑制作用，500～1000nmoL/L的濃度范圍內，地塞米松以劑量依賴性方式抑制肺腺癌A549細胞增殖，并表現出明顯的量效關系(r=0.282，P<0.05)；且隨著作用時間的延長，抑制率逐漸增加，呈現出濃度和時間依賴性。在0.3125～1.25μg/mL奧沙利鉑肺腺癌A549細胞增殖無抑制作用，2.5～10μg/mL奧沙利鉑以時間及劑量依賴性對肺腺癌A549細胞的增殖產生抑制作用，當5μg/mL及10μg/mL奧沙利鉑作用于肺腺癌A549細胞細胞72h后，抑制率分別為61.12±0.98%、63.67±0.18%，抑制作用相當(P>0.05)。連續(xù)給藥24h、48h、72h后發(fā)現干預24h后即對肺腺癌A549細胞增殖產生抑制作用，聯合用藥組OD值明顯低于單用組，即聯合用藥其抑制率顯著高于其他單用組，且趨勢隨著用藥時間的延長而逐漸明顯。結論：地塞米松聯合奧沙利鉑聯合用藥能產生協同作用，抑制A549細胞增殖。

關鍵詞：肺腺癌;地塞米松;奧沙利鉑;增殖抑制

文章編號：1006-6233(2015)11-1774-04

基金項目：*國家自然科學基金，(編號：Q2007C02)

文獻標識碼：A

非小細胞肺癌(NSCLC)屬于腺癌最常見的肺癌病理類型也是預后最差的惡性腫瘤之一。據臨床研究表明NSCLC具有高度異質性，能夠抵抗化療藥物的治療，5年死亡率高達80%[1]。雖然關于NSCLC癥的知識不斷增多，但有關NSCLC的發(fā)病機制仍不明確，仍很難確定肺癌的異質性和耐藥性的發(fā)病基礎。地塞米松屬于腎上腺皮質激素類藥，具有理想的抗炎、抗過敏和抗毒效應，目前被廣泛運用于炎癥、哮喘等疾病，并隨著腫瘤研究的不斷深入，地塞米松逐漸在抗腫瘤領域被推廣，有文獻顯示：地塞米松可以增強腫瘤患者對于化療的敏感性，從而提高藥物的抗腫瘤作用。奧沙利鉑作為目前最重要化療藥物之一被頻繁地運用于NSCLC的治療，但其作用機制也眾說紛紜。腫瘤細胞的增殖與凋亡之間的平衡趨向決定腫瘤的發(fā)生發(fā)展。凋亡過程受到機體癌基因與抑癌基因的雙重調控，直接參與新陳代謝過程中細胞數目的調節(jié)，一旦凋亡受阻將導致腫瘤細胞的過度增殖而引發(fā)癌癥，因此猜想地塞米松及奧沙利鉑發(fā)揮抗腫瘤效應是否是通過促進腫瘤細胞凋亡實現的。本研究旨在分析奧沙利鉑及地塞米松對肺腺癌A549細胞增殖的影響，匯報如下：

1資料與方法

1.1材料

1.1.1細胞株:人肺腺癌A549/DDP細胞，由上海生命科學院提供。按照WHO肺癌分型標準及UICC(2009年)新的國際肺癌分期標準分型，將本院2009年1月至2013年1月50例NSCLC患者納入研究并設為觀察組，其中男性23例，女性27例，年齡28～76歲，平均(46±8.2)歲。患者住院前均未接受化療，同期20例健康體檢者設為對照組，其中男性11例，女性9例，年齡27～75歲，平均(45±7.7)歲。兩組在年齡、性別等一般情況比較方面無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，具有可比性。

1.1.2藥物:奧沙利鉑注射液(生產廠家：南京制藥廠,規(guī)格：20mg/20mL*支,批準文號：國藥準字H20030675,生產批號：20110111～20140111)。地塞米松注射液(生產廠家：天津金耀藥業(yè)有限公司,規(guī)格：1mL:1mg*支,批準文號：國藥字H120210514)

1.1.3主要試劑和儀器:RPMI 1640和胎牛血清(美國Thermo公司)；佛波酯(PMA)、離子霉素(Ion)、莫能菌素(Mon)、破膜劑、CD4-FITC、IL-17A-APC流式抗體；酶標儀，美國Thermo labsystem公司；BD FACSVerse System，美國BD Biosciences公司。

1.2方法

1.2.1細胞培養(yǎng)方法:常規(guī)復蘇肺腺癌A549細胞細胞株，以1640培養(yǎng)基(含10%的胎牛血清)培養(yǎng)于37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱，胰酶消化傳代一次。

1.2.2細胞抑制率實驗:細胞吹打成懸液，密度調整為1×105個/mL，每孔200μL均勻接種于96孔板中，按地塞米松(濃度分別設1nmoL/L、10nmoL/L、100nmoL/L、200nmoL/L、500nmoL/L、1000nmoL/L)、奧沙利鉑(濃度分別為0.3125μg/mL、0.625μg/mL、1.25μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL)考察各藥體外最佳濃度，再根據藥物最佳濃度將實驗空白組、溶劑組、地塞米松組、奧沙利鉑組、地塞米松+奧沙利鉑組以脂多糖進行干預，24h后，每孔加入相應藥液，37℃5%CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育，24h后每孔加入5g/LMTT 20μL，放入孵箱繼續(xù)孵育4h，棄上清液，每孔加入DMSO 150μL，震蕩10min，用全自動酶標光度儀在490nm波長下讀取吸光度A值，記錄結果。

2結果

2.1不同濃度的地塞米松在不同時間點對肺腺癌A549細胞增殖的影響:在1nmoL/L～200nmoL/L時地塞米松對肺腺癌A549細胞增殖無抑制作用，500nmoL/L～1000nmoL/L的濃度范圍內，地塞米松以劑量依賴性方式抑制肺腺癌A549細胞增殖，并表現出明顯的量效關系(r=0.282，P<0.05)；且隨著作用時間的延長，抑制率也是逐漸增加，呈現出濃度和時間依賴性。見表1。

表1　不同濃度不同時間點地塞米松(DEX)對A549增殖的影響

2.2不同濃度的奧沙利鉑在不同時間點對肺腺癌A549細胞增殖的影響:在0.3125～1.25μg/mL奧沙利鉑肺腺癌A549細胞增殖無抑制作用，2.5～10μg/mL奧沙利鉑以時間及劑量依賴性對肺腺癌A549細胞的增殖產生抑制作用，當5μg/mL及10μg/mL奧沙利鉑作用于肺腺癌A549細胞細胞72h后，抑制率分別為61.12±0.98%、63.67±0.18%，抑制作用相當(P>0.05)。見表2。

表2　不同濃度不同時間點奧沙利鉑對A549增殖的影響 ±s，n=6)

2.3聯合用藥對肺腺癌A549細胞增殖的影響:因此聯合用藥時地塞米松以1000ng/mL進行，奧沙利鉑以5μg/mL濃度進行下一步考察。基于此，繼續(xù)將研究分為空白組，溶劑組、地塞米松組(1000ng/mL)、奧沙利鉑組(5μg/mL)以及地塞米松+奧沙利鉑組，連續(xù)給藥24h、48h、72h后發(fā)現干預24h后即對肺腺癌A549細胞增殖產生抑制作用，聯合用藥組OD值明顯低于單用組，即聯合用藥其抑制率顯著高于其他單用組，且趨勢隨著用藥時間的延長而逐漸明顯，見表3。

表3　聯合用藥不同時間對A549的增殖影響 ±s)

3討論

我國每年肺癌新發(fā)病例約有21萬例，且每年死于肺癌的國人約為60萬[4，5]。晚期非小細胞肺癌在臨床上占80%～85%[6，7]，其中肺腺癌是最常見的病理類型，占晚期非小細胞肺癌的將近70%。奧沙利鉑(Oxaliplatin)為鉑類抗腫瘤藥物，通過與DNA的烷基化作用從而促進腫瘤細胞的凋亡，因其安全性優(yōu)于順鉑、腫瘤親和性優(yōu)于卡鉑，奧沙利鉑現已替代順鉑及卡鉑成為第三代鉑類抗腫瘤藥物，為治療多種實體瘤的一線用藥。大量臨床研究證明，以鉑類為基礎的聯合化療可顯著延長晚期非小細胞肺癌的生存期，改善其生活質量[8]，但由于其對人體的毒性，不良反應也較多，且劑量需要合理把握。地塞米松因具有明顯抗炎抗過敏效果而被廣泛認識，隨著現代醫(yī)學研究的不斷深入，地塞米松促進腫瘤細胞凋亡的效能被逐漸挖掘，其通過阻滯腫瘤細胞周期、誘導腫瘤細胞膜變性壞死、抗血管新生等途徑發(fā)揮抗腫瘤作用，同時地塞米松可增強機體對抗腫瘤藥物的敏感性，但是不同學者對于聯合用藥的劑量尚存在爭議，基于此，本試驗采用體外研究方法，探討二者聯合用藥協同抗人肺腺癌的部分機制及用量。

本實驗中，地塞米松、奧沙利鉑分別以不同濃度及不同時間點作用與A549細胞后我們發(fā)現：單用地塞米松時當濃度低于500ng/mL時反而會促進肺腺癌A549細胞增殖，當濃度達到500ng/m后地塞米松對腫瘤細胞的抑制率呈濃度及時間依賴性。奧沙利鉑對肺腺癌A549細胞的抑制效應具有明顯的時間及濃度依賴性，當藥物濃度處于5μg/mL及10μg/mL時對腫瘤細胞的抑制作用相當，因此我們認為地塞米松以劑量為1000ng/m，奧沙利鉑5μg/mL抑制作用最佳，因此可推測地塞米松、奧沙利鉑在體外均能明顯抑制A549細胞的增殖；當二藥聯合給藥以后發(fā)現聯合用藥組的抑瘤率顯著高于二藥單用，同時抑制率隨著用藥時間的延長而逐漸增大，因此我們認為地塞米松及奧沙利鉑聯合使用可以達到協同作用，同時這一結果又提示我們選擇地塞米松促進機體對抗腫瘤藥物敏感時需要注意其使用劑量。

聯合治療本著增效減毒的目的，通過藥物與藥物、藥物與基因、藥物與蛋白等方式，以不同或相似的作用機制，在治療肺癌方面發(fā)揮著極大的作用。隨著深入研究，找出對肺癌具有治療或輔助治療作用的藥物聯用組合，對降低肺癌的致死率及轉移率，提高其治愈率、改善患者的生活質量具有非常重要的意義。地塞米松能協同奧沙利鉑抑制人肺腺癌A549細胞的生長，達到一定劑量閾值時能顯著增強對腫瘤的抑制作用，為臨床治療肺癌的提供了科學依據和參考。

參考文獻:

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