XAF1在胰腺癌中表達的臨床意義及其與患者預后的關系

·論著·

XAF1在胰腺癌中表達的臨床意義及其與患者預后的關系

黃佳姚瑋艷

【摘要】目的探討胰腺癌組織中X染色體連鎖的凋亡抑制蛋白的相關因子1(XAF1)蛋白的表達及其與腫瘤臨床病理參數、患者預后的關系。方法將89例胰腺癌組織和21例正常胰腺組織制成組織芯片，采用免疫組化方法檢測XAF1蛋白的表達。分析XAF1表達與胰腺癌臨床病理參數的相關性。89例胰腺癌患者均獲得隨訪，生存情況以Kaplan-Meier曲線表示。采用Cox比例風險模型分析影響胰腺癌患者預后的因素。結果胰腺癌組織XAF1的陰性表達率為44.9%(40/89)，正常胰腺組織為9.5%(2/21)，兩者差異有統計學意義(P<0.05)。XAF1的表達與腫瘤的臨床分期呈負相關(P<0.05)，而與患者的年齡、性別及腫瘤淋巴結轉移、遠處轉移、病理分級、手術切緣、血管和神經侵犯均無相關性。XAF1陰性表達患者生存時間顯著短于陽性表達患者。單因素分析顯示XAF1陰性表達、病理分級、淋巴結轉移和遠處轉移均與患者預后相關(P值均<0.05)，多因素分析顯示XAF1陰性表達是影響胰腺癌患者生存的獨立危險因素。結論XAF1可能參與胰腺癌的發生和發展，并與胰腺癌患者的預后相關。

【關鍵詞】胰腺腫瘤；X染色體連鎖的凋亡抑制蛋白相關因子1；預后；免疫組織化學；組織芯片

DOI:10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2015.02.003

基金項目：國家自然科學基金(81302088)

收稿日期：(2014-08-11)

Clinical significance of XAF1 expression in pancreatic cancer and its relationship with prognosisHuangJia,YaoWeiyan.DepartmentofGastroenterology,RuijinHospital,ShanghaiJiaotongUniversityMedicineSchool,Shanghai200025,China

Correspondingauthor:YaoWeiyan,Email:yaowymail@yahoo.com.cn

Abstract【】ObjectiveTo investigate the expression of XAF1 protein in pancreatic cancer, and its relationship with clinicopathological parameters and prognosis. MethodsThe tissue microarray was composed of 89 pancreatic cancer and 21 normal pancreatic tissues, and immunohistochemistry was used to examine the expression of XAF1 protein. The correlation between XAF1 expression and clinicopathological parameters was analyzed. The 89 patients were followed, and the survival was shown in Kaplan Meier curve. Cox proportional hazards regression was used to identify risk factors for the survival of pancreatic cancer patients. ResultsThe negative expression rate of XAF1 was 44.9%(40/89), and it was 9.5%(2/21) in normal tissue, and the difference between the two groups was statistically significant (P<0.05). The expression of XAF1 was negatively associated with tumor staging (P<0.05), but it was not associated with age, gender, lymph node metastasis, distant metastasis, pathological grading, surgical margins, vascular and neural invasion. Patients with negative expression of XAF1 had much shorter survival than patients with positive expression. Univariate analysis showed that negative expression of XAF1, pathological grading, lymph node metastasis, distant metastasis was associated with the survival (P<0.05), and the multivariate analysis indicated that negative expression of XAF1 was an independent prognostic factor for survival of pancreatic cancer. ConclusionsXAF1 may be involved in the development and growth of pancreatic cancer, and it is related with patient′s prognosis.

作者單位：200025上海，上海交通大學附屬瑞金醫院消化內科

通信作者：姚瑋艷，Email：yaowymail@yahoo.com.cn

【Key words】Pancreatic neoplasms;XAF1;Prognosis;Immunohistochemistry;Tissue microarray;

胰腺癌是一種主要來源于胰腺導管上皮的消化系統惡性腫瘤，其發生、發展涉及多個基因突變與異常表達，其中細胞凋亡失衡在胰腺癌發病機制中發揮了重要作用。X染色體連鎖的凋亡抑制蛋白相關因子1(XIAP-associated factor 1,XAF1)是一個新發現的腫瘤抑制因子，它作為XIAP的負性調節因子，通過競爭性拮抗XIAP對caspase-3的抑制作用從而引起腫瘤細胞的凋亡[1]。本研究檢測胰腺癌組織中XAF1蛋白的表達，結合胰腺癌患者臨床資料及隨訪情況進行分析，研究XAF1蛋白表達與胰腺癌臨床病理特征及患者預后的相關性，探討其在胰腺癌發生和發展中的作用。

材料與方法

一、臨床資料

收集上海交通大學附屬瑞金醫院2002年至2005年間手術切除的89例胰腺癌患者的臨床資料和石蠟包埋的癌組織標本，另取21例石蠟包埋的正常胰腺組織作為對照，所有標本均經病理學證實。89例胰腺癌中男性52例，女性37例，年齡31～79歲。胰腺癌患者術后均進行隨訪，隨訪時間0.3～42個月，隨訪率達100%。

二、組織芯片的制作

取所有石蠟包埋的癌組織及正常胰腺組織標本，采用手工制作組織芯片。組織芯片制作儀為Instruments公司產品。取樣針直徑2 mm，組織芯間距1.5 mm。

三、XAF1蛋白表達檢測

采用免疫組化方法檢測XAF1蛋白的表達。羊抗人XAF1抗體購自Santa Cruz公司，工作濃度1∶500。生物素化標記的鼠抗羊二抗購自北京中杉金橋公司，工作濃度1∶200，最后加辣根過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素工作液，DAB反應染色。結果判定：以胞質或胞核中呈現黃色顆粒為陽性表達，結合染色強度及陽性細胞數進行評分。染色強度：不著色為0分，淡黃色1分，黃色2分，棕黃色3分；陽性細胞百分比：≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，﹥75%為4分。兩分值相乘計算免疫反應分數(immunoreactive score，IRS)，0分為陰性，1～4分為弱陽性(+)，5～8分為中等陽性(++)，9～12分為強陽性(+++)，陰性及弱陽性定義為陰性表達，中等陽性與強陽性定義為陽性表達。

四、統計學處理

用SPSS11.0軟件對數據進行分析。陽性率的比較采用χ2檢驗，生存情況以Kaplan-Meier曲線表示，組間生存率比較采用log-rank檢驗，預后危險因素采用Cox風險比例模型進行單因素和多因素分析。P<0.05為差異具有統計學意義。

結　　果

一、胰腺癌組織XAF1的表達

19例正常胰腺組織中XAF1主要表達于導管上皮細胞，腺泡細胞有散在的XAF1表達(圖1)，僅2例正常胰腺組織未見XAF1的表達，其陰性表達率為9.5%(2/21)，IRS為8.38±2.16。89例胰腺癌組織中40例未見XAF1表達，其陰性表達率為44.9%，IRS為3.93±0.98。胰腺癌與正常胰腺組織間的差異有統計學意義(t=5.41，P<0.05)。

圖1　正常組織(1A、1B)和胰腺癌組織(1C、1D)中XAF1蛋白的表達(1A、1C　×100;1B、1D　×400)

二、胰腺癌組織XAF1表達與腫瘤臨床病理學特征的關系

XAF1蛋白的表達與患者的年齡、性別及腫瘤淋巴結轉移、遠處轉移、病理分級、手術切緣、血管和神經侵犯均無相關性，而與腫瘤分期呈負相關(表1)。

表1　胰腺癌組織XAF1表達與腫瘤臨床病理參數間的關系

三、XAF1表達與患者生存期的關系

Kaplan-Meier生存曲線顯示，XAF1陰性表達組患者的生存率明顯低于陽性表達組患者，兩組間生存率的差異具有統計學意義(χ2=5.78，P<0.05，圖2)。

圖2　XAF1陽性表達及陰性表達患者的生存曲線

四、影響患者術后生存的因素分析

單因素分析顯示XAF1陰性表達、腫瘤分級、淋巴結轉移和遠處轉移均與患者預后相關(P值均<0.05)，多因素分析顯示XAF1陰性表達是影響胰腺癌患者生存的獨立危險因素(P<0.05，表2)。

表2　影響患者預后的Cox風險比例模型分析

討　　論

XAF1在所有胚胎組織及成人正常組織中廣泛表達，但在腫瘤組織中，如胃癌[2]、肝癌[3]、肺癌[4]、腎癌[5]等，則有不同程度的減弱、缺失。Wang等[6]研究結果發現，XAF1在卵巢癌組織中的表達明顯低于癌旁組織，并且XAF1表達與腫瘤組織分化程度之間呈負相關，XAF1的低表達可作為卵巢癌患者預后判斷的指標之一。XAF1作為重要的凋亡促進因子，不僅可以拮抗XIAP抑制caspase活性的作用，而且可以通過細胞外信號調節激酶途徑促進腫瘤細胞的凋亡[7]。Zou等[8]報道，在胃癌和結腸癌細胞中XAF1可通過翻譯后修飾的方式激活p53，從而引起p53核內聚集，增加其轉錄活性，并激活p53依賴的細胞凋亡。由此可見，XAF1通過多種途徑在細胞凋亡調控機制中發揮作用，而它的異常表達會引起腫瘤細胞的凋亡失控。

本課題組前期研究結果[9-10]也表明，胰腺癌細胞株SW1990和BxPC3的XAF1過度表達顯著增加細胞的凋亡。本研究結果進一步顯示，胰腺癌組織中XAF1蛋白表達較正常胰腺組織明顯降低，并且XAF1表達與腫瘤分期呈負相關。此外，XAF1低表達患者的生存期顯著短于高表達患者，是影響胰腺癌患者生存的獨立危險因素，故可作為患者預后判斷的指標之一。

參考文獻

[1]Liston P, Fong WG, Kelly NL, et al. Identification of XAF1 as an antagonist of XIAP anti-Caspase activity[J]. Nat Cell Biol,2001,3(2):128-133.

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[7]Yu LF, Wang J, Zou B, et al. XAF1 mediates apoptosis through an extracellular signal-regulated kinase pathway in colon cancer[J]. Cancer,2007,109(10):1996-2003.

[8]Zou B, Chim CS, Pang R, et al. XIAP-associated factor 1 (XAF1), a novel target of p53, enhances p53-mediated apoptosis via post-translational modification[J]. Mol Carcinog,2012,51(5):422-432.

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[10]黃佳, 諸琦, 曹海霞, 等. XAF1基因誘導胰腺癌細胞株BxPC3凋亡的實驗研究. 中華胰腺病雜志,2009,9(5):337-339.

(本文編輯：屠振興)

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ADP腺苷二磷酸

AEP急性水腫性胰腺炎

AFP甲胎蛋白

Alb白蛋白

ALP堿性磷酸酶

ALT丙氨酸氨基轉移酶

AMP腺苷一磷酸

ANP急性壞死性胰腺炎

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AST天冬氨酸氨基轉移酶

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CCK-8細胞增殖-毒性檢驗

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CP慢性胰腺炎

CTX線計算機斷層攝影術

CRPC-反應蛋白

DAB二氨基聯苯胺

DAPI4，6-二脒基-2-苯基吲哚二鹽酸

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DC樹突狀細胞

DMSO二甲基亞砜

EGF表皮生長因子

ELISA酶聯免疫吸附測定

ENBD內鏡鼻膽管引流

ERCP內鏡下逆行胰膽管造影

EST內鏡下乳頭括約肌切開術

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EUS-FNIEUS引導下細針注射

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IBil間接膽紅素

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LDH乳酸脫氫酶

MAP輕癥急性胰腺炎

MRCP磁共振膽胰管造影

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MODS多器官功能不全綜合征

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MPO髓過氧化物酶

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NF-κB核因子-κB

NK自然殺傷細胞

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PDAC胰腺導管腺癌

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PLT血小板

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TBil總膽紅素

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TG三酰甘油

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TP總蛋白

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