老年急性腦梗死患者血漿熱休克蛋白70和血清白介素10及18水平測定的價值

陸毅奇　黃劍崗　王祥林

1)揚州大學第五臨床醫學院常熟市二院老年醫學科　常熟　215500　2)江蘇常熟市中醫院心血管內科　常熟　215500

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老年急性腦梗死患者血漿熱休克蛋白70和血清白介素10及18水平測定的價值

陸毅奇1)黃劍崗1)王祥林2)△

1)揚州大學第五臨床醫學院常熟市二院老年醫學科常熟2155002)江蘇常熟市中醫院心血管內科常熟215500

【摘要】目的探討外周血指標水平的變化與病情進展及動脈粥樣硬化程度的關系，評價其測定的臨床價值。方法血漿HSP70水平檢測方法采用酶聯免疫法，血清IL-10和IL-18水平測定采用放射免疫分析法。血清糖化血紅蛋白(HbA1c)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)水平測定均采用7600-020型全自動生化儀檢測。頸總動脈內中膜厚度(IMT)采用彩色多普勒超聲儀測定。結果患者組高血壓家族史、急性腦梗死(ACI)家族史、血糖、TG、LDL-c、HDL-c、HbA1c和IMT 8項因素與對照組比較，差異均有統計學意義(P均<0.01)。3組不同病情患者外周血指標水平顯示，輕型腦梗死組IL-10水平顯著低于對照組(P<0.05)，而IL-18水平則顯著高于對照組(P<0.05)；中型組和重型組3項外周血指標與對照組比較差異均有統計學意義(P<0.05或0.01)；相鄰組比較差異有統計學意義(P<0.05)。將IMT與HSP7O、HbAlc、IL-10和IL-18水平分別行相關性分析，分別為r=0.176，P<0.05，r=0.231，P<0.01，r=-0.144，P<0.05和r=0.345，P<0.01。結論外周血標志物參與了ACI的病理過程，其測定對于了解、評估腦梗死病情和抗感染免疫功能及動脈粥樣硬化程度有較大幫助。

【關鍵詞】急性腦梗死；熱休克蛋白70；動脈內中膜厚度；白介素10；白介素18

熱休克蛋白(HSPs)是機體在遭受各種應激性損害時所產生的一組具有高度保守性的蛋白質，又稱應激蛋白。其在人體生理和病理狀態下具有重要的細胞保護作用。國內研究[1]認為，HSP70對神經損傷具有保護作用，其含量的變化與腦損傷程度密切相關，已成為近年來神經損傷研究領域中少數幾個熱點血液生化標志物之一。有研究[2]還闡明，急性腦梗死(acute cerebral infarction，ACI)患者血漿熱休克蛋白70(heat-shock proteins 70，HSP70)發生了顯著變化，且與病情的進展程度關系一致。為進一步探討外周血中相關標志物水平的變化與病情進展的關系，評價其測定的臨床價值，本研究測定了32例ACI患者的血漿HSP70、血清IL-10和IL-18等指標水平，并與其他血清生化指標進行了相關性分析。現報道如下。

1資料與方法

1.1研究對象選擇2012-01-2013-12入住我院和中醫院的老年腦梗死患者32例，男25例，女7例，年齡61～88歲，平均(71.7±5.9)歲。(1)ACI診斷及分組符合《腦卒中患者臨床神經功能缺損程度評分標準》[3]。所有病例均經頭顱CT或MRI證實。(2)病程選擇發病第1天，并均首次發病。按該標準[3]將不同病情患者分為輕型(n=12)、中型(n=8)和重型(n=12)3組進行測定。另選擇同期來我院健康體檢中心的健康老年人35例為對照組，男25例，女10例，年齡60～79(67.3±6.5)歲。臨床三大常規、血清學、肝腎功能、生化、免疫學指標水平均屬正常范圍。排除心理疾病及其他急、慢性感染和患者組所列疾病。亦未接受過各種免疫功能制劑的治療。排除標準：合并房顫、感染性心內膜炎、全身感染、腫瘤、糖尿病患者以及心、肝、腎衰竭者、疑似腦卒中的疾病，如低血糖、偏頭痛、腦出血及短暫性腦缺血發作。既往也未接受過各種免疫功能制劑的治療。

1.2測定方法

1.2.1標本采集：分別抽取ACI患者入院后清晨空腹肘靜脈血6 mL，將3 mL血注入含有40 μL 10% EDTA-Na2和60 μL抑肽酶的抗凝試管中混勻，余3 mL注入干燥潔凈的玻璃試管中，均于2 500 r/min，2～6 ℃低溫離心10 min分離血漿和血清，將其注入各自試管中，加蓋塞緊，置于-70 ℃低溫冰箱中保存待測。正常對照組標本采集條件相同。

1.2.2測定方法：血漿HSP70水平檢測采用酶聯免疫法，試劑盒由愛爾蘭Biotrin International公司提供。檢測儀器為美國生產的FAMIER-150型全自動酶標分析系統。血清IL-10和IL-18水平測定采用放射免疫分析法，試劑盒由北京科美東雅生物技術有限公司提供。測量儀器為由安徽中科中佳科技有限公司生產的GC-911型全自動γ-計數器。血清糖化血紅蛋白(glycohemoglobin A1c，HbA1c)、TC、TG、LDL-c、HDL-c水平測定均采用日立公司生產的7600-020型全自動生化儀檢測。操作嚴格按試劑盒說明書進行。

1.2.2腦梗死程度判定：將32例腦梗死患者于入院時分別按[3]進行評分，用于實施不同病情的分組研究。最高評分為45分(重型腦損傷)，最低為0分(正常腦功能)。本文3組評分情況：輕型腦梗死組(12例，評分0～15分)、中型腦梗死組(8例，評分16～30分)和重型腦梗死組(12例，評分31～45分)。

1.2.3IMT測定：于入院第1天采用美國通用電器公司(GE)的VIVID-7彩色多普勒超聲儀檢測雙側頸總動脈內中膜厚度(intima-media thickness，IMT)，取雙側IMT均值。按斑塊積分法[2]：不計算各斑塊長度，只分別將同側各孤立的動脈粥樣硬化斑塊的最大厚度(mm)進行相加，得到該頸動脈斑塊積分，兩側頸動脈斑塊積分之和為斑塊總積分，斑塊積分1.1～5.0為輕度頸動脈粥樣硬化；5.1～10.0為中度頸動脈粥樣硬化；>10.0為重度頸動脈粥樣硬化。

1.3統計學處理采用SPSS 11.5統計軟件進行分析，計量資料以均數±標準差表示，采用t檢驗，計數資料以百分率(%)表示，采用χ2檢驗，相關性檢驗采用直線回歸相關分析法。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.12組臨床資料和常規檢查指標水平比較患者組性別、年齡、吸煙百分率，飲酒百分率和TC 5項指標比較差異均無統計學意義(P>0.05)，但高血壓家族史、ACI家族史、血糖、TG、LDL-c、HDL-c、HbA1c和IMT 8項因素與對照組比較差異均統計學意義(P均<0.01)。見表1。

表12組臨床資料和常規檢查指標

指 標患者組(n=32)對照組(n=35)t/χ2值P值年齡/歲71.7±5.969.3±6.50.6420.601性別(男)/%65.2370.120.0120.965吸煙百分率/%52.1748.860.1450.699飲酒百分率/%21.7817.860.1360.708高血壓家族史/%10.8952.217.7820.000ACI家族史/%6.1218.236.5620.000血糖(mmol/L)6.87±0.974.98±0.790.6980.001TC(mmol/L)4.09±0.464.01±0.390.4090.498TG(mmol/L)1.89±0.431.03±0.249.5620.000LDLc(mmol/L)4.15±0.692.35±0.377.9740.000HDLc(mmol/L)1.21±0.151.95±0.180.7520.000HbA1c/%6.26±0.754.72±0.5314.8710.000IMT(mm)1.12±0.290.71±0.2113.8930.000

2.2不同病情ACI患者與對照組外周血指標水平比較3組不同病情患者外周血指標水平顯示，輕型腦梗死組IL-10水平顯著低于對照組(P<0.05)，而IL-18水平則顯著高于對照組(P<0.05)；中型組和重型組3項外周血指標與對照組差異均有統計學意義(P<0.05或0.01)；相鄰組比較差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2不同病情ACI患者與對照組外周血指標水平

組別nHSP70(ng/L)IL10(pg/mL)IL18(pg/mL)對照組3514.09±4.0249.41±9.12201.77±71.98輕型組1217.12±6.0130.10±7.61a308.09±81.75a中型組829.31±10.02a25.96±5.79b387.09±89.76b重型組1248.31±16.28bc15.27±8.87bc472.07±98.39bc

注：與對照組比較，aP<0.05，bP<0.01；與相鄰組比較，cP<0.05

2.3IMT與外周血四項指標水平的相關性分析見表3。

表3　IMT與外周血四項指標水平的相關性分析

3討論

HSPs是生物細胞在受熱和其他應激因素(如缺血、缺氧)刺激后，產生的一組特殊的蛋白質，它能保護機體細胞在隨后的致死性應激中不受或少受傷害，即應激耐受性。而HSP70是HSPs家族中最為重要的一族，具有分子伴侶功能，參與免疫反應、抗細胞凋亡、抗氧化、提高細胞的應激耐受性、促進細胞增殖、參與細胞骨架的形成和修復等。研究[5]發現，具有γδT細胞受體并誘導細胞毒性的胸腺依賴性淋巴細胞表達HSP70的炎性巨噬細胞，從而使宿主器官免受因巨噬細胞所致的局部組織損傷，是一種人體重要的多功能保護性蛋白伴侶，許多疾病的發生和發展都伴隨著該指標水平的變化。

表1結果顯示，患者組高血壓家族史、ACI家族史、血糖、TG、LDL-c、HDL-c、HbA1c和IMT 8項指標與對照組比較均存在顯著性差異(P均<0.01)。表明患者體內的8項指標處于高水平狀態。由于以往文獻[2，6]對臨床記錄資料與ACI發病的關系觀點和結果不一，故筆者僅選擇了HbA1c和IMT二項檢測指標與HSP70進行了相關性分析。

表2結果示，中型和重型腦梗死組患者血漿HSP70水平均顯著高于對照組(P<0.05或0.01)；相鄰組比較也均存在顯著差異(P<0.05)。與IMT的相關分析結果顯示，前者呈顯著正相關(r=0.023，P<0.05)，且發現IMT與HbA1c的表達水平呈顯著正相關(P<0.01，r=-0.144)。結果表明，中型和重型ACI組患者HSP70水平均顯著升高。再次證實了ACI患者血漿HSP70的表達水平與腦梗死程度呈平行關系；即梗死組織破壞越重表達水平越高。有關其在ACI患者血漿中升高的原因較為復雜。究其原因，筆者認為還是與患者ACI導致腦組織缺血缺氧、壞死，炎癥滲出，引起炎性細胞因子大量合成分泌有關。因此時患者的防御機制為保障體內細胞大量應激合成蛋白質的正常結構，用于應激性防御需要。同時機體的體溫調節中樞即應激下調，體溫升高；相關細胞和體液的信號通路將誘導伴侶性功能蛋白-HSP70的伴隨合成并向細胞外釋放，導致循環血液中水平升高。本文中中型和重型ACI組患者IL-18水平的升高，也證實ACI患者血漿HSP70的表達水平與炎癥發生、發展存在密切的因果關系。故有研究將其譽為細胞受損敏感而可靠的指標之一。在臨床內外科和其他各專業系統疾病的研究中，各種應激刺激均可誘導熱休克基因的表達。值得一提的是，本文還發現重型ACI組患者的HSP70表達水平與IMT值存在顯著的正相關；IMT與HbA1c的表達水平也呈顯著正相關。提示HSP70和HbA1c水平的升高與動脈粥樣硬化發生與發展關系密切，2種指標的測定對于了解患者由動脈粥樣硬化向ACI的病理進展機制和評估病情有不可忽視的應用價值。到目前為止，本指標的測定雖尚缺乏可靠的診斷特異性，但可為進一步深入研究人體的應激、保護性防御機制的運作，提供了又一個新的生物學指標。

再從血清IL-10和IL-18水平的變化特點看，其水平于輕度ACI組前者顯著低于對照組，而后者則顯著高于對照組(P均<0.05)，中型和重型組患者水平均呈顯著低下及顯著高水平態勢(P<0.01)。二者與IMT值分別存在顯著的負相關和正相關性(r=-0.144，r=0.345，P<0.05或<0.01)。國外學者[7]的研究也提示，血清HSP70和炎性細胞因子的含量呈正相關，并認為HSP70升高是機體細胞啟動免疫保護反應的上游事件。Yoshikai等[8]也證實，HSP70可活化CD4+T細胞，產生IL-10，從而可抑制Th1細胞介導的過度炎癥反應。但如果HSP 70產生過量，也能抑制IL-10的產生，而不能抑制IL-6的生成[9]。由于IL-18與IL-6同為致炎性細胞因子，故可以確認本文結果與上述文獻基本吻合。又因二者在炎癥感染和抗感染的病理過程中是一對功能相互拮抗的平衡體系。二者的變化隨病情的加重其水平呈負向形梯度式減增，顯示患者體內存在明顯的感染-抗感染功能的失調，同時又可說明患者存在細胞免疫功能的降低。其測定對于臨床了解患者的抗感染免疫功能狀態有不可忽視的作用。而用于評估動脈粥樣硬化程度筆者認為價值似不大。理由是因二者在ACI的病程進展中與其他病理應激機制存在諸多交叉，如炎癥應激的啟動、細胞免疫應答上調，甚至還涉及到組織的精細解剖的改變和修復過程的參與等人體整套防御機制的運作，故認為要明確其實際應用價值尚待大樣本量的基礎及臨床研究。

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【中圖分類號】R743.33

【文獻標識碼】A

【文章編號】1673-5110(2016)02-0032-03

通訊作者：△王祥林，E-mail：csxqyy@sina.com