艾葉揮發油抗真菌及抗帶狀皰疹病毒的實驗研究

吳生兵，曹　健，汪天明，周美啟

(1.安徽中醫藥大學　針灸基礎與技術安徽省重點實驗室，安徽 合肥　230038；

2.安徽中醫藥大學中西醫結合臨床學院微生物教研室，安徽 合肥　230038)

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艾葉揮發油抗真菌及抗帶狀皰疹病毒的實驗研究

吳生兵1，曹健1，汪天明2，周美啟1

(1.安徽中醫藥大學針灸基礎與技術安徽省重點實驗室，安徽 合肥230038；

2.安徽中醫藥大學中西醫結合臨床學院微生物教研室，安徽 合肥230038)

[摘要]目的觀察艾葉揮發油對絮狀表皮癬菌、白色念珠菌、新型隱球菌及帶狀皰疹病毒的抑殺作用。方法分別加入艾葉揮發油120 μL/mL，經過10～60 min 6個不同時間后取出，再放入培養箱中繼續培養24 h后觀察真菌生長情況；將帶狀皰疹病毒置于培養皿中，分為艾葉揮發油大劑量(120 μL/mL)、中劑量(80 μL/mL)、小劑量(40 μL/mL)3組，分別觀察艾葉揮發油作用24、48、72、96、120、144 h后，艾葉揮發油對帶狀皰疹細胞抑制作用。結果艾熏30 min可殺滅絮狀表皮癬菌，40 min可殺滅白色念珠菌，60 min可殺滅新型隱球菌；艾葉揮發油各濃度組均能明顯抑制帶狀皰疹的細胞病變，其中尤以大劑量組(120 μL/mL)效果最好。結論艾葉揮發油是熏灸抗外科感染的物質基礎，這可能是熏灸治療外科感染疾病的機制之一。

[關鍵詞]熏灸；艾葉揮發油；真菌；帶狀皰疹

熏灸是灸法的一種，是指將艾條一端或以艾絨置于特制的熏灸器內點燃后，以其艾煙熏灸患處的一種施灸方法。安徽中醫藥大學第一附屬醫院已故著名老中醫周德宜教授根據歷代相關文獻自1950年代始就著手熏灸技術的文獻整理和臨床研究，初步驗證了熏灸技術在腳癬、帶狀皰疹等外科淺表感染性疾病中的治療作用。本項目組在此研究工作基礎上，觀察了艾葉揮發油對白色念珠菌、絮狀表皮癬菌、新型隱球菌等真菌和帶狀皰疹病毒抑殺作用，以期揭示熏灸抗外科淺表感染性疾病的物質基礎。

1材料

1.1藥物及菌種艾葉購于安徽中醫藥大學第一附屬醫院；白色念珠菌、絮狀表皮癬菌、新型隱球菌、帶狀皰疹病毒由安徽中醫藥大學微生物教研室提供。

1.2儀器二氧化碳培養箱：日本三洋；倒置熒光顯微鏡：日本奧林巴斯。

2方法

2.1艾葉揮發油的制備[1]先將艾葉用蒸餾水浸泡，再按《中華人民共和國藥典》(2010年版)水蒸氣蒸餾法提取揮發油。

2.2艾葉揮發油抑殺真菌研究將絮狀表皮癬菌、白色念珠菌、新型隱球菌置于培養皿中，分別加入艾葉揮發油120 μL/mL，經過10～60 min 6個不同時間后取出，再放入培養箱中繼續培養24 h后觀察真菌生長情況。以肉眼觀察出現菌落用“+”表示真菌生長，無真菌生長用“-”表示。

2.3艾葉揮發油抗帶狀皰疹病毒研究將帶狀皰疹病毒置于培養皿中，分為艾葉揮發油大劑量(120 μL/mL)、中劑量(80 μL/mL)、小劑量(40 μL/mL)3組，分別觀察艾葉揮發油作用24、48、72、96、120、144 h后，艾葉揮發油對帶狀皰疹病毒的抑制作用。

3結果

3.1艾葉揮發油抑殺真菌研究艾葉揮發油作用30 min可殺滅絮狀表皮癬菌，40 min可殺滅白色念珠菌，60 min可殺滅新型隱球菌。結果表明，艾葉揮發油具有抑殺真菌作用。見表1。

表1　艾葉揮發油作用不同時間的抑殺真菌作用

注：“+”表示真菌生長，“-”表示無真菌生長。

3.2艾葉揮發油抗帶狀皰疹病毒研究艾葉揮發油大劑量在120 h內具有明顯的抑制帶狀皰疹病毒的作用，艾葉揮發油中劑量在96 h內具有明顯的抑制帶狀皰疹病毒的作用，而艾葉揮發油小劑量在72 h內具有明顯的抑制帶狀皰疹病毒的作用。結果提示艾葉揮發油具有抗帶狀皰疹病毒作用，且劑量越大抑制作用越持久。見表2。

表2　艾葉揮發油抗帶狀皰疹病毒作用

注：+：示細胞病變為25%以下，：示細胞病變>25%，≤50%，：示細胞病變>50%，≤75%，-：示無細胞病變。

4討論

既往研究表明，艾灸具有抗真菌及抗病毒作用。董艷等[2]采用艾灸熏治腳氣，取得良好療效，認為運用灸法治療可燥濕、通絡，祛邪外出。馬仁智等[3]認為，灰指甲的病因病機與濕邪相關，治濕宜燥，艾葉苦辛溫燥，艾熏能促進甲下及其周圍組織的血液循環，改善和提高局部營養，促進指甲的新陳代謝，艾火高溫更是能直接殺滅不耐高熱的真菌，其采用熏灸治療灰指甲，獲滿意療效。宋小鴿、唐照亮等[4-5]觀察了艾灸對感染流行性出血熱病毒(epidemic hemorrhagic fever virus，EHFV)大鼠免疫功能及抗病毒作用的影響，研究結果表明，艾灸具有增強巨噬細胞對EHFV抗原的吞噬功能，對EHFV大鼠具有促進增強紅細胞免疫黏附活性和產生抗體清除EHFV感染的作用，提示艾灸具有溫陽通絡、扶正祛邪，增強機體細胞和體液免疫功能的作用。熊光明等[6]采用艾灸神闕結合西藥治療寒濕型小兒輪狀病毒腸炎，并與單純西藥治療對照，結果表明雖然兩組總有效率相當，但加用艾灸治療顯效率優于單純西藥治療組(P<0.05)，認為艾灸具有通經活絡、溫中散寒、益肝腎、健脾止瀉、調氣活血的功效，可有效促進人體的神經體液調節作用，提高機體免疫力，從而改善胃腸功能活動，使腹瀉癥狀得到緩解并治愈。這些研究表明，艾灸能增強機體細胞和體液免疫功能的作用，具有抗真菌及病毒的作用。但在研究中并未區分艾灸的煙熏灸及艾葉燃燒產生的溫熱灸的各自作用機制。

近年來，越來越多研究者開始逐漸認識到艾葉揮發油在艾灸中所發揮的作用。沈津湛等[7]認為，艾煙具有燥濕殺菌、通經消瘀止痛之功效，能有效治療帶狀皰疹，并具有病程短, 較少留有后遺神經痛的優點。孫捷等[8]認為，通過藥煙的溫熱，透皮吸收增加，藥物直達病所，起到殺菌消炎止癢、改善微循環的作用；中藥燃燒后形成的煙油，起到保護創面，改善局部環境，并增加藥物與體表的接觸時間，達到促進血供，改善代謝，有利于病變吸收的效果，從而有利于促進皮膚屏障的恢復。

本研究在既往基礎上，首次探索性發現煙熏對真菌及病毒具有明顯的抑殺作用，認為艾葉揮發油在治療淺表感染性疾病中發揮了作用，艾葉揮發油可能是熏灸技術治療外科淺表感染性疾病的物質基礎。為了排除艾灸溫熱灸的作用，觀察單純艾葉揮發油抗真菌及病毒的作用，筆者設計此次實驗研究。本次研究結果表明，艾葉揮發油作用30 min可殺滅絮狀表皮癬菌，作用40 min可殺滅白色念珠菌，作用60 min可殺滅新型隱球菌，艾葉揮發油對真菌抑殺作用明顯。艾葉揮發油各濃度均能明顯抑制帶狀皰疹的細胞病變，其中尤以大劑量(120 μL/mL)效果最好，提示艾葉揮發油具有抗病毒作用。據此，筆者認為艾葉揮發油是熏灸抗外科感染的物質基礎，這可能是熏灸治療外科感染疾病的機制之一。而艾葉揮發油的作用機制可能是增強了機體細胞和體液免疫功能，具體機制將有待于進一步研究闡釋。

參考文獻:

[1]劉先華,周安,劉碧山,等.艾葉揮發油體內外抑菌作用的實驗研究[J].中國中醫藥信息雜志，2006,13(8):25-26.

[2]董艷，李東方，宋超，等. 艾灸可治腳氣[J]. 新中醫，2009，41(3)：32.

[3]馬仁智，孟云鳳.艾灸治療灰指甲[J].中國民間療法，1996(1)：32.

[4]宋小鴿，唐照亮，產美英，等.艾灸對感染流行性出血熱病毒大鼠免疫功能及抗病毒作用的影響[J].針刺研究，1992(4)：267-269.

[5]唐照亮，宋小鴿，劉冰，等.艾灸對感染流行性出血熱病毒大鼠體液因素的影響[J]. 針刺研究，1992(4)：276-279.

[6]熊光明，孫彥.艾灸神闕結合西藥治療寒濕型小兒輪狀病毒腸炎臨床觀察[J]. 中國鄉村醫藥雜志，2013，20(24)：52-53.

[7]沈津湛，龔云. 爐式熏灸器治療帶狀皰疹方法及機制探討[J]. 針灸臨床雜志，2000，16(3)：35-36.

[8]孫捷，劉明珠. 中藥藥煙熏灸治療局限性慢性濕疹臨床研究[J].中醫學報，2015，30(10)：1540.

收稿日期：(2015-10-31；編輯：曹健)

通信作者：周美啟，meiqizhou@163.com

作者簡介：吳生兵(1977-)，男，碩士，助理研究員

基金項目：第二批安徽省科普產品與科普創作示范團隊項目；安徽高校科研平臺創新團隊項目

[中圖分類號]R245.81[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2015.06.022