HPLC法測定烏蘭溫都蘇－10膠囊中丹酚酸B的含量

李洪澤王玉華韓風雨孔新穎劉福青劉　霞.內蒙古天奇中蒙制藥股份有限公司，內蒙古　0000; ．內蒙古醫學院藥學系，內蒙古　0000;.內蒙古天奇藥業投資(集團)有限公司，內蒙古　0000; .內蒙古赤峰陸爾草中蒙藥科技有限公司，內蒙古　0000;.內蒙古蒙吉藥業科技有限責任公司，內蒙古　0000; ．內蒙古博泰現代蒙藥制劑研究開發有限公司，內蒙古　0000

HPLC法測定烏蘭溫都蘇－10膠囊中丹酚酸B的含量

李洪澤1王玉華2韓風雨3孔新穎4劉福青5劉霞6
1.內蒙古天奇中蒙制藥股份有限公司，內蒙古024000; 2．內蒙古醫學院藥學系，內蒙古024000;
3.內蒙古天奇藥業投資(集團)有限公司，內蒙古024000; 4.內蒙古赤峰陸爾草中蒙藥科技有限公司，內蒙古024000;
5.內蒙古蒙吉藥業科技有限責任公司，內蒙古024000; 6．內蒙古博泰現代蒙藥制劑研究開發有限公司，內蒙古024000

【摘要】目的:建立高效液相色譜法測定烏蘭溫都蘇－10膠囊中丹酚酸B含量的方法.方法:采用HPLC法，色譜柱為迪馬C18柱(5μm，4. 6mm×250mm).以含0. 017%甲酸溶液為流動相A，以甲醇－乙腈(30∶10)為流動相B，進行梯度洗脫，流速為1. 0ml/min，檢測波長為286nm.結果:丹酚酸B在117. 02～1170. 2ng范圍內呈良好的線性關系，r =1. 0000，平均回收率為101. 0%，RSD為1. 88%.結論:該測定方法操作簡便、結果準確、重現性好，可用于烏蘭溫都蘇－10膠囊的質量控制.

【關鍵詞】烏蘭溫都蘇－10膠囊;丹酚酸B; HPLC

烏蘭溫都蘇－10膠囊是由十味中蒙藥材組成，功效主治:調心“赫依”、血相搏、活血、安心、化脂.用于心煩、心區刺痛，心供血不足等.丹參為處方中的君藥.本實驗以丹酚酸B為檢測指標，用HPLC法進行測定.在經實驗確定了提取條件和色譜條件的前提下，進行了方法學考察.

1　儀器與試劑

1. 1儀器日本－2000高效液相色譜儀，檢測器: DAD檢測器，工作站: EZChrom Elite for Hitachi Version.

1. 2試劑與試藥烏蘭溫都蘇－10膠囊(批號: 20100804，內蒙古天奇中蒙制藥股份有限公司);丹酚酸B對照品(批號: 111562－200807，中國藥品生物制品檢定所);甲醇、乙腈為色譜純;水為超純水;其它試劑均為分析純.

2　方法與結果

2. 1色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以含0. 017%甲酸溶液為流動相A，以甲醇－乙腈(30∶10)為流動相B，按下表中規定進行梯度洗脫;流速: 1ml/min;檢測波長: 286nm;柱溫: 30℃.理論板數按丹酚酸B峰計算應不低于4000.

時間(min)　　流動相A　　流動相B 0～23　60　40 23～28　0　100 28～45　0　100 45～47　60　40 47～60　60　40

2. 2溶液的制備

2. 2. 1對照品溶液的制備精密稱取丹酚酸B對照品適量，置棕色量瓶中，加75%甲醇制成每1ml含丹酚酸B 60μg的溶液，即得.

2. 2. 2供試品溶液的制備取本品內容物，混勻，取約0. 25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加75%甲醇50ml，稱定重量，超聲處理(功率220w，頻率40KHz)30min，再稱定重量，用75%甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續濾液，即得.

2. 2. 3陰性樣品溶液的制備取缺丹參的其他藥材，按本品制備工藝，制備陰性樣品.精密稱取陰性樣品適量，按“供試品溶液的制備方法”制成陰性溶液.

2. 3方法學考察

2. 3. 1專屬性試驗分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液照溶液各10μl，按上述色譜條件進樣測定.結果供試品色譜中，在與對照品相應的保留時間處有相應的色譜峰，而陰性對照溶液中相應保留時間處沒有色譜峰.方法的專屬性好.色譜圖見圖1.

圖1　專屬性試驗色譜圖

2.3.2線性范圍考察精密稱取丹酚酸B對照品3.01mg(含量為97.2%)，置5ml量瓶中，加75%甲醇溶解并稀釋至刻度，精密吸取1ml濃溶液到10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度.精密吸取2、5、10、15、20μl，分別注入液相色譜儀中，按“色譜條件”條件測定，記錄丹酚酸B峰面積積分值(Y).以進樣量(X:μg)對峰面積積分值(Y)進行回歸分析.回歸方程為: Y =4193.9X +5200.6，R =1.0000，丹酚酸B在117.02 ～1170.2ng范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系.

2. 3. 3精密度試驗

2. 3. 3. 1對照品精密度試驗丹酚酸B對照品溶液(濃度為58. 51μg/ml)，進樣10μl，按“2. 1色譜條件”項下方法測定.結果見表1.

表1　對照品精密度試驗結果

表1的結果表明，RSD為1. 35%，說明丹酚酸B對照品溶液精密度好.2. 3. 3. 2供試品精密度試驗取本品(批號: 20100804)約0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50ml，超聲提取30min，過濾，取續濾液2ml定容到5ml的量瓶中，以75%甲醇稀釋至刻度，按以上色譜條件測定，連續進樣6次，測得丹酚酸B峰面積積分值.結果見表2.

表2　供試品精密度試驗結果

表2的結果表明，RSD為1. 75%，說明供試品溶液測定的精密度好.

2. 3. 4穩定性試驗取本品約0. 25g，精密稱定，按“2. 2. 2供試品溶液的制備”項下的方法制備溶液，分別于0、2、4、8、12、24、48h進樣，記錄峰面積積分值.結果見表3.

表3　穩定性試驗結果

表3的結果表明，供試品溶液在48h內穩定.

2. 3. 5重復性試驗取同一批次供試品粉末(批號: 20100806)6份，每份取樣量約0. 25g，精密稱定，按“2. 2. 2供試品溶液的制備”項下的方法制備溶液，進樣10μl，按“2. 1色譜條件”條件測定，計算含量.結果見表4.

2. 3. 6加樣回收試驗精密稱取供試品(批號: 20100806;含量為10. 57mg/g)約0. 1250g，共9份，精密稱定，分成3組，每組3份.分別精密加入丹酚酸B對照品1. 069、1. 069、1. 069、1. 306、1. 306、1. 306、1. 603、1. 603、1. 544mg.按“2. 2. 2供試品溶液的制備”項下的方法制備溶液，進樣10μl，按“2. 1色譜條件”條件測定，計算加樣回收率.結果見表5.

表4　重復性試驗結果

表4的數據表明，供試品測定的重復性好.

表5　加樣回收試驗結果

表5的結果顯示，RSD為1. 88%，平均回收率101. 0%，表明方法的準確度好.

2. 4供試品的測定取三批上市包裝條件的中試樣品(批號: 20100805、20100806、20100807)，按“2. 2. 2供試品溶液的制備”項下的方法制備溶液，進樣10μl，按“2. 1色譜條件”條件測定，計算含量.結果見表6

表6　三批供試品含量測定結果

以上實驗結果顯示，三批樣品的含量沒有明顯差異.

2. 5含量限度制定經測定丹參藥材中丹酚酸B(C36H30O16)含量為68. 8mg/g，三批供試品的均含量平均為10. 97mg/g，按丹參藥材含量68. 8mg/g計算轉移率為59. 63%.《中國藥典》2010年版一部“丹參”[1]藥材含量測定項下規定含丹酚酸B不得少于3. 0%，考慮到藥材的來源、貯藏以及在生產中損耗等因素，暫定為本品每粒含丹參以丹酚酸B(C36H30O16)計，不得少于1. 7mg.

3　討論

3. 1檢測波長的選擇藥典及有關文獻采用HPLC法測定單藥材及成方制劑中丹酚酸B的含量，檢測波長為286nm.本實驗在200～800nm波長范圍內對丹酚酸B對照品溶液進行光譜掃描，光譜圖中287nm處有最大吸收.

3. 2提取方法的選擇[1－5]比較了超聲提取、加熱回流提取、索氏提取、冷浸提取四種方法，及75%甲醇、75%乙醇為提取溶液，實驗結果顯示，超聲提取效率高，且方法簡便，故選擇用超聲提取方法.通過考察超聲時間，超聲30min即可提取完全.

參考文獻

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收稿日期:( 2014. 10. 13)

【文章編號】1007－8517(2015)02－0012－03

【文獻標志碼】A

【中圖分類號】R284. 1