綿羊母羔多胎基因（FecB）檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用要點(diǎn)*

張?jiān)粕?，姚曉鵬，周平，王新華，劉守仁

（1.新疆農(nóng)墾科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，新疆石河子832000；2.新疆惠達(dá)農(nóng)牧業(yè)科技有限公司）

綿羊母羔多胎基因（FecB）檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用要點(diǎn)*

張?jiān)粕?*，姚曉鵬2，周平1，王新華1，劉守仁1

（1.新疆農(nóng)墾科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，新疆石河子832000；2.新疆惠達(dá)農(nóng)牧業(yè)科技有限公司）

小片斷法高分辨率熔解曲線（SA-HRM）技術(shù)檢測(cè)綿羊多胎FecB基因具有準(zhǔn)確、高效、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，可以在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)大規(guī)模群體多胎基因檢測(cè)的目的。近兩年已推廣應(yīng)用于兵團(tuán)和自治區(qū)的多家肉羊養(yǎng)殖場(chǎng)及育種場(chǎng)的8 000多只綿羊，明顯提高了多胎綿羊及其雜交后代的產(chǎn)羔率，產(chǎn)生了顯著的經(jīng)濟(jì)效益，是目前多胎綿羊養(yǎng)殖過程中不可缺少的關(guān)鍵性技術(shù)。為盡快利用本項(xiàng)技術(shù)為新疆及兵團(tuán)肉羊產(chǎn)業(yè)發(fā)揮提質(zhì)增效作用，本文就SA-HRM基因分型技術(shù)在肉羊養(yǎng)殖實(shí)際生產(chǎn)中的推廣應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)及要點(diǎn)進(jìn)行了概述。

綿羊；母羔多胎鑒定；FecB；SA-HRM

綿羊?qū)賳翁ゲ溉轭悇?dòng)物，但有些綿羊品種卻具有能夠穩(wěn)定遺傳的多胎性狀，F(xiàn)ecB基因是目前已知的綿羊高繁殖力主效基因。我國(guó)的小尾寒羊和湖羊的產(chǎn)羔率分別為270%、250%，其攜帶的多胎FecB基因是決定個(gè)體多胎性狀的主要因素。在小尾寒羊、湖羊的雜交后代群體中，均能檢測(cè)到攜帶多胎FecB基因的個(gè)體，多胎FecB基因純合型（BB）母羊個(gè)體產(chǎn)羔率約為250%，雜合型（B+）母羊個(gè)體產(chǎn)羔率約為200%，因此，通過多胎基因檢測(cè)鑒定，可有效區(qū)分純合型（BB）、雜合型（B+）以及野生型（++）的母羊個(gè)體[1]，以檢測(cè)結(jié)果為依據(jù)對(duì)生產(chǎn)母羊群體實(shí)行多胎性能整群，將有效、精準(zhǔn)的增加群體的繁殖力，可快速提高兵團(tuán)肉羊業(yè)的生產(chǎn)水平和科技含量。

利用小片斷法高分辨率熔解曲線（SA-HRM）技術(shù)我們成功建立了簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的綿羊多胎FecB基因鑒定技術(shù)體系。在肉羊養(yǎng)殖實(shí)際生產(chǎn)中，很短時(shí)間內(nèi)就可實(shí)現(xiàn)大規(guī)模綿羊群體多胎性檢測(cè)。采用本項(xiàng)技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)綿羊母羔早期多胎性狀鑒定，最早在母羔出生后1月齡以內(nèi)，就可采血鑒定多胎FecB基因，在生產(chǎn)實(shí)際中提前2年就能完成對(duì)生產(chǎn)母羊個(gè)體的多胎性選留，對(duì)未攜帶多胎FecB基因的羔羊及時(shí)淘汰育肥，可以節(jié)省約2年的飼養(yǎng)管理成本[2]。及時(shí)鑒別現(xiàn)有生產(chǎn)母羊群體中個(gè)體間多胎性能差異，盡早淘汰產(chǎn)單胎的母羊個(gè)體，使多胎生產(chǎn)母羊群保持較高水平的繁殖性能，達(dá)到止損、增效的目的。目前，新疆從山東、江蘇、浙江引進(jìn)的小尾寒羊和湖羊純種群體中有5%～10%的母羊個(gè)體未攜帶多胎FecB基因；而從內(nèi)蒙、甘肅引進(jìn)的小尾寒羊、湖羊雜交后代中約有25%的母羊個(gè)體未攜帶多胎FecB基因，使群體多胎性能大大降低，利用綿羊多胎FecB基因檢測(cè)技術(shù)及時(shí)淘汰低產(chǎn)個(gè)體，有利于節(jié)省成本，有效降低多胎肉羊養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)。

1　樣品采集要求

1.1綿羊個(gè)體選擇

多胎基因檢測(cè)對(duì)象主要為小尾寒羊、湖羊個(gè)體，以及其雜交后代綿羊個(gè)體，不針對(duì)山羊樣品進(jìn)行檢測(cè)；要求被檢測(cè)的公、母羊個(gè)體康健，無人畜共患疾病（如結(jié)核、布魯氏桿菌病等）；大、小羊只常年均可采樣進(jìn)行送檢。

1.2樣品采集

用含抗凝劑的采血管采集血液樣品3～4 mL，將血液樣品顛倒混勻6～8次，確保血液與抗凝劑充分混合、不發(fā)生凝血；記錄羊耳號(hào)和對(duì)應(yīng)的血樣號(hào)，不同的樣品之間不能相互污染；樣品采集后及時(shí)放入-20℃保存；4℃條件下運(yùn)輸，24 h內(nèi)到達(dá)不影響檢測(cè)結(jié)果。

1.3多胎基因檢測(cè)

被送檢樣品要求樣品號(hào)標(biāo)記準(zhǔn)確、字跡清晰；采樣管上的號(hào)應(yīng)與記錄號(hào)一致；樣品保存完好，無破損和滲出；無變質(zhì)、降解情況發(fā)生。

2　多胎基因檢測(cè)步驟

2.1儀器及試劑

LightCycler 480Ⅱ熒光定量PCR儀（德國(guó)羅氏），Taq DNA聚合酶、10×Buffer、dNTP（天根生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)），引物由上海英濰捷基生物技術(shù)有限公司合成。

2.2多胎基因擴(kuò)增程序

PCR擴(kuò)增程序：95℃預(yù)變性3 min；95℃30 s，55℃60 s，循環(huán)數(shù)為35次。HRM分析程序：95℃變性5 min，40℃冷卻2 min；75～95℃收集熒光信號(hào)，每秒鐘收集25次信號(hào)。利用LightCycler 480自帶軟件分析數(shù)據(jù)。

2.3FecB基因檢測(cè)與產(chǎn)羔情況分析

利用綿羊多胎基因檢測(cè)技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)公、母羊多胎基因純合型（BB）、雜合型（B+）的精準(zhǔn)選配，能夠大量、穩(wěn)定生產(chǎn)攜帶有多胎FecB基因的雜交后代。頭胎有50%的個(gè)體產(chǎn)單羔，2～6胎產(chǎn)雙羔；多胎母羊在配種前要保證足夠的營(yíng)養(yǎng)供給，維持良好的體況；在多胎母羊妊娠3～4個(gè)月和產(chǎn)羔后需要加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)，以滿足母羊妊娠及哺乳雙羔對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求。

3　經(jīng)濟(jì)效益

3.1節(jié)約成本

利用多胎基因檢測(cè)技術(shù)，選擇多胎性好的種公羊個(gè)體，通過多胎雜交導(dǎo)入提高群體中多胎FecB基因的比例，使群體的產(chǎn)羔率增加，有效增加群體的繁殖性能，節(jié)省大量引進(jìn)多胎生產(chǎn)母羊的費(fèi)用；對(duì)羔羊進(jìn)行早期鑒定，提前2年進(jìn)行后備母羊的選留，節(jié)省大量的飼養(yǎng)管理成本。

3.2增收增效

應(yīng)用綿羊多胎基因檢測(cè)技術(shù)和精準(zhǔn)選配技術(shù)，實(shí)行種公羊、生產(chǎn)母羊的個(gè)體選留和選配，將提高群體產(chǎn)羔率30%～50%，每只羔羊凈利潤(rùn)按300元計(jì)算，以戶均養(yǎng)殖母羊100只計(jì)算，每年增加的凈收益為1.2萬元，經(jīng)濟(jì)效益十分可觀。綿羊多胎基因檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用和實(shí)施，有效提高了農(nóng)區(qū)和半農(nóng)半牧區(qū)肉羊養(yǎng)殖的生產(chǎn)效益，也為羔羊育肥、羊肉加工企業(yè)提供了更多的羊源，增加了市場(chǎng)上羊肉的供給，有效緩解羊肉價(jià)格上漲。

4　注意事項(xiàng)

（1）對(duì)檢測(cè)為攜帶多胎FecB基因的綿羊個(gè)體，同時(shí)需要參考其它性狀，如體格大小、產(chǎn)肉、泌乳等性能，從而綜合評(píng)價(jià)個(gè)體生產(chǎn)性能，決定個(gè)體的生產(chǎn)利用價(jià)值；（2）在舍飼飼養(yǎng)條件下，多胎生產(chǎn)母羊群能夠充分發(fā)揮高繁殖力特性，羔羊成活率也會(huì)得到很大提高。

[1]張?jiān)粕┯?新疆建立綿羊分子育種和繁育體系的研究分析，草食家畜，2014，169（6）：15-21.

[2]張?jiān)粕瑥埲f順.阿寒多胎雜交羊群體生產(chǎn)性能初步研究，新疆農(nóng)墾科技，2016，39（2）：32-34.

聲明

本刊2015年第10期第57頁“膜下滴灌鹽堿土改良劑在棉花上的應(yīng)用研究”一文的作者“張德林”應(yīng)為“張得林”，特此聲明。

《新疆農(nóng)墾科技》編輯部

2016—09—27

兵團(tuán)重大科技項(xiàng)目“良種肉羊繁育與雜交配套技術(shù)體系集成與示范”（2013AA003-001）；兵團(tuán)國(guó)際科技合作計(jì)劃項(xiàng)目“基于血漿DNA開發(fā)牛、羊妊娠診斷及FecB基因高效分型技術(shù)研究”（2014BC003）。

張?jiān)粕?976-），男，副研究員，博士，研究方向?yàn)榫d羊育種。E-mail：xmszys@163.com。