黑逍遙散聯(lián)合腎四味對(duì)乳腺癌大鼠類更年期癥狀的影響

黑逍遙散聯(lián)合腎四味對(duì)乳腺癌大鼠類更年期癥狀的影響

付烊1,運(yùn)強(qiáng)2,朱學(xué)明1*

(1.襄陽(yáng)市中醫(yī)院腫瘤科，湖北 襄陽(yáng) 441000;2.湖北中醫(yī)藥大學(xué)附屬襄陽(yáng)醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 襄陽(yáng) 441000)

摘要：目的觀察黑逍遙散聯(lián)合腎四味預(yù)防他莫昔芬引起的乳腺癌大鼠的類更年期癥狀的影響。方法60只大鼠腹腔注射MNU溶液,構(gòu)建大鼠的乳腺癌模型。大鼠隨機(jī)分為3組：A組(空白對(duì)照組)20只，B組(他莫西芬對(duì)照組)20只，C組(黑逍遙散聯(lián)合腎四味組)20只。比較3組大鼠的生存率、行為學(xué)評(píng)分、體質(zhì)量、血脂和激素水平的變化。結(jié)果經(jīng)過(guò)24周,A組大鼠生存率35.00%(7/20),B組和C組大鼠生存率均為75.00%(15/20)。3組大鼠的生存率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。A組和C組大鼠的行為學(xué)評(píng)分和雌激素、孕激素水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與A、C組大鼠相比，B組大鼠的行為學(xué)評(píng)分和雌激素、孕激素明顯下降(P<0.05)。A組和B組大鼠的體質(zhì)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),C組大鼠的體質(zhì)量明顯高于A、B組大鼠(P<0.05)。各組大鼠的CHO、TG、HDL-C和LDL-C水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論黑逍遙散聯(lián)合腎四味能有效預(yù)防乳腺癌大鼠因應(yīng)用他莫昔芬導(dǎo)致的類更年期癥狀，且安全性較高。

關(guān)鍵詞：乳腺癌;黑逍遙散;腎四味;他莫昔芬;類更年期癥狀

DOI::10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.07.021

中圖分類號(hào)：R737.9文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1003-5699(2015)07-0716-03

基金項(xiàng)目:襄陽(yáng)市科技局指導(dǎo)性項(xiàng)目(2014襄科業(yè))。

作者簡(jiǎn)介:付烊(1979-)，女，主治醫(yī)師，主要從事中醫(yī)藥防治腫瘤研究。

收稿日期:(責(zé)任編輯：張瑞彬2014-11-13)

*通信作者:朱學(xué)明，電子信箱-fuyang197901@163.com

<1)，且各件產(chǎn)品是否為不合格品相互獨(dú)立．

Effect of Heixiaoyaosan combined with Shensiwei on climacteric syndrome of rats with breast cancer

FU Yang1,YUN Qiang2,ZHU Xueming1*

(1.Oncology Department,Xiangyang Hospital of TCM,Xiangyang 441000,Hubei Province,China;

2.Clinical Laboratory,Xiangyang Hospital Affiliated to Hubei University of Chinese Medicine,

Xiangyang 441000,Hubei Province,China)

Abstract:ObjectiveTo study the preventive effect of heixiaoyaosan combined with shensiwei on the climacteric syndrome of rats induced by tamoxifen during the treatment of breast cancer.Methods60 S-D rats were given MNU through ntraperitoneal injection to build breast cancer models,all rats were dividened into 3 groups randomly,20 in group A (control group),20 in group B (Tamoxifen group) and 20 in group C (Heixiaoyaosan combined with Shensiwei group).Compare the survival rate,behavioral grade,body mass,blood fat and concentration of estrogen and progestin among 3 groups.ResultsAfter 24 w,the survial rate of group A is 35.00%(7/20),of group B and C are both 75.00%(15/20),the difference among 3 groups has statistical significance(P<0.05).Group A and group C have no statistical difference in behavioral grade as well as blood fat and concentration of estrogen and progestin(P>0.05),those in group B lower,the difference has statistical significance(P<0.05).Group A and group B have no statistical difference in body mass(P>0.05),it is higher in group B,the difference has statistical significance(P<0.05).The difference of CHO,TG,HDL-C and LDL-C among three groups has no statistical significance(P>0.05).ConclusionHeixiaoyaosan combined with Shensiwei can prevent the climacteric syndrome of rats induced by tamoxifen,and security is reliable.

Keywords:breast cancer;Heixiaoyaosan;Shensiwei;Tamoxifen(TMX);climacteric syndrome

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明乳腺癌的發(fā)生發(fā)展與內(nèi)分泌有關(guān)，采用雌激素受體拮抗劑或芳香化酶抑制劑成為治療乳腺癌的重要手段[1-2]。目前常用雌激素拮抗劑來(lái)阻斷與其受體的結(jié)合，代表藥是他莫昔芬(TMX)[3]，他莫昔芬抗雌激素和弱雌激素作用會(huì)導(dǎo)致患者體內(nèi)激素水平紊亂，患者體內(nèi)雌激素水平降低，出現(xiàn)一系列類更年期癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，不利于治療的順利進(jìn)行[4-5]。本研究中，觀察黑逍遙散聯(lián)合腎四味聯(lián)合應(yīng)用對(duì)他莫昔芬引起的類更年期癥狀的預(yù)防作用，探討中醫(yī)治療的可行性。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用60只未育的健康的雌性SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)材料，由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)14-0702。將60只大鼠分為3組：A組(空白對(duì)照組)20只，B組(他莫西芬對(duì)照組)20只，C組(黑逍遙散聯(lián)合腎四味組)20只。

1.2藥物及試劑藥品：枸櫞酸他莫西芬片(江蘇揚(yáng)子江藥業(yè)公司生產(chǎn)，批號(hào)：20140511)，甲基亞硝脲(MNU，美國(guó)Sigmal公司，純度>99%)，黑逍遙散(方劑組成:柴胡、白芍、歸身、白術(shù)、茯苓、甘草、熟地黃)和腎四味(方劑組成:枸杞子、菟絲子、淫羊藿、補(bǔ)骨脂)由本院腫瘤科準(zhǔn)備。試劑：大鼠雌激素試劑盒(上海撫生實(shí)業(yè)有限公司)。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1模型構(gòu)建及藥物處理所有大鼠均進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，60只大鼠從6周齡開(kāi)始按照50 mg/kg的劑量腹腔注射MNU(溶于pH=6.0的乙酸溶液)，每周注射1次，持續(xù)4次，構(gòu)建大鼠的乳腺癌模型[6]。造模完成后，B組大鼠按照10 mg/kg的劑量用TMX進(jìn)行灌胃，隔日1次，治療持續(xù)24周；C組大鼠在TMX灌胃的基礎(chǔ)上使用黑逍遙散(10 mg/kg)和腎四味(10 mg/kg)溶液灌胃，隔日1次，持續(xù)24周。

2.2各組大鼠的生存率變化統(tǒng)計(jì)治療期間和治療后總24周內(nèi)3組大鼠死亡例數(shù),并繪制生存曲線。

2.3各組大鼠治療期間的行為觀察所有大鼠均在模型構(gòu)治療6周后進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分,比較各組大鼠的抑郁情況。1)Open-field行為學(xué)評(píng)分:采用立柱體敞箱,高為40 cm，長(zhǎng)、寬各為80 cm,周壁、底面為黑色，底面用白線劃分為面積相等的25塊。將大鼠置于敞箱底面的中心方格內(nèi)，以大鼠穿越底面塊數(shù)為水平活動(dòng)積分，動(dòng)物穿越1格為1次，如動(dòng)物沿線行走，以每10 cm為1次。以直立次數(shù)為垂直活動(dòng)積分，動(dòng)物雙足離開(kāi)底面為標(biāo)志直至放下雙足為1次活動(dòng)。每只動(dòng)物進(jìn)行1次，每次時(shí)間為3 min[7]。2)糖水消耗實(shí)驗(yàn):所有動(dòng)物均單籠飼養(yǎng)，每只動(dòng)物給予1%蔗糖溶液150 mL，同時(shí)禁食24 h，計(jì)算動(dòng)物飲用1%蔗糖溶液的量[8]。

2.4各組大鼠的體質(zhì)量、血脂和激素水平變化藥物治療6周后進(jìn)行1次體質(zhì)量的測(cè)量，記錄大鼠的體質(zhì)量變化。藥物治療第6周空腹采大鼠尾靜脈血，離心并分離大鼠血漿,樣本分裝于1.5 mL的EP管中，置于-80 ℃保存。解凍樣品后由本院檢驗(yàn)科測(cè)空腹血脂，包括總膽固醇(CHO)、三酰甘油(TG),高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平;同時(shí)，免疫放射法測(cè)量大鼠的血液雌二醇(E)和孕酮，操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。記錄各組大鼠的血脂和激素水平。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1各組大鼠生存率的變化經(jīng)過(guò)24周，A組共13只大鼠死亡，大鼠生存率35.00%;B組和C組各5只大鼠死亡，大鼠生存率均為75.00%。與A組比較，大鼠的生存率差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3.2各組大鼠治療期間的行為變化A組和C組大鼠的水平、垂直活動(dòng)積分和糖水消耗量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與A、C組大鼠相比，B組大鼠的水平活動(dòng)水平、垂直活動(dòng)積分和糖水消耗量明顯下降(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　3組大鼠的水平、垂直活動(dòng)積分和糖水消耗量 ± s)分

注：與A組相比，△P<0.05；與C組相比，#P<0.05

3.3各組大鼠治療期間的體質(zhì)量和激素水平A組和B組大鼠的體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),C組大鼠的體質(zhì)量明顯高于A、B組大鼠(P<0.05)。A組和C組大鼠的激素水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),B組大鼠的激素水平明顯低于A、C組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2　3組大鼠的體質(zhì)量和激素水平變化 ± s)

注:與A組相比，△P<0.05；與B組相比，▲P<0.05；與C組相比，#P<0.05

3.4各組大鼠的血脂水平變化各組大鼠的CHO、TG、HDL-C和LDL-C水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3　3組大鼠的血脂水平 　mmol/L

4結(jié)語(yǔ)

乳腺癌的發(fā)生發(fā)展與內(nèi)分泌有關(guān)，對(duì)于雌激素受體陽(yáng)性的患者常需要進(jìn)行進(jìn)一步的內(nèi)分泌治療，雌激素拮抗劑是常用的治療手段，代表藥是他莫昔芬。但他莫昔芬用于乳腺癌患者的內(nèi)分泌治療的毒副作用較為明顯，患者常出現(xiàn)雌激素水平降低和類更年期癥等不良反應(yīng)。本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，對(duì)黑逍遙散聯(lián)合腎四味聯(lián)合應(yīng)用對(duì)他莫昔芬引起的類更年期癥狀的預(yù)防作用進(jìn)行觀察。所有大鼠均進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，60只大鼠從6周齡開(kāi)始按照50 mg/kg的劑量腹腔注射MNU,構(gòu)建乳腺癌大鼠模型。模型構(gòu)建6周后進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，B組大鼠的水平活動(dòng)水平、垂直活動(dòng)積分和糖水消耗量明顯下降，大鼠的表現(xiàn)較為明顯。C組大鼠在應(yīng)用TMX治療的同時(shí)再用黑逍遙散和腎四味,C組大鼠的水平活動(dòng)水平、垂直活動(dòng)積分和糖水消耗量與A組相近，明顯高于B組,說(shuō)明黑逍遙散聯(lián)合腎四味可以有效預(yù)防TMX引起的類更年期癥狀。根據(jù)中醫(yī)理論,他莫昔芬抗雌激素治療可導(dǎo)致患者出現(xiàn)腎精虧虛,腎水不足而不能上濟(jì)心火，從而表現(xiàn)出心火亢盛的證候；心為臟器之主，主藏神，主神明，故乳腺癌服用他莫昔芬后出現(xiàn)的一系列癥狀主要與心腎失調(diào)相關(guān)[9-11]。因此,中醫(yī)藥治療本病有較大優(yōu)勢(shì)。本研究以疏肝益腎，寧心安神為法，以黑逍遙散及腎四味化裁長(zhǎng)期臨床使用，干預(yù)乳腺癌他莫昔芬治療引起類更年期癥狀，可以很好改善心煩易怒、潮熱盜汗、神疲乏力、心情抑郁、失眠、記憶力下降、肌肉關(guān)節(jié)酸痛、月經(jīng)失調(diào)等。

綜上所述，黑逍遙散聯(lián)合腎四味能有效預(yù)防乳腺癌大鼠因應(yīng)用他莫昔芬導(dǎo)致的類更年期癥狀，且無(wú)明顯的不良反應(yīng)。

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