多耐藥基因在乳腺癌組織中的表達及價值

多耐藥基因在乳腺癌組織中的表達及價值*

林慧梅1，安玉芳2，張凡3

(1.河北省崇禮縣婦幼保健院，河北崇禮076350

2.河北省萬全縣醫院，河北萬全076250

3.河北北方學院附屬第一醫院病理科，河北張家口075000)

摘要：目的：觀察多藥耐藥基因(MDR1)及其編碼的糖蛋白(P-gp)在乳腺癌組織中的表達及臨床價值。方法：選取病歷資料完整的乳腺癌根治術乳腺組織標本84份，使用S-P法免疫組化法染色檢測P-gp、谷光甘肽S轉移酶(GST-π)及熱休克蛋白(HSP70)、p53的表達情況，采用Kendall's taub相關性分析P-gp、p53、GST-π、及HSP70、p53之間協同表達關系。結果：P-gp表達陽性率為50%(42/84)，HSP70表達陽性率為61.9%(52/84)，p53表達陽性率為52.4%(44/84)，GST-π表達陽性率為40.5%(34/84)；相關性分析顯示，GST-π與P-gp無協同表達(r=0.146，P>0.05)，HSP70與p53有協同表達(r=0.626，P<0.05)，p53與P-gp有協同表達(r=0.763，P<0.05)；P-gp表達對對乳腺癌10年生存率有明顯影響。COX模型乳腺癌預后多因素分析表明，年齡因素、GST-π表達均不具有獨立的預后意義；臨床分期、組織學分級、P-gp表達、p53表達、HSP70表達均具有獨立的預后意義。結論：同時檢測MDR1、HSP7、p53和GST-π的表達，可為乳腺癌臨床耐藥性的判斷提供更為全面的信息。

關鍵詞：乳腺癌；耐藥；MDR1；HSP70；GST-π；p53

文章編號：1006-6233(2015)10-1588-03

基金項目：*國家十一五科技支撐項目，(編號：2008BA157B00)

文獻標識碼：B

The Expression and Clinical Significance of Multidrug

Resistance Gene in Breast Cancer Tissues

LINHuimei,etal

(The Maternal and Child Health Hospital of Chongli County, Hebei Chongli 076350, China)

Abstract:Objective: To observe the expression of multidrug resistance gene (MDR1) and its encoding glycoprotein (P-gp) and clinical value in breast cancer. Methods:Selected the complete medical records of breast cancer radical mastectomy of breast tissue specimens of 84 copies, using S-P method of immunohistochemical staining to detect P-gp, GST-π and heat shock protein(HSP70), the expression of p53, using the Kendall's Taub correlation analysis between P-gp, p53,GST-π, and HSP70, a PI the relationship between the expression of p53. Result: The positive rate of P-gp expression was 50%(42/84), the positive rate of HSP70 expression was 61.9%(52/84), the positive rate of p53 expression was 52.4% (44/84), GST-class expression positive rate was 40.5%(34/84); correlation analysis showed that GST-π and P-gp, PI no synergistic expression (r=0.146, P>0.05), HSP70 and p53 have synergistic expression (r=0.626, P<0.05), p53 and P-gp have synergistic expression(r=0.763, P<0.05); the expression of P-gp of breast cancer 10 years survival rate has obvious effect. Multivariate prognostic models of human breast cancer COX analysis showed that the factors of age, GST-π, PI expression do not have independent prognostic significance; clinical staging, tissue have independent prognostic significance grading, P-gp expression, p53 expression, HSP70 expression. Conclusion: At the same time, the expression of MDR1, HSP7, p53 and GST-π, for clinical drug resistance of breast cancer judgment to provide more comprehensive information.

Key words:Breast cancer;Drug resistance;MDR1；HSP70；GST-π；p53

乳腺癌為臨床常見惡性腫瘤，早期發病即可出現全身轉移，嚴重威脅女性生命健康[1]。目前，臨床的治療方案大多是圍繞手術而進行放、化療治療[2]。化療在乳腺癌治療中占重要地位，而腫瘤細胞對治療藥物產生耐藥性，是影響治療效果及患者生存率的重要原因[3]。有研究發現，MDR1及P-gp與乳腺癌耐藥產生關系密切[4]。本研究為探討MDR1及P-gp在乳腺癌組織中的表達及耐藥機制，現將結果報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料:選取北方學院附屬第一醫院收治病歷資料完整的乳腺癌根治術后乳腺組織標本84份，入選標本均來源自女性患者，并完成6個周期CAF方案化療，年齡28～75歲，平均年齡47.8±2.3歲。所選標本均經病理學檢查明確診斷，其中浸潤性小葉癌6例，浸潤性導管癌66例，粘液癌8例，腺癌4例；臨床分期Ⅰ期10例，Ⅱ期56例，Ⅲ期14例，Ⅳ期4例；組織學分級Ⅰ級10例，Ⅱ級48例，Ⅲ級26例。

1.2檢測方法:采用免疫組化S-P法進行P-gp、GST-π、HSP70、p53檢測，采用Kendall's taub相關性分析P-gp、p53、GST-π、HSP70、p53之間協同表達關系，抗GST-π單克隆抗體、抗HSP70多克隆抗體、抗P-gp單克隆抗體、抗p53單克隆抗體均購自美國ZYMED公司。入選標本常規固定、包埋、切片，分別行HE及S-P免疫組織化學染色，并選取已知陽性切片標本作為陽性參照。

1.3結果判定:P-gp陽性表達主要分布于胞漿與胞膜，呈棕黃色顆粒；GST-π陽性表達分布于胞漿，呈棕黃色顆粒，可伴見少數細胞核染色；p53陽性呈棕黃色顆粒，主要分布于細胞核；HSP70陽性細胞呈棕黃色顆粒，主要分布于細胞核或細胞漿。判斷標準：陰性：未檢出陽性細胞；陽性：陽性細胞計數>10%；+：陽性細胞計數>25%；++：陽性細胞計數為25～50%；+++：陽性細胞計數>50%。

1.4統計學方法:所得數據錄入統計學軟件SPSS10.0處理，GST-π、P-gp、HSP70、p53之間協同表達關系采用Kendall's taub進行相關性分析，耐藥相關標志表達對總生存期影響采用多變量COX回歸分析，P<0.05為有統計學意義。

2結果

2.1基因表達情況及P-gp不同表達患者10年生存率比較:本組標本中P-gp表達陽性率為50.0%(21/42)；HSP70表達陽性率為61.9%(26/42)；p53表達陽性率為52.4%(22/42)，GST-π表達陽性率為40.5%(17/42)。COX模型生存分析顯示P-gp具有預后意義，P-gp表達陽性患者生存期低于P-gp表達陰性患者(P<0.01)；相關性分析發現P-gp表達與年齡無關(r=0.061，P>0.05)，與組織分級無關(r=0.184，P>0.05)，與臨床分期無關(r=0.258，P>0.05)，與ER有關(r=0.447，P<0.05)，與PR無關(r=0.061，P>0.05)；HSP70表達與年齡無關(r=0.122，P>0.05)，與組織分級無關(r=0.221，P>0.05)，與臨床分期有關(r=0.3，P<0.05)；p53表達與年齡無關(r=0.087，P>0.05)，組織分級無關(r=0.229，P>0.05)，與臨床分期無關(r=0.171，P>0.05)；GST-π表達與年齡無關(r=0.122，P>0.05)，與組織分級無關(r=0.020，P>0.05)，表達與臨床分期無關(r=0.169，P>0.05)。P-gp陽性患者10年生存率為38.1%，P-gp陰性患者為85.7%，P-gp陽性患者10年生存率顯著高于P-gp陰性患者(P<0.01)，結果見表1。

表1　P-gp不同表達患者10年生存率比較(n)

注：*P<0.01

2.2相關性分析:本組標本P-gp、p53、GST-π、HSP70免疫組織化學表達結果用Kendall's taub法相關性分析顯示，GST-π與P-gp無協同表達(r=0.146，P>0.05)；HSP70與p53有協同表達(r=0.626，P<0.05)，p53與P-gp有協同表達(r=0.763， P<0.05)。

2.3多變量COX回歸分析:年齡、GST-π、PR均不具有獨立的預后意義(P>0.05)。臨床分期、組織分級、P-gp(P<0.01)、p53陽性表達、HSP70陽性表達均具有獨立的預后意義(P<0.05)。

3討論

有研究表明[5]，細胞的耐受程度與藥物在細胞內蓄積水平呈負相關。細胞在獲得MDR后短時間即可將治療藥物泵出胞外；而藥敏細胞外輸藥物的能力相對較弱，故能提高藥物在胞內停留時間[6]。MDR表型涉及的親脂類的化療藥物，主要來自抗腫瘤抗生素及天然的植物堿類抗腫瘤藥物，如5-氟脲嘧啶(5-Fu)、柔紅霉素、絲裂霉素、長春新堿、阿霉素等[7]。然而，以往研究結果多來源自惡性細胞系，而非腫瘤標本，與臨床實際情況有一定差距，難以為臨床提供指導性作用。

本研究中患者選用CAF為化療方案，該方案所使用的藥物為阿霉素即為P-gp耐藥藥物。研究結果顯示，P-gp陽性患者10年生存率顯著低于P-gp陰性患者(P<0.05)，提示P-gp耐藥是影響化療效果及患者生存率的主要原因，因此，P-gp表達又可作為乳腺癌的預后指標。另有研究認為[8]，乳腺癌耐藥為多基因、多步驟耐藥，原發耐藥的機理是異常復雜，單機制和多機制可以同時存在，涉及p53、HSP70及GST-π等。有學者認為，在乳腺癌耐藥產生的早期階段GST-π所起作用更為重要，GST-π非特異性的結合作用可協助藥物通過P-gp形成的藥物排流泵。本研究結果顯示，GST-π與P-gp無協同表達，提示GST-π和P-gp是否參與了腫瘤的形成還值得進一步研究。HSP70在腫瘤發生發展中充當分子伴侶，可防止異常蛋白積聚，維持細胞的自穩態，使細胞維持增生狀態免于凋亡，參與了腫瘤細胞的增殖、分化及轉移，在腫瘤的發生發展過程中起著重要的作用。本組實驗結果顯示，HSP70與p53有協同表達，與文獻報道相符。本研究結果顯示，p53與P-gp有協同表達。其原因與p53基因可明顯激活MDR1基因的促進因子有關。預后因素分析中發現，臨床分期、組織分級，P-gp、p53、HSP70陽性表達均具有獨立的預后意義，提示腫瘤大小、病理分級、臨床分期、淋巴結轉移等傳統預后指標應與分子指標相結合，可提供更多的預后信息。

參考文獻:

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