1株貓葡萄球菌的分離與初步鑒定

盧曉宇,李軍朝,許夢(mèng)怡,王雅麗,沈安寧,徐司雨,王彥紅,3

(1.揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院,江蘇揚(yáng)州225009;2.江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心,江蘇揚(yáng)州225009;3.江蘇省人獸共患病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇揚(yáng)州225009)

1株貓葡萄球菌的分離與初步鑒定

盧曉宇1,2,李軍朝1,2,許夢(mèng)怡1,2,王雅麗1,2,沈安寧1,2,徐司雨1,2,王彥紅1,2,3

(1.揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院,江蘇揚(yáng)州225009;2.江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心,江蘇揚(yáng)州225009;3.江蘇省人獸共患病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇揚(yáng)州225009)

葡萄球菌是醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)臨床上常見的病原菌,為革蘭陽(yáng)性菌,廣泛分布于自然界,如水、空氣、土壤、飼料和一些物品中,絕大多數(shù)為人體表常在菌,少數(shù)菌對(duì)人和動(dòng)物有一定的致病性,是一種重要的人畜共患病原菌,痰、血、分泌物和傷口等是致病性葡萄球菌的主要標(biāo)本來(lái)源[1],近日在貓鼻腔中發(fā)現(xiàn)1種貓葡萄球菌,國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)罕見報(bào)道,將其生物學(xué)特性進(jìn)行的試驗(yàn),報(bào)告如下.

1　材料與方法

1.1細(xì)菌分離一只兩月齡暹羅貓出現(xiàn)咳嗽、食欲不振,治療一周后癥狀減輕,但鼻腔中持續(xù)出現(xiàn)黏性分泌物.用無(wú)菌棉簽拭子取貓鼻腔中的分泌物接種于含5%綿羊血營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板.將該血平板放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,觀察菌落形態(tài)特征.挑取單個(gè)菌落分別接種于血平板上和普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板進(jìn)行純化.取純化好的分離菌,挑取菌落,涂片固定,進(jìn)行常規(guī)革蘭染色,觀察細(xì)菌的形態(tài)及染色特征.

1.2生化試驗(yàn)將純化的菌株無(wú)菌接種于蔗糖、甘露醇、甘露糖、乳糖、果糖、木糖醇、麥芽糖、硝酸鹽還原、尿素、蕈糖共10種葡萄球菌細(xì)菌生化管(購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司),置于37℃培養(yǎng)24～48 h.

1.316SrDNA基因序列根據(jù)文獻(xiàn)方法[2]制備細(xì)菌基因組DNA模板,按照16S rDNA Bacterial Identification PCR Kit方法操作進(jìn)行PCR擴(kuò)增,經(jīng)電泳鑒定后,切膠測(cè)序;將測(cè)定的序列在NCBI網(wǎng)站(http://www.ncbi.nlm.gov/BLAST)進(jìn)行BLAST搜索比對(duì),鑒定細(xì)菌種屬.

1.4藥敏試驗(yàn)采用世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的Kirby-Bauer法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)[4],判定標(biāo)準(zhǔn)參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS,2009)公布的標(biāo)準(zhǔn).藥敏紙片(購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司)有:痢特靈(300μg/片)、復(fù)方新諾明(23.75 μg/片)、丁胺卡那霉素(30 μg/片)、美洛西林(75 μg/片)、鏈霉素(10 μg/片)、慶大霉素(10 μg/片)、菌必治(30 μg/片)、諾氟沙星(10 μg/片)、大觀霉素(100 μg/片)、新生霉素(30 μg/片)、萬(wàn)古霉素(30 μg/片)、氟苯尼考(30 μg/片)等14種.

2　結(jié)果

2.1細(xì)菌分離在無(wú)菌操作下從病料中分離出細(xì)菌接種于血平板,在37℃培養(yǎng)24 h后,菌落直徑能達(dá)到2～3 mm,菌落圓形凸起,光滑不透明且不溶血.細(xì)菌在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好.鏡檢可見細(xì)菌排列呈葡萄串狀,革蘭染色陽(yáng)性.

2.2生化試驗(yàn)分離菌株能與尿素反應(yīng),不能還原硝酸鹽,也不能分解麥芽糖、乳糖、甘露糖、甘露醇、果糖、蔗糖、蕈糖.

2.361SrDNA基因序列分離菌的16S rDNA經(jīng)PCR擴(kuò)增,電泳后出現(xiàn)500 bp左右的目的條帶,切膠測(cè)序后,經(jīng)查詢比對(duì)與已上傳的貓葡萄球(序列號(hào):D83365.1)99%同源性,認(rèn)為分離菌為貓葡萄球菌.

2.4藥敏試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,分離菌株對(duì)氟苯尼考和復(fù)方新諾明耐藥;對(duì)鏈霉素、羅美沙星、淋必治、菌必治、萬(wàn)古霉素、新生霉素等敏感.

3　討論

3.1從送檢病貓鼻腔黏液分離出1株細(xì)菌,從細(xì)菌的生長(zhǎng)特性和形態(tài)特點(diǎn)初步判定其為葡萄球菌,然而分離菌株的生化結(jié)果無(wú)法定型,借助16S rDNA PCR技術(shù),將分離菌PCR結(jié)果上傳到NCBI網(wǎng)站(http:// www.ncbi.nlm.gov/)的數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行查詢結(jié)果為貓葡萄球菌.該菌在1989年首次報(bào)道[3],該菌是一種微厭氧的革蘭陽(yáng)性球菌,在37℃培養(yǎng)24 h后,菌落直徑能達(dá)到2～3 mm,菌落圓形凸起,光滑不透明且不溶血.貓是現(xiàn)代社會(huì)人們的寵物,國(guó)外報(bào)道由貓咬傷后引起的各種感染較多[3],另外,2012年在馬的鼻腔中也發(fā)現(xiàn)了貓葡萄球菌的存在[4],所以對(duì)貓葡萄球菌的相關(guān)研究不僅對(duì)貓、馬等動(dòng)物有重要的臨床意義,對(duì)人類同樣有很重要的臨床意義.

3.2由藥敏試驗(yàn)結(jié)果可知,分離菌株對(duì)羅美沙星、鏈霉素、萬(wàn)古霉素、丁胺卡那霉素、新生霉素等藥物敏感;相關(guān)研究表明,貓葡萄球菌對(duì)很多藥物都敏感[4-5].

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[2]王彥紅,劉文博,邵慧君,等.PCR方法診斷豬瘟病毒和豬丹毒桿菌混合感染[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2011,09:113-116.

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S829.3

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0529-6005(2016)06-0081-01

2015-04-16

江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目;江蘇省人獸共患病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室資助項(xiàng)目(R1406);揚(yáng)州大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃基金

盧曉宇(1995-),女,本科生,就讀于獸醫(yī)專業(yè)學(xué)習(xí),E-mail:1055874278@qq.com

王彥紅,E-mail:wyh7405@163.com