呼吸科病房鮑曼不動桿菌耐藥性及耐藥機制研究

王浩斌，沈　燕，張鳳岐

Study on drug resistance and drug resistance mechanism

of Acinetobacter baumannii in department of respiration ward

Wang Haobin,Shen Yan,Zhang Fengqi

(Affiliated First Hospital of Zhengzhou University,Henan 450052 China)

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呼吸科病房鮑曼不動桿菌耐藥性及耐藥機制研究

王浩斌，沈燕，張鳳岐

Study on drug resistance and drug resistance mechanism

of Acinetobacter baumannii in department of respiration ward

Wang Haobin,Shen Yan,Zhang Fengqi

(Affiliated First Hospital of Zhengzhou University,Henan 450052 China)

摘要:[目的]分析我院呼吸科病房鮑曼不動桿菌耐藥現狀，探討其耐藥機制。[方法]應用法國梅里埃VITEK2 微生物鑒定和藥物敏感系統對分離自呼吸科病房的86株鮑曼不動桿菌進行細菌鑒定及藥物敏感分析；PCR法檢測Ⅰ類整合子分布情況。[結果]鮑曼不動桿菌在痰液中的檢出率為80.23%，尿液8.14%，分泌物5.81%，血液3.49%，引流液2.33%；鮑曼不動桿菌敏感率較高的是頭孢哌酮舒巴坦(100.00%)、米諾環素(100.00%)，其次是多黏菌素B(98.8%)、替加環素(97.7%)、亞胺培南(89.5%)，對氨芐西林的耐藥率為100.00%；Ⅰ類整合子在臨床分離的鮑曼不動桿菌中檢出率較高。[結論]鮑曼不動桿菌耐藥性強，耐藥譜廣，臨床上應加強對鮑曼不動桿菌的實時檢測和預防控制。應采取綜合措施如加強手衛生知識的培訓教育，提高手衛生的依從性，加強痰液、分泌物等體液的引流，合理使用抗菌藥物等，以降低鮑曼不動桿菌醫院感染的發生率。

關鍵詞:鮑曼不動桿菌；耐藥性；整合子；耐藥機制；呼吸科

鮑曼不動桿菌(Acinetobacter baumannii，AB)是不動桿菌屬中最常見的革蘭陰性桿菌，廣泛存在于自然界、人類的皮膚及呼吸道等處。該菌在醫院環境中分布廣泛并可長期存活，在醫務工作人員手和各種醫療用具上的檢出率較高，是醫院(院內)感染的重要條件致病菌之一。由于抗生素的廣泛使用，鮑曼不動桿菌耐藥性逐漸增加[1]。為了解呼吸科病房鮑曼不動桿菌耐藥性，本研究對86例分離自該病區的鮑曼不動桿菌耐藥情況進行分析，并采用PCR方法檢測其Ⅰ類整合子攜帶情況，以期探討鮑曼不動桿菌的耐藥機制。

1材料與方法

1.1菌株來源86株鮑曼不動桿菌來自2013年9月—2014年1月我院呼吸科病房病人的痰液、血液、引流液等86份標本的分離培養中獲得。86株菌株在標本中的分布見表1。

表1　86株鮑曼不動桿菌的標本來源

1.2細菌鑒定與藥物敏感實驗細菌分離培養嚴格按照《全國臨床檢驗操作規程》進行，細菌鑒定與藥物敏感試驗采用法國梅麗埃VITEK系統進行。多重耐藥菌判斷標準按照2010年美國等對多藥耐藥菌共同提出的關于MDROs國際標準化定義建議(草案)[2]實行。用ATCC27853 銅綠假單孢菌進行細菌鑒定和藥物敏感試驗全程質量控制。

1.3方法

1.3.1模板質粒DNA的提取采用吸附柱法提取細菌DNA，所有模板OD260/OD280比值均在1.8~1.9之間。

1.3.2Ⅰ類整合酶基因與ISCR1的檢測采用聚合酶鏈反應(PCR)檢測Ⅰ類整合酶基因和ISCR1。 IntI1 擴增條件：94 ℃預變性4 min；94 ℃變性30 s,52 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min，30個循環；72 ℃延伸10 min。引物序列見表2。

表2　PCR引物序列

1.3.3PCR產物分析取5 μL產物進行2%瓊脂糖凝膠電泳，紫外成像儀拍照觀察。

2結果

2.1鮑曼不動桿菌對抗菌藥物的耐藥情況(見表3)

表3　鮑曼不動桿菌對抗菌藥物的耐藥情況(n=86)

2.2IntI1的檢測86株鮑曼不動桿菌中IntI1陽性菌56株，陽性率65.1%；電泳結果如圖1。

圖1　PCR產物電泳圖

2.3Ⅰ類整合子陽性菌株與陰性菌株耐藥情況比較(見表4)86株細菌中Ⅰ類整合子陽性株多重耐藥率(3類或以上藥物)為87.5%，陰性株為26.7%，Ⅰ類整合子陽性株的多重耐藥率顯著高于陰性株，差異具有統計學意義(P<0.01)，說明Ⅰ類整合子的存在與多重耐藥性關系密切。

表4　整合子陽性與陰性鮑曼不動桿菌

3討論

鮑曼不動桿菌是臨床常見的病原菌，近年來其耐藥性呈逐漸增加趨勢，其中多重耐藥、泛耐藥性更增加了臨床治療難度。國內外曾報道過鮑曼不動桿菌耐藥株的暴發流行[3-6]，其耐藥及耐藥性播散機制也成為研究人員關注的熱點。質粒、整合子等可移動遺傳元件通過介導耐藥基因的水平傳播導致細菌耐藥。整合子是一類重要的耐藥基因傳播元件，憑借其位點重組成分和整合酶基因成分將不同的耐藥基因盒整合在一起，介導耐藥基因在染色體、質粒及轉座子之間的移動，從而導致耐藥基因在不同細菌間的播散，引起細菌多重耐藥。整合子基本結構包括5’CS、3’CS及二者之間的可變區。5’CS包括編碼整合酶的基因、整合子重組位點和可變區啟動子；可變區可攜帶不同種類的耐藥基因盒，如：氨基糖苷類、甲氧芐啶類、β-內酰胺類、氯霉素類等；3’CS包含qacE和sul1，分別編碼對季銨鹽類化合物和磺胺類耐藥。本調查分析后發現Ⅰ類整合子陽性株多重耐藥性強于Ⅰ類整合子陰性株，說明Ⅰ類整合子在鮑曼不動桿菌多重耐藥性的形成中發揮重要作用。近兩年研究者發現插入序列共同區(ISCR1)作為重要的遺傳元件之一，也參與形成細菌多重耐藥性，ISCR以串聯形式與整合子相連，ISCR1與Ⅰ類整合子形成的復雜性Ⅰ類整合子值得研究。本病區86株鮑曼不動桿菌80.23%來自痰標本。提示該菌主要引起住院病人的下呼吸道感染，這與文獻報道一致[7-8]。

醫院內污染的器械及工作人員的手都可以是鮑曼不動桿菌的傳播媒介[9-10]，提示應加強診療器械的消毒滅菌，嚴格執行手衛生，提高手衛生的依從性,阻斷傳播途徑，盡量避免鮑曼不動桿菌的傳播對病人造成的傷害。

參考文獻：

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(本文編輯李亞琴)

收稿日期：(2015-01-13；修回日期：2015-12-14)

作者簡介王浩斌，主管護師，本科，單位：450052，鄭州大學第一附屬醫院(內科醫學部)；沈燕、張鳳岐單位：450052，鄭州大學第一附屬醫院。

基金項目國家臨床重點專科建設項目。

中圖分類號：R471

文獻標識碼：A

doi:10.3969/j.issn.1009-6493.2016.01.034

文章編號：1009-6493(2016)01A-0105-03