燙傷寧制劑質量標準的研究

O 葉繪晟 柳賢福 龔志強（廣西中醫藥大學賽恩斯新醫藥學院 廣西 530222）

燙傷寧制劑質量標準的研究

O 葉繪晟 柳賢福 龔志強
（廣西中醫藥大學賽恩斯新醫藥學院 廣西 530222）

建立燙傷寧制劑的質量控制標準。方法：薄層色譜法對燙傷寧制劑中的虎進行定性鑒別；采用高效液相色譜方法測定虎杖中大黃素含量。色譜柱：Hypersil ODS C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相為甲醇-0.2%磷酸溶液（85:15），檢測波長為254nm，流速1.0mL?min-1，柱溫30℃。結果：薄層色譜斑點清晰，陰性對照無干擾；大黃素進樣量在0.14～2.24μg之間呈良好的線性關系(r=0.9999)，平均加樣回收率為99.73%，RSD為1.59%（n=9）。結論：所建方法簡單、穩定、重復性好，可用于燙傷寧制劑的質量控制。

燙傷寧；虎杖；大黃素；薄層色譜法；高效液相色譜法

燙傷寧由地黃、紅花、虎杖、當歸、地榆、麥冬、陳皮、冰片組成的中藥復方制劑，以食用植物油為基質，具有清涼、消炎、抗菌、止痛、生肌作用，對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌等多種細菌均有抑制作用，主治燙傷、燒傷等，在臨床上可替代常用外科創面用藥。目前對燙傷寧的研究主要體現在其鎮痛抗炎作用等藥理作用及無菌驗證檢查方面的研究，筆者尚未見到燙傷寧質量控制方面的相關報道。因此，筆者在本實驗中建立燙傷寧制劑的質量控制方法。

1.儀器與試藥

(1)儀器Agilent1200高效液相色譜儀(DAD檢測器，美國安捷倫公司)。SB3200T超聲波清洗儀(上海能信超聲有限公司)，紫外-可見分光光度計(美國安捷倫公司)，Millipore Simplicity-185超純水儀(美國密里博公司)，BP211D電子分析天平(德國賽多利斯），硅膠G板(天津博納艾杰爾科技有限公司)。

(2)試藥 大黃素(中國食品藥品檢定研究院，批號：110756-200110，供含量測定)。甲醇（美國Fisher科學世界公司，批號：A452-4），其余試劑為分析純（來源：北京化工廠）。燙傷寧制劑由廣西中醫藥大學附屬瑞康醫院制劑中心提供，生產批號(20150505、20120511、20150519)。

2.方法與結果

(1)虎杖的薄層鑒別

量取燙傷寧10ml于錐形瓶中，加10ml氫氧化鈉萃取，振搖混勻，靜置分層，取氫氧化鈉層用鹽酸調pH值2～3，用氯仿萃取2次，每次5ml，合并萃取液，揮干，殘渣加甲醇1ml溶解，即得供試品溶液，備用。取虎杖對照藥材1g加10ml花生油按照處方的工藝制成油劑，再以供試品制備方法制成虎杖對照藥材溶液，備用。

取大黃素對照品加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。參照薄層色譜法（中國藥典2015年版一部附錄ⅥB法，以下同）試驗，吸取上述溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯:乙酸乙酯:甲醇:甲酸:水=3:1:0．2:0．5:0．5為展開劑，在紫外365nm波長下檢視，供試品在與對照藥材相應的色譜位置上，顯相同的藍色熒光點，而陰性溶液處無此藍色熒光點（圖1）。

圖1 虎杖的TLC圖1～3. 供試品 4. 虎杖對照藥材 5.陰性對照Fig.1 TLC chromatograms of Polygonum cuspidatum 1～3.sample 4.standard 5. negative sample

(2)大黃素的含量測定

①標準溶液的制備。取105℃干燥至恒重的大黃素對照品3．50mg，置25mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成大黃素標準貯備液（0．14mg/mL）。

②樣品溶液制備。精密量取燙傷寧10．0ml于錐形瓶中，精密加入10．0ml甲醇超聲提取40分鐘，取甲醇層，蒸干，用甲醇溶解，定容于10ml容量瓶，用0．45μm的濾孔濾膜過濾，取10μL注入液相色譜儀測定，即得。

③采用Hypersil。C18柱（250mm×4．6mm，5μm）；流動相為甲醇-0．2%磷酸溶液（85:15)；檢測波長254nm；流速為1．0mL·min-1。柱溫30℃；進樣量10μL，大黃素的保留時間為6．0min，與相鄰峰的分離度＞1．5。結果見圖2。

圖2 a大黃素對照品、b虎杖對照藥材、c樣品溶液、d陰性對照Fig.2 HPLC chromatograms of standard Emodin(a)、Polygonum cuspidatum(b)、Sample(c)、Negative sample(d)

④線性關系考察。精密吸取“2．2”項對照品溶液分別進樣1μL、3μL、6μL、10μL，12μL、16μL測定，以峰面積(Y)為縱坐標，進樣量(X)為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：Y＝1910．3X-3．621 R2=0．999 ，表明大黃素進樣量在 0．14-2．24μg之間與峰面積呈良好的線性關系。

⑤精密度實驗。精密吸取2．2．1項對照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，連續進樣6次，結果測得大黃素峰面積RSD值為0．82%，表明所用液相色譜儀的精密度較好。

⑥重復性實驗。取同一批號樣品（20150519）重復測定6次，測得大黃素含量，其RSD值為1．82%。結果表明，用上述方法測定大黃素的含量，重復性好。

⑦穩定性實驗。取同一批號樣品（20150519）分別在0、2、6、10、16、24h精密吸取樣溶液10μL，注入液相色譜儀，結果測得樣品中大黃素峰面積的RSD值為1．47%，表明供試品溶液在24h內保持穩定。

⑧樣品測定。精密吸取按2．2．2項下方法制備好的三個批次樣品10μL，注入液相色譜儀測定。用標準曲線法計算，實驗結果見表1。

表1 樣品大黃素含量測定結果（n=3）

Tab2 The results of sample determinations (n=3)

⑨加樣回收率實驗。精密吸取已知含量的樣品（20150519）5．0mL，精密加入大黃素對照品0．42，0．56，0．70mg（加入量為樣品含量的80%、100%和120%）。按“2．2．2”項樣品制備方法，各平行制備3份，分別測定含量，計算加樣回收率（大黃素含量以0．1082mg·mL-1計），結果見表2。實驗結果可知，大黃素的平均加樣回收率為99．73% (RSD=1．59%)。

3.討論

薄層鑒別制備供試品溶液時，筆者曾采用乙醇、甲醇、三氯甲烷萃取法。但試驗中發現萃取液濃縮后仍有植物油，難以進一步精制，提取特征成分。主要原因可能是虎杖中大黃素等成分含有酚羥基，因此可用酸堿處理后，再用三氯甲烷提取酸性水溶液，即可得到供試品溶液。

虎杖為君藥，大黃素為其主要活性成分之一，因此以測定大黃素的含量作為其質量標準。本實驗中筆者采用全波長掃描發現大黃素在254nm處具有最大吸收峰，同時考察了流動相結果發現使用甲醇-0．2%磷酸系統得到的色譜峰型較好、分離度達到要求。從樣品測定結果可以看出三批樣品測得含量差異不大，說明該制劑生產相對穩定。

本文所建立了的方法，簡單、方便、實用，對該制劑制定相關的質量標準具有重要意義。

[1]黃蓓.燙傷寧的無菌檢查方法驗證[J].中國藥業,2010,19(17):32-33.

[2]黃德武,嚴尚學,陳伯鈞等.燙傷寧鎮痛抗炎作用的實驗研究[J].實驗動物科學與管理,1999,16(2):21-23.

[3]王霞,肖海濤,齊曉嵐等.虎杖及其成方制劑微乳薄層色譜研究[J].貴陽醫學院學報,2011,36(3):238-241.

A Study on Quality of Tangshangning Preparation

Ye Huisheng, Liu Xianfu, Gong Zhiqiang
（Faculty of Chinese Medical Science Guangxi University of Chinese Medicine, Guangxi, 530222)

OBJECTIVE: To establish the standard for the quality control of Tangshangning Preparation. Method: The identifi cation of Polygonum cuspidatum was carried out by TLC. The content of emodin in Polygonum cuspidatum by HPLC. The samples were separated on the Hypersil ODS C18 (250mm ×4.6mm，5μm) colunm which was eluted with methanol-0.2% phosphoric acid solution (85:15) with detective wavelength at 254nm and fl ow rate at 1mL·min-1，column temperature at 30℃. Results: The TLC spots were highly clear without the interference of negative control and were reproductive. The method had good linear relationship within the range of 0.14～2.24μg（r=0.9999）for quercetin. The average recovery rate was 99.73% with RSD of 1.59%. Conclusion: The method is simple，rapid and reliable which can be used for the quality control of the Tangshangning Preparation.

Tangshangning Preparation；Polygonum cuspidatum；Emodin；TLC；HPLC

表2 大黃素加樣回收實驗結果（n=9）Tab 1The results of recovery determination (n=9)

R

A

葉繪晟（1977～），男，廣西中醫藥大學賽恩斯新醫藥學院，研究方向：中藥學研究。