MatrixTM生物膜專用清洗劑用于內鏡清洗的效果觀察

李良芳，劉婉薇，鄭　躍，陳　浩

Effect observation on application of special cleaning agent

of MatrixTM biological membrane in endoscopic cleaning

Li Liangfang,Liu Wanwei,Zheng Yue,et al

(People’s Hospital of Guangdong Province,Guangdong 510120 China)

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MatrixTM生物膜專用清洗劑用于內鏡清洗的效果觀察

李良芳，劉婉薇，鄭躍，陳浩

Effect observation on application of special cleaning agent

of MatrixTM biological membrane in endoscopic cleaning

Li Liangfang,Liu Wanwei,Zheng Yue,et al

(People’s Hospital of Guangdong Province,Guangdong 510120 China)

摘要：[目的]評價MatrixTM生物膜專用清洗劑在內鏡消毒中的應用效果。[方法]選取使用后的內鏡60條次，采用ATP生物熒光技術檢測MatrixTM生物膜專用清洗劑和ENZYCARE2多酶清洗劑清洗后內鏡活檢孔ATP含量；并建立人工模擬內鏡管腔生物膜模型，采用細菌培養法和蛋白定量法評價兩種內鏡清洗劑去生物膜清除率。[結果]兩種內鏡清洗劑清洗后，內鏡相對光單位(RLU值)均顯著減少，其中應用MatrixTM生物膜專用清洗劑清洗效果更佳，差異具有統計學意義(P<0.05)；生物膜清除實驗經細菌培養法和蛋白定量法檢測結果顯示，MatrixTM組對生物膜清除率分別為99.9%和94.8%，而ENZYCARE2組分別為52.4%和42.6%，兩組差異均有統計學意義(P<0.05)。[結論]與常規的多酶清洗劑相比，MatrixTM生物膜特效清洗劑能有效祛除內鏡腔內生物膜，明顯提高內鏡清洗、消毒質量。

關鍵詞：MatrixTM生物膜專用清洗劑；多酶清洗劑；生物膜；清洗效果

醫療器械清洗和消毒不徹底造成的院內感染已成為當前一個重要的臨床問題。消化道內鏡作為一種侵入性診療設備，易沾染血液等污染物，同時由于其結構復雜、材質特殊，清洗消毒尤為困難[1]。內鏡相關感染已有較多報道[2-3]，其中存在于內鏡管腔的生物膜是造成這一現象的重要原因[4-5]。國際上近年來已出現非含酶的生物膜專用清洗劑對內鏡生物膜清除效果較好的相關報道[6-8]。本研究通過臨床內鏡標本和人工模擬內鏡管腔生物膜模型相結合的方式，通過多種方法對MatrixTM生物膜專用清洗劑和常規多酶清洗劑對內鏡生物膜清除效果進行對比研究。現將結果報告如下。

1材料和方法

1.1材料ATP熒光檢測儀BT-112D(北京創新世紀生化科技發展公司)，清潔劑(明泰科MatrixTM生物膜專用清洗劑和STERIS公司生產的ENZYCARE2全效多酶清洗劑)，LB肉湯培養基及瓊脂，BCA蛋白試劑盒(Promega公司)，0.3%結晶紫，酶標儀(Bio-Red公司)，循環式灌流器，超聲波振動器(Olympus公司)。

1.2分組

1.2.1臨床內鏡檢測分組MatrixTM組：使用生物膜專用清洗劑MatrixTM完成清洗步驟ENZYCARE2組：使用ENZYCARE2多酶清洗劑完成清洗步驟。

1.2.2人工模擬內鏡生物膜模型分組對照組：內鏡管腔生物膜模擬物2 cm×20段，處理方式為0.1 mol/L的PBS浸泡15 min；MatrixTM組:內鏡管腔生物膜模擬物2 cm×20段，處理方式為MatrixTM生物膜專用清洗劑按照1∶20比例配制后浸泡15 min；ENZYCARE2組:內鏡管腔生物膜模擬物2 cm×20段，處理方式為全效多酶清洗劑按照1∶270比例配制后浸泡15 min。

1.3清洗及檢測方法

1.3.1臨床內鏡清洗及檢測方法

1.3.1.1清洗方法嚴格按照2004年衛生部《內鏡清洗消毒技術操作規范》的要求，按初洗、酶洗、漂洗程序清洗使用后的內鏡。內鏡使用后，立即用濕紗布擦拭鏡身，反復送氣送水10 s。取下內鏡裝好防水蓋，送至清洗消毒間。

1.3.1.2采樣與ATP生物熒光檢測連續6 d分別使用MatrixTM生物膜專用清洗劑(第1天、第3天、第5天清洗)和ENZYCARE2全效多酶清洗劑(第2天、第4天、第6天清洗)清洗內鏡，清洗前后采樣，采樣時記錄內鏡編號，兩組均為30條次。用無菌注射器抽取15 mL無菌生理鹽水從內鏡活檢孔注入，在出口處采集后快速擠入裂解液和熒光素酶，應用ATP熒光檢測儀測定相對光單位值(relative light unit，RLU)。

1.3.2人工模擬內鏡生物膜模型的建立和檢測方法

1.3.2.1人工模擬內鏡生物膜模型的建立將少量大腸埃希菌菌株接種到營養瓊脂斜面，于37 ℃培養24 h，用無菌營養肉湯洗菌，并用其配制成106cfu/mL的菌懸液，取菌懸液2 mL加入到裝有200 mL營養肉湯的三角燒瓶中，使其菌液濃度調整為100 cfu/mL備用。用帶有通氣孔(過濾層0.22 mm)的塞子將燒瓶塞住，將另一根軟管通過通氣孔置于營養肉湯液面上，通過蠕動泵和聚四氟乙烯管相連接組成管道系統。在37 ℃的條件下用蠕動泵以10 mL/min的流量循環流動，每天4 h，連續培養5 d后用無菌生理鹽水以10 mL/min的流速沖洗管腔。培養后的聚四氟乙烯管每10 cm截取1 cm的小段，作為生物膜樣本備用。

1.3.2.2生物膜清除效果評價將樣本置于含有10 mL PBS的無菌試管中，以40 kHz的頻次超聲振蕩10 min，使生物膜從管壁材料上剝離。分別進行細菌培養法、蛋白質定量法測定。①細菌培養法：吸取洗脫后的100 μL PBS，按一定的比例稀釋后接種于營養瓊脂平板，置于37 ℃恒溫培養箱培養48 h，觀察菌落生長情況并行菌落計數。②蛋白質定量法：吸取洗脫后的100 μL PBS與2 mL BCA反應液混合，60 ℃加熱30 min，冷卻后測量562 nm吸光值。

2結果

2.1應用不同清洗劑清洗內鏡效果比較兩組內鏡在使用清潔劑清洗后的RLU均值顯著低于清洗前，差異均有統計學意義(P<0.05)。清洗前兩組RLU值差異無統計學意義(P>0.05)。而清潔后兩組RLU值差異亦有統計學意義(P<0.05)，其中MatrixTM組清洗效果優于ENZYCARE 2組，詳見表1。

表1　不同清洗劑對臨床內鏡清洗效果比較±s)

2.2不同清洗劑對內鏡管腔生物膜的清洗效果對比通過應用細菌計數法、蛋白質定量法，MatrixTM組在人工模擬內鏡生物膜模型中對生物膜清除率分別為99.9%和94.8%，而ENZYCARE2組分別為52.4%和42.6%，兩組清除率差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2　不同清洗劑對模擬內鏡生物膜的清除效果比較±s)

3討論

3.1內鏡生物膜清除的重要性內鏡作為一種侵入性、微創性的診治工具已廣泛應用于臨床，據統計，內鏡檢查引起的感染率約為0.8%[9]，經內鏡檢查傳播幽門螺桿菌、人類免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒的報道已見諸多報道[2-3]。而上述感染均與內鏡管腔細菌生物膜的存在有著密切的關系。因此，消化內鏡的清洗質量必須以能徹底去除細菌生物膜為目的。

3.2內鏡生物膜的形成和危害生物膜是細菌由其分泌的含水聚合性基質(主要是胞外多糖)黏附在物體或生物組織表面形成的結構性細菌群落。由于內鏡結構復雜、材料特殊，加之活檢鉗注射針等器械的頻繁使用，容易造成內鏡腔內形成許多細小的劃痕和裂紋，病人的血液、體液、黏液等分泌物的污染如不能徹底地清洗干凈，容易在內鏡腔內尤其是劃痕和裂紋處形成柱樣或蘑菇樣的結構即生物膜，而且在反復的“使用-處理-再使用”循環過程中逐漸累積。Hadi等[10]發現，即便嚴格按照感染控制原則清洗消毒內鏡，仍然有2%內鏡手術導致病人細菌感染，其最終原因就是內鏡管腔內壁形成生物膜。多個掃描電鏡試驗中也發現臨床使用中的內鏡管腔生物膜生長現象十分普遍[11-12]。生物膜一旦在管腔器械中形成，則難以去除，并在反復使用和處理的循環過程中逐漸累積，當生物膜累積到一定厚度，常規的消毒劑很難穿透生物膜的胞外脂多糖基質殺死被黏液層包裹的細菌，造成清洗和消毒的失敗。

3.3生物膜清洗劑的作用機制和內鏡消毒效果比較生物膜特效清洗劑能通過滲透分解并瓦解生物膜菌落來達到去除生物膜的效果。生物膜清洗劑的祛除分子一端為親生物膜端，另一端為親水端，親生物膜端與生物膜緊密結合，親水端與水分子緊密結合，在水流動時帶動分子運動進而將生物膜剝離。本實驗研究結果顯示，MatrixTM生物膜特效清洗劑能夠有效地去除內鏡管腔中的生物膜內殘留活菌，其生物膜清除能力要比常規多酶清洗劑效率要高。通過抽取臨床內鏡標本和人工模擬內鏡生物膜模型相結合的方式，應用多種檢測方法更為嚴謹客觀地評價生物膜清洗劑與常規多酶清洗劑內鏡管腔對生物膜的清洗效果，與既往研究相比，更有助于為臨床內鏡清洗消毒提供更為客觀的參考。

3.4內鏡清洗消毒的注意事項本研究結果表明MatrixTM生物膜特效清洗劑是清潔內鏡的理想選擇。此外，在常規的內鏡消毒中，為保證內鏡消毒效果，還應做到：①內鏡使用后迅速進行預清洗，縮短細菌與內鏡接觸的時間，減少生物膜形成的機會；②清洗劑現用現配，用后更換；③加強工作人員專業知識培訓，熟練掌握操作流程，提高工作責任心，保證清洗過程中每個環節足夠的清洗時間和清洗質量。

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(本文編輯李亞琴)

收稿日期：(2014-11-23；修回日期：2015-12-15)

通訊作者

作者簡介李良芳，主管護師，本科，單位：510120，廣東省人民醫院；劉婉薇、鄭躍、陳浩()單位：510120，廣東省人民醫院。

基金項目國家自然科學 ，編號：81300279。

中圖分類號：R473.1

文獻標識碼：A

doi:10.3969/j.issn.1009-6493.2016.01.026

文章編號：1009-6493(2016)01A-0082-03