香蕉組培苗生產的污染控制問題

唐珊

（湛江農墾科學研究所，廣東 湛江 524086）

香蕉組培苗生產的污染控制問題

唐珊

（湛江農墾科學研究所，廣東 湛江 524086）

針對香蕉組培苗工廠化生產過程中的污染原因進行初步分析，并總結香蕉組培苗培養工作經驗，通過分析與探討給出相應的預防和控制污染的解決方法，從而降低生產成本，提高香蕉組培苗的質量和生產效益，加快香蕉產業化的發展。

香蕉；組培；工廠化生產；污染

香蕉組培苗雖然早已實現工廠化生產，技術也日趨成熟，但在生產環節中最突出的問題還是微生物污染，這是制約香蕉組培苗大規模生產的主要原因之一。在接種或培養過程中常常因為各種原因直接或間接地導致組培苗很容易發生細菌性或真菌性污染，且污染率常常大于15%，嚴重時還能引起大量組培苗黃化甚至死亡，特別是在材料稀少、珍貴時，因污染而導致損失尤為可惜。污染會給組培工作帶來很大影響和一定的經濟損失，這將導致香蕉組培苗生產成本的提高。然而，在香蕉組培苗工廠化生產過程中引起污染的原因有多種。筆者以自身的工作經驗，對香蕉組培苗工廠化生產過程中可能引起污染原因，以及如何控制污染總結如下。

1 引起污染的原因

1.1 培養基污染

培養基污染主要是由于培養基滅菌不充分而導致，根據微生物污染源分類，可分為細菌性污染和真菌性污染，未充分滅菌培養基中的細菌芽孢和真菌孢子是引起細菌性污染和真菌性污染的主要根源，通常芽孢和孢子的耐熱性均比營養細胞和菌絲體強，在正常高溫蒸汽滅菌過程中，營養細胞和菌絲體往往先于芽孢和孢子被殺死，而當高溫蒸汽滅菌鍋的溫度或壓力不足時，通常未能將芽孢和孢子完全殺滅，從而導致培養基被污染。由于培養基滅菌不徹底而導致污染的問題，一般要將培養基放置2～3 d時間才能易于觀察，然而在組培苗工廠化生產過程中，由于在保證工作效率的原因基本上不會將培養基放置2～3 d再用，因此在接種材料前很難被發現［1］。在鑒別污染是否是由于培養基滅菌不徹底而導致時，可將放置2～3 d的培養基在光照良好的環境下肉眼觀察，一般未徹底滅菌的培養基其內部會產生污染，由細菌芽孢發育形成營養細胞并大量繁殖會在培養基內部呈現白色絮狀菌團，由孢子發芽生長形成大量菌絲體會覆蓋培養基表面。

在組培苗工廠化生產培養基滅菌環節，主要采用高溫高壓蒸汽滅菌設備對培養基進行滅菌，而通常采用罐頭瓶作為培養基裝載容器，一次滅菌的數量較多，每鍋裝載瓶數的多少，每瓶灌裝培養基體積的多少，培養基中固體顆粒的存在，培養基成分，滅菌鍋在工作過程中冷空氣的排放情況，滅菌鍋的工作溫度和壓力等因素，都將直接或間接影響培養基的滅菌效果。因此，在培養基滅菌過程中，在提高工作效率、降低生產成本、降低營養流失的同時，必須保證徹底滅菌。

1.2 工作環境污染

在香蕉組培苗工廠化生產過程中，因工作環境所引起的污染造成的損失占了很大一部分，是生產環節中不能忽視的部分。工作環境包括外部環境和室內環境，外部環境即組培生產車間所處的環境和地理位置，處于環境衛生地區，周圍沒有垃圾場、產生煙塵的工廠等都能大大降低因外部環境而造成的污染；組培生產車間所建的地理位置也很關鍵，南方、沿海地區的高溫高濕環境比西北、內陸地區更加適宜微生物生長繁殖，市區環境污染比鄉下環境污染更嚴重。因此，在選址建立組培工廠時，外部環境顯得尤為重要。相比于外部環境，室內環境好壞將直接影響香蕉組培苗工廠化生產的運作，室內環境主要包括培養室、接種室、緩沖間、預處理室、培養基配制車間、清洗車間和滅菌車間等車間環境，各車間都應盡量保持干凈衛生，在接種室和培養室還應注意降低空氣濕度，適當控制室內溫度，及時清理污染和定時消毒殺菌；在培養基配制車間和清洗車間，應及時清理臺面、地板、量取藥品用具、培養瓶等可能殘留營養物質的地方，以免引起微生物的大量滋生。由工作環境所引起的污染也是香蕉組培苗工廠化生產污染中最難控制的。因此，在生產過程中必須嚴格管理，方可最大程度地降低此類污染。

1.3 接種材料污染

香蕉組培苗工廠化生產過程中，外植體材料消毒不徹底也是造成重大污染的原因之一，外植體材料處理的好壞直接關系到整個香蕉組培苗工廠化生產的運作，也直接影響到組培苗的質量和產量。而香蕉組培苗生產的外植體主要是蕉頭部分，由于蕉頭在地面或地下，所帶的微生物較多，在消毒過程中也較難于完全殺死所有攜帶的微生物。因此，在蕉頭預處理時，應盡可能地去除地下部分和外圍部分，以便于后面的消毒殺菌工作，最大限度降低蕉頭的污染。轉接材料污染主要是在挑揀材料時，誤將難于觀察辨認或含有內生菌的污染材料分揀到接種室進行轉接而導致污染，甚至交叉感染［2］。

1.4 操作不當污染

接種工作人員因操作不當或不規范所造成的污染是香蕉組培苗生產環節中較易控制的，這方面的污染源包括接種工作人員自身攜帶微生物，接種器具消毒不徹底，接種時處于超凈工作臺邊緣或角落操作，超凈工作臺接種前未清理臺面并消毒，超凈工作臺內堆積的培養瓶過多，未經處理的培養瓶直接置于工作臺內，經常在培養基或材料的上方操作，接種工具的使用不當，使用存放時間過長的滅過菌的接種工具等不規范操作［3］。通過加強生產管理，提高接種工作人員的基本操作技能和污染意識，可將此類污染控制在最低水平。

2 香蕉組培苗污染的預防與控制

2.1 香蕉組培苗蕉頭的消毒及原種芽的培育

筆者反復使用了多種接種方法進行試驗，認為蕉頭的污染控制好壞，完全決定于接種工作人員，認真做好接種前的準備工作，先把香蕉頭用自來水沖洗干凈，剝去外層苞片并切成2 cm×2 cm大小的圓錐體［4，5］，再用75%酒精浸泡30 s，倒掉酒精，加入0.1%升汞溶液浸泡10～15 min，在消毒過程中要攪拌3～5次，使附著在材料上的氣泡或其他物質得以及時清除而達到充分滅菌的目的。達到設定的滅菌時間后，先將升汞溶液倒入收集瓶，用無菌水清洗外植體材料5次，每次清洗不低于3 min，在無菌碟子上剝除一層葉鞘，并縱切成大小均等的4塊，接入香蕉誘導培養基中培養，每瓶接種一塊外植體，筆者通過這種方法誘導蕉頭的發芽率高達95%以上，污染率在5%以內。

2.2 香蕉組培苗分化苗的污染控制

接種工作人員在擺放材料進超凈工作臺之前，首先要辨別香蕉培養瓶內是否有細菌和真菌污染，在確保材料無菌的基礎上才可擺入超凈工作臺內，如果不認真細致地檢查香蕉培養瓶內是否已被污染，將會導致細菌、真菌的交叉感染，造成更大的污染。在操作過程中要正確擺放所需工具（鑷子、刀、碟子）的位置，要將使用過的和經滅菌未使用過的工具分開放置，在使用接種工具前要對其進行大范圍的滅菌，由此方可在最大程度上降低污染的可能。

2.3 香蕉組培苗接種的污染控制

在接種室外最好設立一間緩沖間，主要起到接種室連接到其他工作間或走道的過渡作用，接種室的門窗最好設有雙層，以防灰塵和微生物。接種室內應裝備紫外燈或經常噴灑殺菌劑，以抑制過多微生物生長，緩沖間與接種室之間要設立活動門，工作人員在進入接種室之前在緩沖間內須更換衣服、鞋帽和口罩才能進入接種室，進入接種室后應隨手關上活動門。在接種室內盡量不讓非工作人員進入，工作人員進入后也不可過多走動或在里面嬉戲打鬧，更不允許在里面吃東西、抽煙，以防污染接種室內部環境。在正式工作之前應將接種室內紫外燈和超凈工作臺的紫外燈提前打開，紫外線照射時間不低于20 min，待紫外燈工作完后方可進入進行接種操作。接種完成后，應將接種室清掃干凈，及時清洗換下的衣服、鞋帽、口罩等，并定期進行消毒處理，接種室最好能保持恒定的舒適溫度，這樣一是有利于提高工作人員的工作效率，二是可使從培養室內取出的植物材料不會因溫度變化過大而影響生長。

2.4 香蕉組培苗培植階段的污染控制

培養室最重要的是要保持無菌、恒溫、低濕、無塵且空氣流通。溫度應維持在（25±2）℃，相對濕度應在30%～40%。整個培養室內還應裝有一個或多個紫外燈或臭氧發生器，以便能定時對整個培養間進行殺菌處理，特別是在夏天潮濕，陰雨季節，最好每天在晚上用紫外燈殺菌30 min以上或臭氧發生器工作90 min。培養室內的地面、墻壁、培養架及所有器物的表面都應常清洗、擦拭以防過多灰塵和微生物滋生，進入培養室最好穿戴干凈拖鞋或穿一次性塑料鞋套，非工作人員最好少進培養室。

2.5 香蕉組培苗培養基污染的控制

對于香蕉組培苗來說，培養基是香蕉組織培養中的“血液”。如果培養基消毒不徹底，通常會造成很大的污染。所以，在培養基滅菌時，必須嚴格控制好消毒的時間。當高溫滅菌鍋上的壓力表指針達到0.05 MPa時，關上排氣閥繼續加熱，當指針又升到0.05 MPa時再斷加熱源，將滅菌鍋的冷空氣徹底排盡，關上放氣閥，繼續加熱直至壓力表指針在0.10～0.15 MPa，溫度表為121℃，維持20 min。停止加熱，使溫度慢慢下降，直到0.05 MPa時慢慢打開氣閥，使壓力回復到0.00 MPa，打開鍋蓋，取出培養基。

2.6 香蕉組培苗生產的污染控制管理

香蕉組培苗的污染情況，最終會在培養階段觀察發現，可根據培養階段香蕉組培苗的污染發生特征、程度，從而判斷污染是由哪個生產環節的控制不力或出錯所引起，如發現污染菌類是由香蕉芽周圍長出的，可判斷接種材料本身帶菌及在接種時發生的交叉感染引起，應從挑揀無菌材料和保證接種工具不帶菌入手解決此類污染問題；又如在培養基礎上發現很多霉菌，且發生比例，程度較大，既可判斷可能是超凈臺濾菌功能不佳或是接種、培養環境不衛生引起，須對超凈濾菌性能進行測試，培養環境消毒。

總之，要做好香蕉組培苗的污染控制工作，須建立相應的管理制度和制定相關的技術規程，使每個員工都認識和重視污染問題，并懂得防止、控制污染的技術要領，以及對員工防控污染效果進行考核，這樣才能使污染降至最低限度，確保香蕉組培苗生產成本最低。

［1］廖俊杰.草莓組培苗工廠化生產中控制污染的措施［J］.中國南方果樹，2006（4）：55-56.

［2］張燕.組培苗污染原因分析［J］.中國花卉園藝，2007（2）：45.

［3］祁恒佐.如何做好組織培養生產過程中污染防止工作［J］.現代企業文化，2009（20）：102-103.

［4］單芹麗，趙輝，張付斗.香蕉組培苗的生產技術［J］.北方園藝，2009（6）：79-81.

［5］林貴美.香蕉組培苗的研究與推廣［J］.中國熱帶農業，2005（6）：24-27.

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1674-7909（2016）14-81-3