微滴式數字PCR平臺檢測晚期肺癌患者血漿游離腫瘤DNA中L861Q突變的價值分析

金婕妤 喻正源（通訊作者）

（1 蘇州大學附屬第一醫院臨床檢測中心 江蘇 蘇州 215000）

（2 蘇州大學附屬第一醫院腫瘤科 江蘇 蘇州 215000）

伯樂微滴式數字PCR系統平臺由于其操作簡單，檢測靈敏度高，可絕對定量等優點日益在分子檢測技術中扮演越來越重要的角色[1]。針對表皮生長因子受體陽性的肺癌靶向藥物絡氨酸激酶抑制劑由于其療效好副作用小已經成為晚期肺癌患者的首選藥物[2]。表皮生長因子的敏感陽性突變有多種變異形式包括點突變，插入缺失突變等。其中L861Q突變幾乎占表皮生長因子受體的敏感突變的10%，所以對L861Q突變進行分子檢測具有重大臨床意義。本研究對80例晚期肺癌患者穿刺活檢樣本以及匹配的外周血樣本在伯樂微滴式數字PCR系統平臺上對EGFR的L861Q突變進行檢測，并研究相關檢測結果，以探討伯樂微滴式數字PCR系統平臺在血液cfDNA中檢測L861Q突變的可行性。

1.樣本來源及檢測方法

1.1 采集病人樣本

收集2017年3月—2019年4月期間在蘇州大學附屬第一醫院病理科病理診斷為肺腺癌患者的活檢石蠟組織80例，臨床分期均為Ⅳ期。80例樣本中女性42例，男性38例。平均年齡62歲。同時采集這80例患者的外周血標本。采用10ml的cell free DNA采血管（德國QIAGEN公司）對病人外周血進行收集，外周血在采取后半小時內進行1900g離心，離心時間為11min。小心吸取上層血漿轉移至2ml離心管，1800g離心18min，再次小心吸取上層無渾濁物的血漿，并轉移至新的2ml離心管，迅速放置于-80度冰箱保存。準備下一步cfDNA的提取。

1.2 提取血液中cfDNA

cfDNA的提取采用cfDNA提取試劑盒（美國Thermo Fisher Scientific公司）。使用qubit進行cfDNA濃度定量（美國Thermo Fisher Scientific公司）。

1.3 L861Q突變檢測

采用微滴式數字PCR平臺的 QX200 PCR儀（美國Bio-Rod公司）及伯樂公司L861Q突變檢測試劑盒檢測樣本中L861Q突變。參照說明書判斷檢測結果。

2.結果

2.1 80 例肺癌患者cfDNA及對應組織中L861Q突變檢測結果：80例晚期肺癌病人穿刺組織樣本中采用伯樂數字PCR儀檢測到8例L861Q突變陽性，72例陰性。cfDNA中伯樂數字PCR儀檢測到7例L861Q突變陽性，73例陰性。穿刺樣本和對應的晚期肺癌患者血液中cfDNA突變檢測一致率為87.5%。見表。

表 活檢組織與血漿cfDNA微滴式數字PCR平臺L861Q突變檢測結果

3.討論

近年來，精準醫學飛速發展，特別在腫瘤的臨床治療上，隨著分子生物學和基因組學的研究不斷取得突破性成果，晚期腫瘤病人的治療手段已經漸漸從單純的化療放療發展到現在的精準治療時代。而對靶點的精準檢測也在精準醫學上扮演越來越重要的角色[3-4]。我們使用微滴式數字PCR平臺在80例病人血漿cfDNA標本檢測到7例L861Q突變，73例陰性；相對應的穿刺樣本中檢測到8例L861Q突變，72例陰性，一致率為87.5%。這個結果證明微滴式數字PCR平臺在cfDNAL861Q突變檢測上已經接近了穿刺樣本的檢測結果，相信在以后隨著對cfDNA提取工藝的改進，微滴式數字PCR平臺的靈敏度提高，相關靶點檢測試劑盒的優化，微滴式數字PCR平臺在分子檢測上會起到越來越重要的作用。