E-cadherin在口腔扁平苔蘚中的表達及意義

杜勇李浩渤

E-cadherin在口腔扁平苔蘚中的表達及意義

杜勇李浩渤

【摘要】目的口腔扁平苔蘚(OLP)是常見的口腔黏膜病變，部分OLP病例可發生癌變，E-cadherin是參與細胞間粘附連接的主要分子，在腫瘤的發生、發展及浸潤轉移中起到重要的作用，成為預示腫瘤進展及預后的重要指標之一。本實驗的目的旨在檢測E-cadherin在口腔扁平苔癬中的表達，探討E-cadherin在OLP發病及癌變中的作用，為口腔扁平苔蘚癌變的早期診斷和治療提供依據。方法本研究使用52例口腔扁平苔蘚標本蠟塊和41例口腔正常黏膜標本蠟塊。運用SP免疫組織化學法，以E-cadherin單克隆抗體作為一抗，用已知的E-cadherin陽性的正常口腔黏膜標本作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照，對切片標本進行免疫組化染色，觀察陽性染色的分布及強度，對表達情況進行研究分析。結果在52例口腔扁平苔蘚標本中25例呈正常陽性表達，27例呈現異常陽性表達，異常陽性率為51.92%;在41例正?？谇火つ吮局?9例呈正常陽性表達，2例呈現異常陽性表達，異常陽性率為4.88%，2組比較差異有統計學意義。結論E-cadherin在口腔扁平苔蘚標本中的異常陽性表達率明顯高于正常口腔黏膜，提示E-cadherin在口腔扁平苔蘚惡變的過程中發揮著一定作用，進一步證實口腔扁平苔蘚具有潛在惡變的可能。

【關鍵詞】口腔扁平苔蘚; E-鈣粘蛋白;免疫組化

【中圖分類號】R 781.5+9

【文獻標識碼】A

【文章編號】1002－7386(2015)16－2426－04

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2015.16.007

通訊作者:作者單位: 050000石家莊市，河北醫科大學第二醫院口腔內科李浩渤，050000河北醫科大學第二醫院口腔內科;E-mail: lhbkn@126.com

【Abstract】Objective To investigate the expression of E-cadherin in oral lichen planus(OLP)and to explore the role of E-cadherin in pathogenesis and carcinomatous change of OLP in order to provide scientific evidences for early diagnosis and treatment of OLP canceration.Methods Fifty-two OLP specimens were collected，at the same time，41 normal oralmucousmembrane specimens were served as control group.Using E-cadherinmonoclonal antibody as primary antibody，taking E-cadherin-positive normal oralmucousmembrane specimen as positive controls and using PBS as negative controls instead of primary antibody，these specimens were detected by immmunohistology(SP)to observe the distribution and intensity of positive staining，moreover，the expression of E-cadherin was analyzed.Results Twenty-five specimens out of the 52 OLP specimens showed normal positive expression of E-cadherin，however，the other 27 specimens showed abnormal positive expression of E-cadherin，with abnormal positive rate being 51.92%.However in control group，39 out of 41 specimens showed normal positive expression and 2 specimens showed abnormal positive expression，with abnormal positive rate being 4.88%，there was a significant difference between two groups.Conclusion The abnormal positive expression rate of E-cadherin in OLP is significantly higher than that in normal oralmucousmembrane，which suggests that E-cadherin plays a certain role in the canceration of OLP，and it is further confirmed that OLP is possible to be cancerated.

收稿日期:(2015－02－10)

Expression and significance of E-cadherin in oral lichen planus

DU Yong，LI Haobo.Department of Stomatology，The Second Hospital of Hebeimedical University，Shijiazhuang 050000，China

【Key words】oral lichen planus; E-cadherin; immunohistochemistry

口腔扁平苔蘚(OLP)是一種常見的口腔黏膜病變，具體發病機制不詳，可能包括抗原特異性和非特異性兩種。抗原特異性機制包括基底角質細胞抗原提呈和CD+8細胞毒性T細胞殺傷抗原特異性角質細胞。非特異性機制包括肥大細胞脫粒和口腔扁平苔蘚病變區基質金屬蛋白酶被激活。研究發現部分OLP病例可發生癌變，癌變率為1%～2%［1－3］，同時某些癌基因或抑癌基因在OLP的異常表達也提示OLP具有癌變的危險性，故WHO將其列入“潛在惡性病變”的范疇［1，4］。研究表明，OLP癌變是多種因素共同作用導致上皮細胞增殖和凋亡的失衡，致癌基因、抑癌基因或某些信號通路出現異常，最終誘使OLP向惡性方向發展［5－7］。近年，部分學者對OLP是否癌變產生了疑問和爭議，有學者認為OLP與其他口腔黏膜良性損害相比，并不存在更高的癌變危險性，并且認為OLP的上皮組織與潛在惡性病變或癌變的口腔組織不同，而與其他良性口腔病變相似，OLP的3個主要抑癌基因位點與輕、重度異常增生及口腔鱗狀細胞癌(OSCC)相比有明顯差異，與良性纖維瘤基本一致［8］。因此，若能發現與OLP癌變趨勢相關的生物標記物，則可以對OLP患者的癌變風險做出科學評估。目前臨床上判斷癌變可能性的主要依據是通過病理切片來評價上皮異常增生的組織學形態，近年來，生物標記物的發展有助于更加客觀地判斷OLP患者所處的疾病階段，并預

測癌變的潛在危險性，但是如何提高生物標記物的特異性和可靠性是該領域研究的難點之一。因此，若能發現OLP向口腔鱗癌轉變趨勢的生物標記物，則可以對OLP患者的癌變風險做出科學評估。目前關于E-cadherin在口腔鱗狀細胞癌(OSCC)中的表達已有報道，但它在OLP中的表達情況鮮見報道，E-cadherin在OLP癌變過程中是否發揮作用有待研究。本研究擬采用免疫組化方法研究E-cadherin在OLP中的表達，旨在探討E-cadherin在OLP發病及癌變中的作用，以期為口腔扁平苔蘚癌變的早期診斷和臨床治療提供更多的理論依據。

1　資料與方法

1.1一般資料收集河北醫科大學第二醫院2005至2012年口腔扁平苔蘚蠟塊標本52例(所有患者在取標本前未經任何治療)，每例標本均進行HE染色后經病理醫師閱片后確診。本組患者中男28例，女24例;年齡38～73歲，平均年齡52.6歲。對照組:正?？谇火つそM織41例，均取自囊腫旁及牙槽骨整形手術時切除的正常黏膜組織，每例均進行HE染色后經病理醫師閱片后確診。其中男22例，女19例;年齡21～68歲，平均年齡31.6歲。2組一般資料具有均衡性。

1.2對照實驗用已知的E-cadherin陽性的正常口腔黏膜標本作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3實驗方法運用SP免疫組織化學法，以E-鈣粘蛋白單克隆抗體作為一抗，對切片標本進行免疫組化染色，觀察陽性染色的分布及強度，對表達情況進行研究分析。所有標本均經10%甲醛固定，石蠟重新包埋后，將每個蠟塊切為5 μm的切片，共切3張，1張HE染色，1張E-鈣粘蛋白染色，1張作為陰性對照。一抗:兔抗人E-cadherin單克隆抗體、二抗:生物素標記羊抗兔IgG。

操作步驟如下:石蠟切片常規脫蠟至水; 3% H2O2甲醇振洗25min，以封閉內源性過氧化物酶活性;微波抗原修復，(92～98)℃×15min，室溫冷卻;正常山羊血清封閉，37℃孵育30min;傾去血清，滴加一抗，4℃過夜;滴加生物素化二抗，37℃孵育25min;滴加辣根酶標記的鏈酶卵白素，37℃孵育20min; DAB顯色，蘇木素復染，脫水、透明、封片。

上述步驟中，除正常山羊血清封閉一步，其余每步后均以PBS振洗5min×3次。實驗中主要試劑:一抗:兔抗人E-cadherin單克隆抗體(購自中國武漢博士德生物公司)、二抗:生物素標記羊抗兔IgG(購自中國武漢博士德生物公司)、SP免疫組化試劑盒、DAB顯色劑、多聚賴氨酸(Poly-L-lysine)防脫片劑(購于河北博海生物有限公司)。

1.4結果判定E-cadherin以細胞膜上出現棕黃色膜性染色作為正常陽性表達的標記。而位于細胞漿中或胞膜與胞漿共同有連續線狀或斑點狀黃色至棕黃色顆粒沉積者為異常陽性表達，無染色者為陰性表達。1.5統計學分析應用SPSS 17.0統計軟件，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1 E-cadherin在口腔正常黏膜和扁平苔蘚中的表達在41例正?？谇火吮局?9例呈正常陽性表達，2例呈異常陽性表達，異常陽性率為4.88%;在52例口腔扁平苔蘚標本中25例呈正常陽性表達，27例呈現異常陽性表達，異常陽性率為51.92%，差異有統計學意義(χ2=23.64，P＜0.05)。見表1，圖1、2。

圖2　E-cadherin在扁平苔蘚中的表達(SP×400)

圖1　E-cadherin在正常黏膜中的表達(SP×400)

表1　E-cadherin在2種黏膜中表達比較　例

2.2 E-cadherin的表達和臨床病理參數的關系在性別和年齡的對照中，E-cadherin在口腔扁平苔蘚中的表達差異無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

表2　E-cadherin的表達和臨床病理參數的關系　例

3　討論

OLP是口腔黏膜的一種免疫性炎癥性疾病，其病因與局部慢性損傷、藥物刺激、精神緊張、全身性疾患、細菌、病毒感染等有關。目前認為OLP是一種由外源性抗原或自身抗原導致的、由細胞免疫介導的口腔黏膜基底角質細胞的慢性免疫破壞性疾病。目前多數學者支持口腔扁平苔蘚是癌前狀態，是一種具有惡性轉變風險的慢性口腔黏膜病，經過一系列復雜的過程可能轉變為口腔鱗狀細胞癌(OSCC)。OLP癌變是多種

因素共同作用的結果，在局部免疫制劑、病毒感染、致癌劑和細胞因子等因素的共同作用下，組織發生癌基因活化、染色體突變和抑癌基因的異常，最終導致組織發生癌變。近些年關于OLP癌變機制及有關基因的研究受到廣泛重視，對于OLP癌變的早預防、早診斷和早治療都具有重要意義。

E-cadherin是一類介導同源細胞間粘附的鈣離子依賴性跨膜糖蛋白，屬于鈣依賴性的Ⅰ型細胞粘附分子，主要存在于人和動物上皮細胞，是哺乳動物發育過程中第一個表達的鈣粘蛋白。E-cadherin影響胚胎發育中細胞的分化，參與組織器官的形成，在細胞間粘附中發揮著細胞極性和組織完整性的功能，對維持上皮細胞形態和組織完整性發揮重要作用。E-cadherin介導的細胞間粘附力減弱，使細胞獲得浸潤性和游走性遷移能力，從而有利于腫瘤細胞在繼發部位生長增殖，形成新的病灶。進一步研究發現E-cadherin介導了多種細胞的不貼壁生長，而且E-cadherin裂解片段在許多病變中發揮著重要作用，包括細胞連接的破壞、細胞遷移、侵襲及信號的激活，提示E-cadherin同時具有著促癌的作用［9，10］。研究已證實在多種上皮來源的惡性腫瘤中，如結腸癌、胃癌、胰腺癌、食管癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、子宮癌等均發現E-cadherin的異常表達［11－13］，提示E-cadherin與腫瘤的病理特征和生物學行為密切相關。E-cadherin不僅在腫瘤的發生、發展及浸潤轉移中發揮了重要的作用，而且在癌前病變的發展中也發揮了重要的作用，如口腔黏膜白斑、宮頸癌的癌前病變上皮內瘤樣病變中也發現了E-cadherin的異常表達［14，15］，可以作為腫瘤早期診斷和預防的可靠指標。

E-cadherin是一種鈣依賴性的細胞粘附分子，編碼基因定位于16q21，其N端位于細胞外而C端位于細胞內，屬于鈣粘蛋白超家族，是一種重要的細胞粘附分子，主要調節細胞與細胞之間、細胞與基質之間的粘附反應，維持組織結構形態和完整性。E-cadherin介導的粘附連接在維持上皮細胞極性和抑制細胞遷移能力方面發揮著重要的作用［17，18］。作為是一種重要的抑癌分子，E-cadherin主要通過加強細胞間的粘附和抑制細胞增殖來發揮抑癌功能。E-cadherin基因表達改變在腫瘤的發生、發展過程及浸潤轉移中起到重要的作用，與腫瘤的分化程度、淋巴結轉移、遠處轉移和復發率密切相關，成為預示腫瘤進展及患者預后的重要指標之一［19，20］。通過對多種腫瘤中E-cadherin表達的研究發現在多種腫瘤組織中均伴有E-cadherin基因的突變和功能改變，呈現表達減少或消失，同時伴有癌組織侵襲性和轉移能力增加［21－23］，證明了E-cadherin的減少或丟失可以成為上皮細胞間質樣轉變的標志性變化，細胞外的信號通過多種信號轉導調控機制活化不同的轉錄因子，調節下游蛋白的表達，E-cadherin作為這個調控網絡的核心，通過改變腫瘤細胞的表型使遷移到新的位置的腫瘤細胞獲得上皮樣的表型，在繼發部位生長增殖，形成新的病灶，在腫瘤的發展、侵襲及轉移中發揮了重要的作用［24－26］。OLP作為OSCC的癌前病變，E-cadherin是否在其發生、發展及惡變過程中起到一定作用，罕見文獻報道。

在本實驗中檢測了E-cadherin在41例正常口腔黏膜標本和52例口腔扁平苔蘚標本中的表達，結果顯示E-cadherin在2組中的表達具有顯著差異，在口腔扁平苔蘚標本中E-cadherin的膜性表達率明顯低于在正常黏膜中的表達，膜性表達的喪失提示E-cadherin在口腔扁平苔蘚惡變的過程中發揮著一定作用，口腔扁平苔蘚具有潛在惡變的可能，據此我們支持OLP具有癌變危險性的觀點，認為OLP是一種潛在惡性病變?？谇话装吲cOLP同樣為常見的口腔黏膜癌前病變，已證實口腔白斑中E-cadherin呈現異常表達，這與本實驗的結果基本一致，在一定程度上佐證了本實驗的準確性，支持了本實驗的結論。

總之研究已證實E-cadherin涉及多條致癌通路，本研究以E-cadherin作為實驗指標，觀察其在OLP中的表達情況，對E-cadherin在口腔扁平苔蘚癌變中的作用做進一步的探討，以期為口腔扁平苔蘚癌變的早期診斷和臨床治療提供更多的理論依據。

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