決明子水煎劑對大鼠視網膜結構的影響

文│王琳 吳宗梅（安徽省鳳陽縣畜牧獸醫局）李升和（安徽科技學院）

決明子水煎劑對大鼠視網膜結構的影響

文│王琳 吳宗梅（安徽省鳳陽縣畜牧獸醫局）李升和（安徽科技學院）

決明子（Semen Cassiae）為豆科植物決明的干燥成熟種子，亦稱草決明。決明子主要含有大黃素、大黃酸、決明子素等化學物質，具有護肝、明目、降脂、降血壓、利尿、抗血小板聚集等作用，用于目赤色痛、羞明多淚。中醫認為，決明子性寒，味甘、苦，歸肝、大腸經，具“清肝明目，潤腸通便”等功效，始載于《神農本草經》，列為上品。決明子無毒性，無副作用，民間常用生決明子煎服，或置鍋中炒至微有香味，作為沖泡飲料服用或與其他藥配伍，而今，臨床主要應用于降血壓、降血脂、保肝、導瀉、抗菌、抗血小板凝集等，其中對高血壓、高膽固醇、習慣性便秘等療效較好。近年來，國內有學者對決明子保肝作用機制進行研究，決明子乙醇提取物對D-氨基半乳糖所致大鼠急性肝損傷具有保護作用。有研究表明，決明子對實驗性大鼠糖尿病腎病具有保護作用。

目前未見到有關決明子水煎劑對動物視網膜組織結構功能影響的報道，本研究以大鼠為研究對象，采用HE染色方法，觀察CCl4（四氯化碳）在致大鼠肝損傷的同時是否對視網膜具有損傷作用，同時觀察決明子水煎劑對大鼠視網膜的組織結構及其損傷是否具有保護作用，以期為決明子對眼病防治方面提供一定的形態學資料理論基礎。

一、材料與方法

1.實驗材料。

（1）實驗動物。48只清潔級SD大鼠，雌雄各半，購自南京市江寧區青龍山實驗動物繁殖場。

（2）實驗飼料。“湯山龍泉牌”實驗鼠顆粒飼料，購自南京市江寧區青龍山實驗動物繁殖場。飼料營養水平：水分≤10%，粗蛋白≥1 8%，粗脂肪≥4%，粗纖維≥5%，粗灰分≤8%，鈣1.0%～1.8%，磷0.6%～1.2%。

（3）實驗藥品與試劑。決明子，購于鳳陽縣華佗大藥房；CCl4（天津市化學試劑廠）；蘇木精、伊紅、乙醇、二甲苯等均為（FMP）國藥集團化學試劑有限公司。

（4）決明子水煎液的制備。取干燥決明子160克，加水浸泡半小時，再加水至2000毫升，移至電爐上開始煎煮至沸騰，邊攪拌邊煎煮大約半小時后過濾，再將濾渣加水1000毫升煎煮約1.5小時后過濾，如此反復一次，最后合并濾液并濃縮至2000毫升，制得每升含生藥80克的決明子水煎液。

（5）主要儀器設備。FRI-IS-25型全膜終端獨立通氣籠盒（IVC）；LDZX-50FBS型立式壓力蒸汽滅菌器；切片機；CH30型顯微顯微攝影系統。

2.實驗方法。

（1）動物分組及給藥方法。48只清潔級SD大鼠，體重180～240克（約60日齡），適應性飼養1周后隨機分為正常對照組、模型對照組、決明子Ⅰ組和決明子Ⅱ組，未注射決明子Ⅰ組，未注射CCl4決明子Ⅱ組，每組8只且雌雄各半。正常對照組和模型對照組自由飲用蒸餾水，決明子Ⅰ組、未注射CCl4決明子Ⅰ組和決明子Ⅱ組、未注射CCl4決明子Ⅱ組分別自由飲用濃度為40克/升和80克/升的決明子水煎液，連用2周。

（2）動物飼養。大鼠飼養實驗在安徽科技學院動物科學學院實驗動物房進行，大鼠的飼養管理及飼養環境、用具和IVC的清洗、消毒、滅菌均嚴格按照IVC標準化操作規范進行。使用刨花作為大鼠墊料，墊料首先在陽光下曬干，然后紫外燈照射3～4小時，再裝入自制的布袋中121℃高溫蒸汽滅菌20分鐘，最后置入干燥箱內60℃鼓風干燥后備用。依據大鼠活動規律及日需要飼料量定時加料，環境溫度24～28℃，濕度50%～65%，光照12小時。

（3）樣品采集與處理。實驗結束時，模型對照組、決明子Ⅰ組和決明子Ⅱ組腹腔注射CCl4（2.0毫升/千克體重），正常對照組、未注射 CCl4決明子Ⅰ組，未注射CCl4決明子Ⅱ組腹腔注射等體積生理鹽水，24小時后逐只稱重，10%水合氯醛（300～400毫克/千克體重）腹腔麻醉，取大鼠眼球，取眼杯，并置于Bouin液中常溫固定24小時，梯度乙醇脫水，水楊酸甲酯透明，石蠟包埋，切片6微米，HE染色，中性樹膠封片，日本Olympus CH30-313型光學顯微攝影系統顯微觀察與攝影。

二、結果

顯微觀察可見，正常對照組大鼠視網膜組織結構完整，各層細胞界限清楚、結構正常，視桿、視錐層細胞結構明顯，外界膜清晰，外核層細胞排列緊密，數量適中，外網層結構完整，內核層細胞結構完整，數量適中，內網層結構緊密，節細胞大小適中，內界膜與神經纖維層界限較為明顯，內界膜明顯，結構完整（圖1、2）。

◎圖1 正常對照組視網膜組織結構（×400）

◎圖2 正常對照組視網膜組織結構（×1000）

模型對照組視網膜的視桿、視椎層細胞組織結構完整，外界膜明顯，外核層細胞空隙較大，數量較正常對照組減少，外網層損傷嚴重，幾乎消失，內核層細胞較為正常，內網層結構稀疏，節細胞層的細胞破裂，大部分溶解，神經纖維層破損、脫落，內界膜損傷，脫離（圖3、4）。

◎圖3 模型對照組視網膜組織結構（×400）

決明子Ⅰ組視桿、視椎層細胞結構較為明顯，外界膜界限模糊，外核層細胞結構完整，數量較正常對照組少，外網層結構完整，內核層細胞組織結構完好，其細胞間隙較大，內網層結構較為豐富，內界膜與神經纖維層界限明顯，但其間有少量空隙，節細胞層的細胞組織結構完整（圖5、6）。

◎圖6 決明子Ⅰ組視網膜組織結構（×1000）

未注射CCl4決明子Ⅰ組視網膜視桿、視椎層細胞組織結構完好，外界膜清晰，外核層細胞緊密，數量適中，外網層結構完整，內核層細胞緊密，內網層結構完整，內界膜與神經纖維層界限明顯，節細胞結構完整，有突起（圖7、8）。

◎圖7 未注射CCl4決明子Ⅰ組視網膜組織結構（×400）

◎圖8 未注射CCl4決明子Ⅰ組視網膜組織結構（×1000）

決明子Ⅱ組視網膜的組織結構較為完整，色素上皮層明顯，視桿視錐層明顯，外核層細胞排列較為緊密，有少量空隙，數量適中，外網層結構完整，內核層細胞排列緊密，內網層較稀疏，結構完整，內界膜與神經纖維層界限明顯，節細胞有少量突起（圖9、10）。

◎圖9 決明子Ⅱ組視網膜組織結構（×400）

◎圖10 決明子Ⅱ組視網膜組織結構（×1000）

未注射CCl4決明子Ⅱ組色素上皮層明顯，視桿視錐層結構明顯，外界膜非常明顯，外核層細胞結構正常，數量適中，外網層結構完整、清晰，內核層細胞結構完整，數量適中，內網層結構正常，神經纖維層與內界膜層界限明顯，細胞有突起（圖11、12）。

◎圖11 未注射CCl4決明子Ⅱ組視網膜組織結構（×400）

◎圖12 未注射CCl4決明子Ⅱ組視網膜組織結構（×1000）

三、討論

1.決明子水煎劑對視網膜的組織結構與功能具有明顯的改善和促進作用。研究表明，決明子味甘苦、涼，有清肝明目、潤腸通便之功。試驗結果顯示，決明子含有決明子素、大黃酚等成分，能使睫狀肌中乳酸脫氫酶活性顯著提高，增加眼組織中三磷酸腺苷的含量，降低眼壓，防止眼結膜炎、青光眼等疾病，對視神經有保護作用。視網膜由外向內依次包括色素上皮層、視桿視錐層、外界膜、外核層、外網層、內核層、內網層、節細胞層、神經纖維層和內界膜層等10層結構，其中神經纖維層和節細胞層內神經元可能是其主要作用細胞。

本實驗顯微觀察結果顯示，模型對照組大鼠視網膜組織結構病理變化明顯，視網膜外核層細胞數量較少，神經纖維層與內界膜界膜消失、節細胞層細胞破裂、溶解；未注射CCl4決明子Ⅰ、Ⅱ組視網膜組織結構較正常對照組有不同程度改善，其中飲用80克/升決明子水煎劑的大鼠視網膜結構改善效果最好。此次實驗結果視網膜結構變化特點表明，決明子水煎劑對大鼠視網膜的組織結構與功能有明顯改善作用，并以飲用高濃度（決明子濃度80克/升）決明子水煎劑的保護作用效果最好。

2.決明子水煎劑對四氯化碳所致的大鼠視網膜損傷具有保護作用。CCl4是一種常用的有機溶劑，對中樞神經系統及肝、腎等臟器都有毒性作用。本實驗模型對照組大鼠視網膜病理組織學變化明顯，組織結構損傷嚴重，視網膜外核層細胞數量較少，神經纖維層與內界膜消失、節細胞層細胞破裂、溶解。表明CCl4對視網膜的組織結構有明顯的損傷作用，主要損傷視網膜的神經纖維層與內界膜層，內外核層。

本研究決明子Ⅰ、Ⅱ組大鼠視網膜組織結構雖較模型對照組有較明顯改善，但較正常對照組和未注射CCl4決明子Ⅰ、Ⅱ組則可見不同程度病理組織學變化，表明飲用不同濃度決明子水煎劑對CCl4所致大鼠視網膜的損傷有較明顯的改善與保護作用，其中以飲用高劑量決明子水煎劑（80克/升）改善和保護作用效果最好。

綜上所述，決明子水煎劑對大鼠視網膜的組織結構與功能有明顯改善作用，對CCl4所致急性肝損傷大鼠視網膜的損傷有明顯改善和保護作用，并以飲用80克/升決明子水煎劑的改善和保護作用效果最好。

安徽省農業科技成果轉化資金項目（1504032001）；安徽科技學院高層次人才項目（ZRC2014454）；安徽省高校優秀青年人才支持計劃；安徽省第七批115產業創新團隊；安徽科技學院重點學科項目（AKZDXK2015A04）