高效液相色譜法測定三七血傷寧分散片中重樓皂苷Ⅰ的含量

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高效液相色譜法測定三七血傷寧分散片中重樓皂苷Ⅰ的含量

吳莉1江偉1劉永忠2

（1江西省上高縣人民醫院上高336400；2江西中醫藥大學南昌330006）

摘要：目的：建立高效液相色譜法測定三七血傷寧分散片中主要成分重樓皂苷Ⅰ的含量。方法：Waters Symmetry ShieldTMRP18柱（150×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-水（40∶60）為流動相；檢測波長203nm；流速：l ml/min；柱溫：40℃。結果：重樓皂苷Ⅰ在具有良好的線性關系（r=0.9986，n=6）；平均加樣回收率為99.68%（n=6），說明回收率良好。結論：用高效液相色譜法測定三七血傷寧分散片中重樓皂苷Ⅰ，方法簡便，重現性好。

關鍵詞：三七血傷寧分散片；重樓皂苷Ⅰ；HPLC法；含量測定

三七血傷寧分散片由三七血傷寧膠囊經改變劑型加工制成。分散片具有多種優良性能，在水中可迅速崩解，均勻分散，相對于普通固體制劑，具有服用方便、溶解吸收快速、生物利用度高、能降低藥物的不良反應等特點[1]。而且，它制備簡單，工藝和普通片劑相同，對生產設備無特殊要求。三七血傷寧膠囊臨床上主要用于止血鎮痛、祛瘀生新，對瘀血阻滯、血不歸經之各種血證及瘀血腫痛有良好療效，具有涼血、收澀止血之功效[2]。

1　儀器與試劑

Waters高效液相色譜儀（515型雙元泵，996光電二極管矩陣檢測器，7725進樣閥，Waters色譜工作站）；Waters Symmetry ShieldTMRP18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；EJ-2000電子分析天平（日本AND）。乙腈（色譜純），甲醇（色譜純），水（重蒸餾水）。三七血傷寧分散片（自制，批號：20140801、20140802、20140803、20140804）；重樓皂苷Ⅰ（上海一基生物試劑有限公司，批號：200802）。

2　實驗方法

用高效液相色譜法測定自制三七血傷寧分散片中重樓皂苷Ⅰ的含量[3~5]。

2.1色譜條件Waters Symmetry ShieldTMRP18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈－水（40∶60）；檢測波長203 nm；流速：l ml/min；柱溫：40℃。

2.2對照品溶液的制備精密稱取對照品重樓皂苷Ⅰ適量，加甲醇適量使之完全溶解，制成每1 ml 含0.5 mg重樓皂苷Ⅰ的溶液，備用。

2.3供試品液的制備隨機取三七血傷寧分散片10片，稱重，研細，精密稱取適量（約相當于重樓皂苷Ⅰ125 mg），置50 ml具塞燒瓶中，加40 ml甲醇，超聲處理40 min（功率250 W，頻率25 kHz）。取出后放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻后過濾，甲醇洗滌3次，合并濾液，以0.45 μm微孔濾膜濾過，25 ml甲醇定容，即得。

2.4回收率實驗取一定量供試品，采用加樣回收法，加入一定量對照品溶液，按供試品溶液的制備進行實驗，n=6，本品所擬的含量測定方法測定均有良好的回收率。見表1。

表1　三七血傷寧分散片中重樓皂苷Ⅰ回收率試驗結果

2.5標準曲線的測定精密稱取對照品5.08 mg 置5 ml定量瓶中，加甲醇使之完全溶解，并稀釋至刻度，搖勻。準確吸取2 μl、5 μl、10 μl、15 μl、20 μl注入高效液相色譜儀中，測定，以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，將進樣量與峰面積進行回歸處理，回歸方程為：Y=2 130 407.3X+2 658.65，r=0.998 6，重樓皂苷Ⅰ在2.032~20.320 μg范圍內進樣量與峰面積有較好的線性關系。

2.6樣品含量測定精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10 μl，按2.1項下條件，分別注入高效液相色譜儀進行含量測定，測定4批三七血傷寧分散片中重樓皂苷Ⅰ含量。見表2。

表2　三七血傷寧分散片中重樓皂苷Ⅰ含量測定結果

3　討論

三七血傷寧中的重樓為百合科重樓屬植物華重樓ParispolyphyllaSmithvar.chinenisi（Franch）Hara、云南重樓ParispolyphyllaSmithvar.yunnanensis （Franch.）Hand.-Mazz.或七葉一枝花ParispolyphyllaSmithvar,chinensis（Franch.）Hara的干燥根莖。具有消腫止血、清熱解毒、涼肝定驚的功效。是國家重點保護的野生植物藥材品種，是著名的中成藥云南白藥、季德勝蛇藥的主要成

分。現代藥理研究表明重樓皂苷Ⅰ具有抗炎、抗腫瘤、抗病毒、鎮靜、鎮痛、降低膽固醇、降低血壓、止血等作用[6]，黃河以南大部分省區有產，但各地的藥材中重樓皂苷Ⅰ含量不同[7]。

三七血傷寧為常用中成藥，我們對其進行劑型改革，研制成分散片，分散片與原膠囊、散劑等劑型相比有許多優點，可以補充原產品的形式，滿足患者的需要，本實驗是為該品的質量控制建立方法。

由于重樓中的甾體皂苷易溶于水，易產生大量泡沫，給提取操作帶來一定困難，而重樓皂苷Ⅰ（分子式：C44H70O16，分子量855.02）不溶于水、石油醚，可溶于甲醇，所以用甲醇提取簡單易行。本實驗建立了重樓皂苷Ⅰ的HPLC含量測定方法，回收率好，結果準確，證明該方法可控制本產品的質量。

參考文獻

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[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[S].北京:化學工業出版社,2005.401

[3]龍國友,楊云,魯靜.HPLC測定熱毒清片中重樓皂苷I的含量[J].中成藥,2005,27(10):1155-1157

[4]丘明明.高效液相色譜法測定三七血傷寧散中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和Rb1的含量[J].中南藥學,2010,8(1):85-86

[5]黃蕓,崔力劍,劉偉娜,等.HPLC-ELSD法分析重樓商品藥材中甾體皂苷的含量[J].中國中藥雜志,2006,31(15):1230-1233

[6]李晞,王繼紅,亞雄.重樓提取液對結腸癌SW480細胞增殖的影響及其作用機制[J].中國生物制品學雜志,2010,23(6):619-622

[7]李峰,蔣桂華.中藥商品學[M].北京:中國醫藥科技出版社,2014.173-174

●綜述與進展●

收稿日期：（2015-06-03）

doi:10.13638/j.issn.1671-4040.2015.09.055

文獻標識碼：B

中圖分類號：R284.1