橙皮苷對D-氨基半乳糖小鼠急性肝損傷氧化應激的影響

龔子恒　(荊州中學高三6班，湖北 荊州 434000)

范瑞琴　(荊州市第二人民醫院肝病科，湖北 荊州 434000)

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橙皮苷對D-氨基半乳糖小鼠急性肝損傷氧化應激的影響

龔子恒(荊州中學高三6班，湖北 荊州 434000)

范瑞琴(荊州市第二人民醫院肝病科，湖北 荊州 434000)

[摘要]目的：研究橙皮苷對D-氨基半乳糖(D-GalN)小鼠急性肝損傷氧化應激的影響。方法：40只小鼠隨機分為正常組、模型組、橙皮苷低、高劑量組，各組分別灌胃給藥7d后，通過腹腔注射D-GalN誘導急性肝損傷模型，計算小鼠肝指數，測定血清中谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)以及肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛 (MDA)。結果：模型組與正常組比較小鼠肝指數顯著升高，血清ALT、AST及ALP水平顯著升高，肝組織勻漿中GSH-Px 、SOD活性顯著降低，MDA含量顯著升高。橙皮苷低、高劑量組與模型組比較，降低了D-GalN致肝損傷小鼠肝指數，降低血清中ALT、AST及ALP水平，提高肝組織勻漿中GSH-Px 、SOD活性，降低MDA含量。結論：橙皮苷對D-GalN誘導的小鼠急性肝損傷具有明顯保護作用，其機制可能與減輕小鼠肝損傷氧化應激反應有關。

[關鍵詞]橙皮苷；D-氨基半乳糖；肝損傷；氧化應激

橙皮苷是橙皮素與蕓香糖形成的二氫黃酮苷類化合物，廣泛存在于豆科、蕓香科、柑橘屬等植物之中，在柑橘類植物果皮內含量尤為豐富[1]。研究發現，橙皮苷具有抗菌、抗氧化、抗血栓形成及抗腫瘤等多種藥理學作用[2,3]。本實驗采用D-GalN致小鼠急性肝損傷模型，研討橙皮苷對急性肝損傷氧化應激的影響。

1材料與方法

1.1動物

昆明種雄性小鼠40只，體重18～20g，由武漢大學動物實驗中心提供。

1.2藥物

橙皮苷和D-氨基半乳糖(D-GalN)均購于Sigma公司；羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)購于上海國藥集團；谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等購于南京建成生物工程研究所。

1.3方法

1)分組與給藥將小鼠隨機分為4組，即正常組、模型組、橙皮苷低劑量組(150mg/kg)及高劑量組(300mg/kg)。正常組及模型組給予0.5%CMC-Na灌胃，橙皮苷低、高劑量組將橙皮苷溶于0.5%CMC-Na配成不同劑量的溶液灌胃，持續7天。末次給藥2h 后，除正常組外，剩余各組腹腔注射10%D-GalN生理鹽水溶液600mg/kg誘導小鼠急性肝損傷。末次處理后各組動物禁食24h，不禁水。

2)標本檢測指標小鼠摘眼球取血，靜置后離心分離血清，嚴格參照試劑盒說明檢測ALT、AST及ALP水平。小鼠處死后立即摘取肝臟，生理鹽水漂洗，吸干準確稱重，肝指數(%)=(肝臟重量/ 體重)×100%。取部分肝左葉組織制備10% 肝勻漿，檢測GSH-Px 、SOD及MDA水平。

1.4統計學分析

2結果

2.1橙皮苷對肝指數的影響

表1　橙皮苷對肝指數的影響

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01，下同。

模型組與正常組比較肝指數顯著升高(P<0.01)，而橙皮苷低、高劑量組與模型組比較肝指數顯著降低(P<0.01)，見表1。

2.2橙皮苷對血清ALT、AST及ALP的影響

模型組與對照組比較，ALT、AST及ALP水平顯著升高(P<0.01)。橙皮苷低、高劑量組與模型組比較，ALT、AST及ALP水平顯著降低(P<0.05或P<0.01)，其中高劑量組作用更明顯(P<0.01)，見表2。

表2　橙皮苷對血清ALT、AST及ALP的影響

2.3橙皮苷對肝組織中GSH-Px 、SOD及MDA的影響

模型組與正常組比較，肝組織勻漿中GSH-Px 、SOD的活性顯著降低(P<0.01)，MDA的含量顯著升高(P<0.01)；橙皮苷低、高劑量組與模型組比較，顯著升高肝組織中GSH-Px 、SOD活性，顯著降低MDA含量(P<0.01)，見表3。

表3　橙皮苷對肝組織中GSH-Px、SOD及MDA的影響

3討論

D-GalN導致小鼠急性肝損傷是一種經典的篩選保肝藥物的動物模型，與人類急性肝炎的病理學變化相似[4]。D-GalN作為一種磷酸尿嘧啶核苷酸干擾劑，通過競爭生成二磷酸尿苷半乳糖使磷酸尿苷耗竭，引起肝細胞代謝障礙，導致肝細胞凋亡或死亡；同時過量自由基的產生和膜脂過氧化反應，損傷細胞膜結構，改變膜的通透性，影響肝細胞功能，最終導致肝損傷[5]。本研究發現，模型組肝功能指標ALT、AST、ALP水平及肝指數顯著升高，表明肝損傷模型誘導成功；肝組織勻漿中GSH-Px 、SOD的活性顯著降低，MDA的含量顯著升高，提示模型組肝損傷與氧化應激反應有關。

橙皮苷給藥干預結果顯示，低、高劑量組與模型組相比，顯著降低了小鼠肝指數，降低ALT、AST及ALP水平，且有一定的劑量依賴關系，明顯改善肝組織病變程度，表明橙皮苷對D-GalN導致的急性肝損傷有一定的保護作用。研究還發現，肝組織勻漿中GSH-Px、SOD活性顯著升高，MDA含量顯著下降，機體內抗氧化體系包括酶和非酶系統兩類，酶系統中重要的抗氧化酶有GSH-Px和SOD等，能有效清除代謝過程中產生的自由基，MDA是膜脂過氧化的終產物，傷害細胞膜結構，其含量高低可以判斷肝細胞損傷程度及氧化應激水平[6]，提示橙皮苷對肝損傷的保護機制可能與提高肝臟抗氧化酶活性，清除氧自由基，防止過度的氧化應激反應有關。

本研究證實中藥有效成分橙皮苷對D-GalN誘導的急性肝損傷有較好的保護作用，其機制可能與減輕小鼠肝損傷氧化應激反應有關，此結果為開發有效的病毒性肝炎防治藥物奠定實驗基礎，但橙皮苷藥理學作用廣泛，是否還有其他保肝作用機理尚需進一步探究。

[參考文獻]

[1]李榮，胡成穆，姜輝，等.橙皮苷的提取及其抗炎活性研究[J].安徽醫科大學學報，2007，42(5)：546～549.

[2]Morand C, Dubray C, Milenkovic D, et al.Hesperidin contributes to the vascular protective effects of orange juice: a randomized crossover study in healthy volunteers[J].Am J Clin Nutr, 2011,93(1)：73～80.

[3]Pradeep K, Ko K C, Choi M H, et al.Protective effect of hesperidin, a citrus flavanoglycone, against γ-radiation-induced tissue damage in Sprague-Dawley rats[J].J Med Food, 2012, 15(5)：419～427.

[4]Keppler D，Lesch R，Reutter W，et al.Experimental hepatitis induced by D-galactosamine[J].Exp Mol Pathol，1968，9(2)：279～290.

[5]Decker K，Keppler D.Galactosamine hepatitis: key role of the nucleotide deficiency period in the pathogenesis of cell injury and cell death[J].Rev Physiol Biochem Pharmacol，1974，71：77～106.

[6]Zheng S，Sanada H，Dohi H，et al.Suppressive Effect of Modified Arabinoxylan from Rice Bran (MGN-3) on D-Galactosamine-Induced IL-18 Expression and Hepatitis in Rats[J].Biosci Biotechnol Biochem，2012，76(5)：942～946.

[編輯]方多

[引著格式]龔子恒，范瑞琴.橙皮苷對D-氨基半乳糖小鼠急性肝損傷氧化應激的影響[J].長江大學學報(自科版)，2015，12(36)： 98～99，107.

[中圖分類號]R285.5

[文獻標志碼]A

[文章編號]1673-1409(2015)36-0098-02

通信作者：

[作者簡介]龔子恒(1998-)，男，在讀學生；范瑞琴，fanruiqing79@163.com。

[收稿日期]2015-09-04 2015-08-25