竹葉提取物的抑菌性分析

林麗園 張甄妮 嚴姝 沈琦 閔莉靜

摘 要 用微波輔助提取竹葉提取物，用液體培養基稀釋法測定竹葉提取物對大腸桿菌、白葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的最低抑菌濃度（MIC）。結果表明，竹葉提取物對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、白葡萄球菌、黑曲霉菌均有不同程度地抑制作用，其最低抑菌濃度濃度（MIC）分別為：6.5%、6.25%、6.25%、6.3%。

關鍵詞 竹葉；提取物；抑菌性

中圖分類號：S795 文獻標志碼：B 文章編號：1673-890X（2015）36--02

竹子是禾本科（Gramineae）竹亞科（Bambusoideae）多年生常綠植物，有著復雜的次生代謝。據記載，竹葉性淡、微澀、寒，味甘、苦，具有清熱利尿，明目解毒及止血的功能。近年來，有學者在竹葉提取物中發現包括黃酮類化合物、酚酸類化合物、生物堿、生物活性多糖、氨基酸肽類、葸醌類和萜類內酯等多種活性成分[1-3]。一般認為，黃酮類化合物、蒽醌化合物、生物堿具有抗菌活性。

本文用微波輔助提取竹葉黃酮，并用測定竹葉提取物對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、白葡萄球菌、黑曲霉菌等四種菌種的最低抑菌濃度（MIC）。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、白葡萄球菌和黑曲霉菌，以上菌種均來自湖州師范學院醫學院的標準菌株。瓊脂粉、無水乙醇、石油醚、NaCl、蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、甘油、真空干燥箱（DZG-6050）、高速中藥粉碎機（WK-200B）、電子天稱（BS124S）、旋轉蒸發器（RE-52A）、常壓微波輔助合成/萃取反應儀（ZY-MAS-1）、恒溫培養箱（DPX-9052B-1）、數顯水浴恒溫振蕩器（SHA-B）、電熱恒溫水浴鍋（DK-S24）、磁力加熱攪拌器（78-1）、立式壓力蒸汽滅菌器（LDZX-75KB）、恒溫培養箱[100級（美國聯邦標準209b）]和凈化工作臺（DZG-6050）

1.2 實驗方法

竹葉提取物的制備：新鮮竹葉烘干，粉碎，過篩。稱取10 g竹葉粉末，加250 mL無水乙醇，浸泡30 min，微波處理（時間5 min，功率600 W，溫度60 ℃），恒溫回流提取2 h，過濾，濃縮，回收乙醇，濃縮。

培養基的制備：蛋白胨10.0 g；牛肉浸膏3.0 g；葡萄糖；氯化鈉5.0 g；瓊脂20.0 g；去離子水至1 000 mL培養基，用1 mol/L的氫氧化鈉溶液調節pH7.0～7.5，121 ℃濕熱滅菌20 min，得固體培養基。此配方不加瓊脂為液體培養基。

供試菌懸液的制備：用接種環刮取適量菌種于斜面培養基上培養24 h，使菌種活化，然后將活化的菌種取一環接種于4.0 mL的液體培養基中，培養8 h，得到菌懸液。

最低抑菌濃度的測定：以適合供試菌生長的液體培養基將被測的竹葉提取物進行一系列對倍稀釋，濃度分別為100%，50%，25%，12.5%，6.25%，3.125%，1.56%；同時，設空白對照組。各試管加入菌懸液100 ?L，在適宜的條件下培養24 h，判定結果，以對照試管有細菌顯著生長的時間為觀察和評定MIC的最宜時間，以含藥量低而無肉眼可見菌生長的一管含藥量為藥物對該菌的MIC。

竹葉提取物濃度對抑菌效果的影響探討：將制備的竹葉提取物原液配制成原液、1∶1、1∶10、1∶20等不同濃度的系列溶液，浸泡濾紙，備用。分別吸取0.1 mL各菌懸液于培養基中，涂布均勻后，再用無菌鑷子夾取分別浸有上述系列竹葉提取物溶液及對照液（CK）的無菌濾紙片，瀝去多余試液后，貼于涂布后的含菌平皿上。每皿5片（3片為實驗組，另3片為對照組），完成后，置于適宜溫度下培養24 h。測定濾紙片的抑菌圈大小，數據處理，比較抑菌效果。

2 結果與分析

由1看出，竹葉提取物對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、白葡萄球菌、黑曲霉菌均有不同程度地抑制作用，其最低抑菌濃度濃度（MIC）分別為：6.5%、6.25%、6.25%、6.3%。

在竹葉提取物濃度對抑菌效果的影響討論實驗結果表明，隨著竹葉提取濃度的減低，抑菌圈面積逐漸減小。這表明隨著竹葉提取物濃度的減小，提取物對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、白葡萄球菌、黑曲霉菌的抑菌效果逐漸減弱。而且大腸桿菌在比例為1∶20（提取原液：溶劑）時，抑菌圈面積為負值，說明此濃度下的竹葉提取物對大腸桿菌沒有抑菌效果。

3 結論與討論

本論文在微波萃取竹葉提取后，初步研究了竹葉提取物對不同微生物的最低抑菌濃度（MIC）。在制備竹葉提取物的過程中，考慮到提取物的穩定性，整個提取濃縮的過程始終控制在較低溫度下進行，竹葉提取為對各菌種都表現出明顯的抑菌活性。

本實驗中只討論了竹葉提取物對不同菌種的最低抑菌濃度及竹葉提取物濃度對抑菌效果進行了探討，后期將進一步討論，竹葉提取物的抑菌活性的影響因素及竹葉提取物中具有抑菌活性的有效成分的確定。上述實驗結果預示著竹葉提取物可用作食品防腐劑，這無疑對竹葉開發利用提供了一條可行的思路。目前，隨著人們生活水平的提高，安全健康消費意識不斷增強，防腐劑的使用要求將更為嚴格，竹葉提取物作為天然食品防腐劑，且不含對人體有害的物質，竹葉提取物作為防腐劑的開發研究蘊藏著良好的市場前景。

參考文獻

[1]張英，吳曉琴，俞卓裕.竹葉黃酮和內酯的季節性變化規律研究[J].林產化學與工業，2002，22（2）：65-69.

[2]李洪玉，孫靜蕓.竹葉化學成分研究[J].中藥材，2003，26（8）：562-563.

[3]羅金岳，陳小燕.從箬竹葉中提取茶多酚的研究[J].林產化工通訊，2003，37（6）：15-19.

（責任編輯：趙中正）