栝樓雄株莖葉酚酸類化學(xué)成分研究△

劉飛，方磊，李佳，張永清*

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355；2.山東省分析測試中心，山東 濟(jì)南 250014)

·基礎(chǔ)研究·

栝樓雄株莖葉酚酸類化學(xué)成分研究△

劉飛1，方磊2，李佳1，張永清1*

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355；2.山東省分析測試中心，山東 濟(jì)南 250014)

目的：研究栝樓雄株莖葉中的酚酸類成分，充分利用生產(chǎn)中的廢棄資源。方法：乙醇提取，提取物以適量水混懸，依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，利用聚酰胺和Sephadex LH-20柱色譜、C18中壓柱色譜及制備型高效液相色譜等手段進(jìn)行分離純化，根據(jù)各化合物的理化性質(zhì)及譜學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果：共分離得到8個酚酸類化合物，分別鑒定為反式桂皮酸(1)、香草酸(2)、反式阿魏酸(3)、3-羥基乙?；胚?4)、對羥基苯甲酸(5)、對羥基桂皮酸(6)、原兒茶酸(7)、對羥基苯甲醛(8)。結(jié)論：除化合物5以外，其他化合物均為首次從該部位分離得到，化合物1、3、4、6、7均為首次從該植物中分離得到，為生產(chǎn)中廢棄資源的綜合利用提供了參考。

栝樓；雄株莖葉；酚酸類；提取分離；結(jié)構(gòu)鑒定

栝樓TrichosantheskirilowiiMaxim.隸屬于葫蘆科栝樓屬，是多年生草質(zhì)藤本植物。其果實(shí)(瓜蔞)、果皮(瓜蔞皮)、種子(瓜蔞子)、塊根(天花粉)均可藥用[1]。栝樓化學(xué)成分多種多樣，主要包括揮發(fā)油、甾醇、萜、黃酮及酚、蛋白質(zhì)等類及其他類化合物[2-4]。近年來，關(guān)于栝樓各藥用部位化學(xué)成分的研究報(bào)道逐漸增多，但少見對栝樓莖葉化學(xué)成分的研究。栝樓莖葉在治療胃癌、高血壓等的中藥配方中起著重要作用[5-6]，證明了栝樓莖葉同樣具有藥用價(jià)值，因此筆者認(rèn)為有必要對栝樓莖葉化學(xué)成分進(jìn)行研究。栝樓為雌雄異株植物，在用種子進(jìn)行繁殖的時(shí)候，往往雄株多于雌株，如果以果實(shí)為目標(biāo)產(chǎn)品時(shí)，就需要在花蕾出現(xiàn)、容易區(qū)分性別時(shí)將雄株拔除，這樣就會產(chǎn)生大量的雄株莖葉，為充分利用該資源，筆者以雄株栝樓植株莖葉為實(shí)驗(yàn)材料，系統(tǒng)研究了其化學(xué)成分組成，本研究報(bào)道栝樓雄株莖葉中的酚酸類成分。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Bruker-400核磁共振波譜儀(瑞士布魯克公司)；普源L-3000高效液相色譜儀(北京普源精電科技有限公司)；innoval C18高效液相色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；電子分析天平(日本Shimadzu公司)。

1.2 材料

硅膠填料(100～200目、200～300目，青島海洋化工廠)；GF254硅膠板(青島海洋化工廠)；聚酰胺(浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠)；Sephadex LH-20填料(日本YMC公司)；高效液相用甲醇、乙腈(色譜純，美國Tedia公司)；水(娃哈哈純凈水)；乙醇、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、冰乙酸等均為分析純。

栝樓雄株莖葉于2014年7月采于山東省濟(jì)南市長清區(qū)馬山鎮(zhèn)雙泉村栝樓種植基地，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)張永清教授鑒定為葫蘆科栝樓屬植物栝樓TrichosantheskirilowiiMaxim.的雄株莖葉。曬干，粉碎成粗粉，備用。

2 提取與分離

取干燥的栝樓雄株莖葉粗粉30 kg，加入適量95%乙醇水溶液回流提取2 h，過濾，濾渣重復(fù)提取2次，提取時(shí)間分別為2、1 h，將濾液合并，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無醇味。將乙醇提取物以適量水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到各極性部位。其中乙酸乙酯部位(108 g)經(jīng)聚酰胺柱，以乙醇-水梯度洗脫，初步分離為11個組分(A1～A11)。A6(30%乙醇洗脫物)通過硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫，通過硅膠TLC指導(dǎo)合并具有相同斑點(diǎn)的流分，得組分A6-1～A6-17。其中A6-4、A6-9通過制備型高效液相色譜分離，分別得到化合物1(9.8 g)、7(18.5 mg)；A6-5、A6-6經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜及制備型高效液相色譜，分別得到化合物2(11.0 mg)、3(13.2 mg)、4(9.7 mg)、5(11.6 mg)和6(10.6 mg)。A5經(jīng)C18硅膠中壓柱色譜，以甲醇-水(10%～100%)梯度洗脫，其中12.5%甲醇洗脫組分經(jīng)制備型高效液相色譜分離純化，得到化合物8(8.6 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：ESI-MSm/z：147[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：12.43(1H，-COOH)，7.69(2H，s，H-2，H-6)，7.59(1H，d，J=16.0 Hz，H-7)，7.42(3H，s，H-3，H-4，H-5)，6.53(1H，d，J=16.0 Hz，H-8)，7.21(2H，m，H-5，H-6)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：134.7(C-1)，128.7(C-2)，129.4(C-3)，130.7(C-4)，129.4(C-5)，128.7(C-6)，144.3(C-7)，119.8(C-8)，168.0(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致，因此確定該化合物為反式桂皮酸(trans-cinnamic acid)，為首次從該植物中分離得到。

化合物2：白色片狀結(jié)晶；ESI-MSm/z：214[M+2Na]+，167[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.44(2H，s，H-2，H-6)，6.84(1H，d，J=8.8 Hz，H-5)，3.81(3H，s，3-OCH3)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：167.7(-COOH)，151.5(C-4)，147.7(C-3)，123.9(C-6)，122.2(C-1)，115.5(C-2)，113.2(C-5)，56.0(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道基本一致，因此確定該化合物為香草酸(vanillic acid)。

化合物3：白色針晶；ESI-MS m/z：195[M+H]+，193[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.49(1H，d，J=16.0 Hz，H-7)和δ6.37(1H，d，J=16.0 Hz，H-8)，提示該化合物結(jié)構(gòu)中存在1個反式雙鍵，δ7.08(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，6.79(1H，d，J=8.0Hz，H-5)，7.28(1H，s，H-2)，3.82(3H，s，3-OCH3)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：126.3(C-1)，111.6(C-2)，149.5(C-3)，148.4(C-4)，116.2(C-5)，123.3(C-6)，144.9(C-7)，116.0(C-8)，168.5(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，因此確定該化合物為反式阿魏酸(trans-ferulic acid)，為首次從該植物中分離得到。

化合物4：ESI-MSm/z：176[M+H]+，174[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：11.97(1H，br s，-NH)，8.35(1H，s，H-2)，8.18(1H，d，J=8.0 Hz，H-4)，7.48(1H，d，J=8.0 Hz，H-7)，7.21(2H，s，H-5，H-6)，4.93(1H，brs，-OH)，4.58(2H，s，H-9)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：133.8(C-2)，113.7(C-3)，112.6(C-4)，122.2(C-5)，123.3(C-6)，121.6(C-7)，194.9(C-8)，65.8(C-9)，125.9(C-3a)，136.8(C-7a)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，因此確定該化合物為3-羥基乙?；胚醄3-(hydroxyacetyl)indole]，為首次從該植物中分離得到。

化合物5：白色棱柱形結(jié)晶體；ESI-MSm/z：139[M+H]+，137[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.80(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，6.83(2H，d，J=8.4Hz，H-3，5)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：121.9(C-1)，132.0(C-2)，115.6(C-3)，162.1(C-4)，115.6(C-5)，132.0(C-6)，167.7(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，因此確定該化合物為對羥基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid)。

化合物6：ESI-MSm/z：165[M+H]+，163[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.52(2H，d，J=8.0 Hz，H-2，6)，6.79(2H，d，J=8.0 Hz，H-3，5)，為苯環(huán)上氫信號，提示苯環(huán)上取代基為對稱取代。7.49(1H，d，J=14.0 Hz，H-7)，6.29(1H，d，J=16.0 Hz，H-8)，提示該化合物結(jié)構(gòu)中存在雙鍵。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：115.9(C-1)，116.2(C-2，6)，130.5(C-3，5)，160.0(C-4)，125.8(C-7)，144.5(C-8)，168.4(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，因此確定該化合物為對羥基桂皮酸(p-hydroxycinnamic acid)，為首次從該植物中分離得到。

化合物7：淺褐色粉末；ESI-MSm/z：193[M+K]+，153[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.34(1H，brs，H-2)，7.29(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，6.78(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，以上1H-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]中原兒茶酸數(shù)據(jù)一致，因此確定該化合物為原兒茶酸(protocatechuic acid)，為首次從該植物中分離得到。

化合物8：白色結(jié)晶；ESI-MSm/z：123[M+H]+，121[M-H]-。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.76(2H，d，J=8.0 Hz，H-2，6)，6.93(2H，d，J=8.0Hz，H-3，5)。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：128.9(C-1)，132.6(C-2)，116.3(C-3)，163.9(C-4)，116.3(C-5)，132.6(C-6)，191.4(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，因此確定該化合物為對羥基苯甲醛(p-hydroxybenzalde-hyde)。

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PhenolicAcidinStemsandLeavesofMalePlantsinTrichosantheskirilowiiMaxim.

LIUFei1，F(xiàn)ANGLei2，LIJia1，ZHANGYongqing1*

(1.SchoolofMedicine，ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine，Jinan250355，China；2.ShandongAnalysisandTestCenter，Jinan250014，China)

Objective：To study the phenolic acid in stems and leaves of male plants inTrichosantheskirilowiiMaxim.and make full use of waste resources in production.Methods：The plant material was extracted with ethanol.The ethanol extract was suspended in a moderate amount of water，extracted successively with petroleum ether，ethyl acetate and n-butanol，and compounds were separated and purified by polyamide resin，Sephadex LH-20，C18 middle-pressure chromatography and semi-preparative high performance liquid chromatography.The chemical structures of the compounds were determined on the basis of the chemical properties and spectral analysis.Results：Eight phenolic acids were isolated from stems and leaves of maleT.Kirilowii，which were identified astrans-cinnamic acid(1)，vanillic acid(2)，trans-ferulic acid(3)，3-(hydroxyacetyl)indole(4)，p-hydroxybenzoic acid(5)，p-Hydroxycinnamic acid(6)，protocatechuic acid(7)，andp-hydroxybenzaldehyde(8).Conclusion：All compounds except compound5were isolated from this part for the first time，and compounds1，3，4，6，and7were isolated from this plant for the first time.It provides a reference for the comprehensive utilization of waste resources in production.

TrichosantheskirilowiiMaxim.；stems and leaves of male plants；phenolic acid；extraction and separation；structure identification

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.4.003

2015-09-09)

國家科技支撐計(jì)劃(2011BAI06B06)；山東省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2011GSF11904)；公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(201407002)

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張永清，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥資源及其質(zhì)量控制；E-mail：zyq622003@126.com