虎尾輪根提取物對脾虛小鼠的影響

陳素慧　謝偉容　黃建軍

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虎尾輪根提取物對脾虛小鼠的影響

陳素慧謝偉容黃建軍

【摘要】目的：篩選虎尾輪根健脾固胃的有效部位。方法：采用系統溶劑提取法對虎尾輪根進行提取、分離得到不同部位的提取物，并采用大黃所致脾虛模型及飲食失節型脾虛模型，以各組提取液灌胃給藥，觀察各種提取液對脾虛模型小鼠的影響。結果：虎尾輪根的乙醇提取總浸膏、乙酸乙酯部位、水飽和正丁醇部位可增加脾虛小鼠體質量，提高胸腺和脾臟指數，改善小鼠脾虛癥狀，具有健脾固胃的功效，對小鼠脾虛模型有較好的抗脾虛作用，其他部位活性較弱。結論：虎尾輪根的總浸膏、乙酸乙酯、水飽和正丁醇部位有較好的抗脾虛的作用。

【關鍵詞】虎尾輪根；提取物；脾虛

虎尾輪為豆科貍尾草屬植物長穗貓尾射(Urariacrinita)的全草，主要分布于云南、廣東、廣西、福建、臺灣等省份。據《中藥大辭典》、《閩南民間草藥》、《臺灣民間藥》記載，虎尾輪有活血通絡、健脾和胃、除濕化痰的功效，用于治療肺結核、咳嗽、肺癰、吐血、尿血、胃十二指腸潰瘍、小兒疳積、白帶、關節炎等疾病。虎尾輪在閩南、臺灣等地區廣泛使用為食療藥材，閩南地區常作藥膳，用于小兒脾胃不開、小兒疳積等癥；臺灣民間用于小兒發育不良之轉骨，以及運動傷害和跌打內外傷[1]。虎尾輪根具有理氣、化痰、益腎的功效[2]。

課題組前期對虎尾輪根和莖已進行初步化學研究[3-4]，發現虎尾輪根主要含有黃酮類、皂苷、糖類、氨基酸類、酚類、有機酸以及甾體等物質；莖中含有糖類、黃酮及其苷類。但對其固胃健脾的有效成分尚不清晰。研究采用80%乙醇對虎尾輪根進行提取，分離得到不同部位的提取物，并觀察各種提取物對大黃所致脾虛模型及食失節型脾虛模型小鼠的影響。

1儀器與材料

1.1動物健康昆明小鼠，清潔級，雌雄各半，體質量(20±2)g，由漳州衛生職業學院機能實驗室提供。

1.2藥品與試劑虎尾輪采自福建漳州市南靖縣和溪鎮，經漳州衛生職業學院藥學系實訓中心巫慶珍高級實驗師鑒定為豆科Urariacrinita(L.) Desv.ex DC.的根；歸脾丸(批號：20140826，九芝堂股份有限公司)；大黃藥材(漳州聚善堂藥業有限公司)。其余試劑均為分析純。

1.3儀器電子天平AB135-S(十萬分之一)(梅特勒，瑞士)；KQ-50B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；R50-2B 型旋轉蒸發儀(上海申生科技有限公司)；SHB-Ⅲ型水循環式多用真空泵(上海亞榮有限公司)。

2方法

2.1供試品的制備取虎尾輪根粗粉，80%乙醇回流提取3次，提取液減壓回收得浸膏，浸膏加水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，萃取液減壓回收溶劑，得石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏、正丁醇浸膏和水浸膏。灌胃前分別用0.5% CMC-Na溶液配制成適宜濃度，分別灌胃給藥10ml/kg。

2.2大黃[2，5，6]所致脾虛模型的建立

2.2.1造模將80只小鼠隨機分為正常組、模型組、陽性對照組、醇提組、石油醚組、乙酸乙酯組、水飽和正丁醇組、水組，每組10只。分別記錄每只動物體質量，適應性正常飼養。除正常組外，各組灌胃給予大黃水煎液(0.5g/10g)，連續8d；正常組給予同體積蒸餾水。最后一次灌胃大黃水煎液后，記錄各組小鼠體質量。

2.2.2給藥第9天起，正常對照組與模型組給予同體積蒸餾水；各提取部位組和醇提取組給予1.2g生藥/(kg·d)；陽性組灌胃給予歸脾丸0.064g/(kg·d)；連續給藥7d。

2.2.3腸推進率的測定各組動物最后一次給藥前再次記錄各組小鼠體質量，記錄完畢后禁食不禁水24h，試驗時空白組給予墨汁，其他組以墨汁稀釋藥物，按0.3ml/10g體質量灌胃，30min后頸部脫臼處死，迅速解剖取出腸道，用直尺量取幽門至墨汁前沿的距離作為在腸道中的推進距離，從幽門至回盲部的總長度作為小腸總長度，計算推進率，推進率(%)=墨汁在小腸內推進距離(cm)/小腸總長度(cm)×100%。

2.2.4胸腺系數和脾臟系數的測定將處死后的小鼠取出胸腺與脾臟，稱體質量，計算臟器系數。

2.3飲食失節型脾虛模型的建立[7]

2.3.1造模將80只小鼠隨機分為正常對照組、模型組、陽性對照組(歸脾丸組)、醇提組(總膏組)、石油醚組、乙酸乙酯組、水飽和正丁醇組、水浸膏組，每組10只。分別記錄每只動物體質量，適應性正常飼養。除正常組外，各組每天灌胃給予精煉豬油脂(0.2ml/10g)，同時喂食卷心菜，連續8d；正常組給予同體積蒸餾水。

2.3.2給藥第9天起，正常對照組與模型組給予同體積蒸餾水；各提取部位組和總膏組給予1.2g生藥/(kg·d)；陽性對照組灌胃給予歸脾丸0.064g/(kg·d)；連續給藥7d。

2.3.3一般觀察以及體重測量觀察并記錄小鼠活動、飲食、體形變化及泄瀉、納呆、毛色等情況。每天灌胃前測體質量。

3結果

3.1對大黃所致小鼠脾虛模型的影響

3.1.1對小鼠腸推進率的影響大黃水煎液灌胃造模后，模型組與正常對照組相比較，小鼠大腸推進距離變長，推進率增加；給藥組均能不同程度地降低脾虛小鼠的腸推進距離，乙醇提取總膏組、乙酸乙酯組、正丁醇組組的腸推進距離降低較為顯著(P<0.05)。結果表明，造模后小鼠推進率增加，乙醇提取總膏組、乙酸乙酯組、正丁醇組可以明顯降低推進率，見表1。

表1　虎尾輪根對大黃致小鼠脾虛模型腸推進率的影響

注：與正常對照組比較，△P<0.05；與模型對照組比較，*P<0.05。

3.1.2對小鼠胸腺系數和脾臟系數的影響模型組小鼠自行恢復一周后，胸腺指數和脾臟指數略有恢復，但顯著低于正常對照組(P<0.05)；與模型組相比，各給藥組胸腺指數和脾臟指數都有升高的趨勢，而乙醇提取總浸膏組、乙酸乙酯組、正丁醇組增加較為明顯(P<0.05)。結果表明，造模后小鼠胸腺指數、脾臟指數降低；乙醇提取總浸膏組、乙酸乙酯組、正丁醇組可以明顯增加胸腺指數和脾臟指數。見表2。

表2　虎尾輪根對大黃致小鼠脾虛模型腸胸腺

注：與正常對照組比較，△P<0.05；與模型對照組比較，*P<0.05。

3.2對飲食失節型脾虛模型的影響小鼠給予喂食精煉豬油和卷心菜后，第3天開始出現泄瀉，為黃色溏軟便；繼續喂食，第5天開始出現反應遲鈍，行動遲緩，形體消瘦，被毛稀疏、散亂等癥狀。按“2.3.2”下方法給藥，給藥3d后，各給藥組小鼠飲食量逐漸增加，體重略增，大便趨于正常，給藥結束后大便成型。而模型組小鼠自行恢復，狀況參差不齊，恢復程度和速度弱于給藥組。結果見表3。

±s)

注：與模型對照組比較，*P<0.05。

4討論

目前，造脾虛模型的方法各異，本文采用大黃苦寒瀉下法和飲食失節法復制脾虛模型。大黃苦寒瀉下法方法簡單，易于操作，用大黃水煎液灌胃，動物出現便溏、形體消瘦、毛色枯槁等癥狀與臨床脾虛癥狀相同，說明實驗建立的脾虛模型成功。胸腺和脾臟是人體重要的免疫器官，胸腺指數和脾臟指數能反映二者的發育和功能狀況，間接反映了機體的免疫水平[8]，實驗中以腸墨汁推進率、胸腺指數和脾臟指數為考察指標。結果表明，虎尾輪根乙醇提取總浸膏組、乙酸乙酯組、水飽和正丁醇組給藥后能明顯降低小鼠腸推進率，提高胸腺指數和脾臟指數。將小鼠喂食精煉豬油和卷心菜，復制飲食失節型脾虛模型，實驗動物出現反應遲鈍、行動遲緩、形體消瘦、被毛稀疏、散亂等癥狀，說明實驗建立的脾虛模型成功；乙酸乙酯和水飽和正丁醇組給藥后小鼠體質量增加較明顯，大便成型，具有改善脾虛癥狀的功能。

實驗結果表明，虎尾輪根提取物可增加脾虛小鼠體質量，提高胸腺和脾臟指數，改善小鼠脾虛癥狀，具有健脾固胃的功效，而乙酸乙酯和水飽和正丁醇部位效果更優。實驗中，虎尾輪根浸膏得率為7.3%，萃取后，各提取液的得率分別為石油醚層為0.25%、乙酸乙酯層為0.4%、水飽和正丁醇層為0.8%、水層為3.5%。虎尾輪根含有黃酮類、皂苷類成分，極性較大，有效物質主要存在于正丁醇層和乙酸乙酯層，為虎尾輪藥用價值的研究奠定實驗基礎。

參考文獻

[1]南京中醫藥大學.中藥大辭典[M].上海:上海科學技術出版社,2006:1336 -1337.

[2]陳奇.中藥藥理研究方法學[M].北京:人民衛生出版社,2006:1006.

[3]陳素慧,高佳,巫慶珍,等.虎尾輪根化學成分預試驗[J].天津藥學,2011,23(2):9-10.

[4]黃建軍,高佳,巫慶珍,等.虎尾輪根和莖的化學成分比較[J].北方藥學,2012,9(10):36.

[5]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學[M]．3版.北京:人民衛生出版社，2002.

[6]李柏群,陳紹成,彭騰,等.風芍六君子湯治療脾虛腹瀉型腸易激綜合征的藥效學研究[J].中成藥,2012,34(11):2229-2233.

[7]周可軍,楊振華,王希鋒,等.康胃顆粒對實驗性脾虛大鼠的健脾作用[J].現代中西醫結合雜志,2007,16(19):2652-2653.

[8]王燕燕,張錦文,郭潔茹,等.虎尾輪根提取物對腎陽虛模型小鼠的影響[J].醫藥導報,2011,30(3):292-294.

(收稿日期：2015.10.08)

【中圖分類號】R285.5

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)01-0017-02

作者簡介：陳素慧(1982-)，女，講師。E-mail：chensuhui2005@163.com

基金項目：福建省衛生廳資助項目(2011-1-48)。