鼠胚實驗在新建體外受精胚胎培養室質量控制中的作用研究

潘暉　夏燕　張玲

鼠胚實驗在新建體外受精胚胎培養室質量控制中的作用研究

潘暉夏燕張玲

目的 研究鼠胚實驗在新建體外受精胚胎培養室質量控制中的作用。方法 在實驗的過程中將小鼠分為體內受精組與體外受精組，對其培養狀況進行記錄和統計分析。結果 體內受精組的受精率高于體外受精組（P＜0.05）。體內受精組與體外受精組的囊胚形成率對比，差異不具有統計學意義（P＞0.05）。結論 鼠胚實驗可以實現對新建胚胎培養室的培養體系進行評估。

鼠胚實驗；培養室；質量控制

歷經數十年的發展我國輔助生殖技術日益規范化，目前能夠開展該項治療的醫療機構已經達到300多家，每年能夠為約20萬患者提供輔助生殖支持[1］。而在這一過程中胚胎培養室則被稱為人類胚胎的加工廠，是實現輔助生殖的重要環節。

因此，建設高標準的胚胎培養室是至關重要的，而新建胚胎培養室的各項環境和設備指標是否能夠達到有效輔助胚胎體外生長的要求，就成為新建體外受精胚胎培養室必須解決的問題[2］。本文以本院新建的胚胎培養實驗室鼠胚實驗為依據，對鼠胚實驗（MEA）方法在實驗室質量控制中的作用進行如下報道。

1 材料與方法

1.1 材料

研究選取約4～6周齡以上的昆明白雌鼠，體重25～28 g；8周齡以上的昆明白雄鼠，體重30～35 g。實驗小鼠的飼養溫度21℃～25℃，相對濕度30%～50%；實驗小鼠保證水供應，飼料夜間供應。使用PMSG和HCG均為：獸用，寧波三生藥業產，均為1 000 IU粉劑/支。用0.9%生理鹽水10 ml溶解，用1 ml注射器每支分裝1 ml在-20℃冷凍保存。使用前恢復至室溫后進行注射。

1.2方法

在實驗的過程中將小鼠分為體內受精組與體外受精組。體內受精組：分7批次（5只為一批次）對健康的雌性小鼠在統一的時間內（18：00）進行腹腔PMSG 10 IU（0.1 m l）注射；注射48 h后進行HCG 10 IU（0.1 ml）注射。然后按照雄鼠：雌鼠為1：2的比例將雌雄小鼠進行合籠。在合籠完成16 h以后將雌鼠單獨培養，隔日晨10：00利用后頸椎脫臼法讓雌鼠死亡，并在無菌環境下取出其輸卵管，將其置于培養皿中，利用一次性注射器在輸卵管上制造切口并通過輕擠壓方式釋放出受精卵[3］。對獲取的受精卵進行洗滌后置于卵裂培養皿中，以10個受精卵為一觀察液滴，將其放置到環境適宜的培養箱中。

體外受精組：分為7個批次采用上述體內受精組方法注射雌鼠，HCG注射后隔日早10：00同法讓雌鼠死亡，同法處理輸卵管，通過輕擠壓方式釋放出卵冠丘復合體，對獲取的卵冠丘復合體進行洗滌后置于受精皿中，以15個受精卵為一觀察單元，將其放置到環境適宜的培養箱中[4］。隨后采集雄鼠的精液利用集中受精法進行體外受精。

1.3觀察指標

本次實驗中觀察的指標包括：2-細胞率、受精率、囊胚形成率等。

1.4統計學方法

本次研究采用了SPSS19.0進行分析，計量資料用（均數±標準差）表示，采用t檢驗，計數資料用百分比表示，采用χ2檢驗，P＜0.05，差異有統計學意義。

2　結果

在本院新建設的培養室環境下，開展了7個批次的昆明白小鼠體內受精，在總共35個周期內一共獲卵1 136枚，其中2-細胞數1 058個。同時開展了7個批次的昆明白小鼠體外受精，在總共35個周期內一共獲卵1 486枚，其中1 254枚受精。通過對實驗數據的記錄和分析可知，體內受精組的2-細胞率為（93.07±1.25）%，體外受精組的受精率為（85.21±2.66）%；由此可知體內受精組的受精率高于體外受精組（P＜0.05）。體內受精組與體外受精組的囊胚形成率分別為（90.22±2.01）%和（91.02±1.88）%，兩組的囊胚率對比，差異無統計學意義（P＞0.05）。

3　討論

繁衍后代是絕大多數生物在其生命歷程中都需要經歷的重要一環，體外受精胚胎培養室在輔助人類生育上發揮著“加工廠”的作用，而這個“加工廠”的培養室質量控制則成為學術界關注的重點[5-6］。

通過對實驗數據的記錄和分析可知，在本院新建設的培養室環境下，本實驗的結果顯示采用兩種方法的鼠胚囊胚率均大于80%，研究報道囊胚形成率達到 80%即可以做為胚胎實驗室培養體系符合要求的標準[7］，且本研究結果顯示采用兩種方法的質量控制結果沒有差異，因此，以上兩種方法均可以用于胚胎實驗室的質量控制。

但筆者認為體外授精囊胚培養法更適宜用于新建實驗室的質量控制。其原因在于：已有的研究結果顯示體外受精比體內受精的鼠胚胎對胚胎發育的影響因素更為敏感，更有利于檢測出不利因素對胚胎發育的影響[8］，發現體外培養體系中存在的問題；也是對實驗操作者技術能力的檢驗，可以培訓和提高實驗室技術人員的技術能力。

鼠胚實驗是目前較為常用的胚胎培養實驗室質量控制檢測方法之一。很多因素會影響到胚胎的質量和囊胚率，故只有盡可能控制那些影響胚胎生長發育的胚胎培養體系中的可控因素，胚胎培養實驗室的整個培養體系才能為胚胎的生長發育提供相對適宜的條件，才可能培養出生長發育潛能好的胚胎。

[1]王輝田，李濤，黎偉豪，等.鼠胚實驗在新建體外受精胚胎培養室質量控制中的作用[J］.實用婦產科雜志，2015，31（2）：115-119.

[2]王輝田，李濤，宏蘋蘋，等.新建IVF實驗室中揮發性有機化合物的濃度變化及其對鼠胚體外發育的影響[J］.生殖與避孕，2016，36（1）：15-20.

[3]胡衛華，侯文文，吳滿意，等.鼠胚實驗在新建IVF胚胎培養室中的質控研究[J］.皖南醫學院學報，2013，32（3）：181-183.

[4]蘇亮，羅平，羅江霞.不同來源小鼠胚胎培養在輔助生殖實驗室質量控制中的應用[J］.華夏醫學，2012，25（1）：16-18.

[5]王巍，邱卓琳，馬海蘭，等.小鼠體外受精胚胎培養在新建IVF實驗室質量控制中的作用[J］.華夏醫學，2011，24（6）：649-652.

[6]劉云，李峰，陳小芳，等.小鼠胚胎培養在新建體外受精實驗室的質量控制驗證[J］.中國婦幼保健，2014，29（26）：4300-4301.

[7]李小平，郝朝亮，高庭，等.鼠胚實驗在新建胚胎培養實驗室質量控制中的作用[J］.中南醫學科學雜志，2013，41（1）：21-23.

[8]高亞可，杜姍姍.新建輔助生殖實驗室的鼠胚實驗報告[J］.廣西醫學，2016，38（3）：304-307.

The Effect of Mouse Embryo Test on the Quality Control of New ly Built in Vitro Fertilization Embryo Culture Room

P
AN Hui XIA Yan ZHANG Ling Assisted Reproduction Center， Urumqi Maternal and Child Health Care Hospital， Urumqi Xinjiang 830002， China

Ob jective To study the effect of mouse embryo test on the quality control of new ly constructed in vitro fertilization and embryo culture room. Method s In the course of the experiment， the mice were divided into the in vivo fertilization group and the in vitro fertilization group， recording and statistical analysis of their training status. Resu lts The fertilization rate of in vivo fertilization group was higher than in in vitro fertilization group （P＜0.05）. In vivo fertilization group and in vitro fertilization group blastocyst formation rate contrast， the difference is not statistically significant （P＞0.05）. Conclusion The experiment of mouse embryo can be carried out to evaluate the culture system of the new embryo culture room.

Mouse embryo experiment， Culture room， Quality control

R-33

A

1674-9308（2016）27-0012-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.27.008

新疆烏魯木齊市（自治區）婦幼保健院輔助生殖中心，新疆 烏魯木齊 830002