樺樹皮甲醇提取物的體外抗氧化活性研究

寇智斌　徐鳳玲　何林林　夏曉慧　林奇泗

徐州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，江蘇　徐州　221004

?

樺樹皮甲醇提取物的體外抗氧化活性研究

寇智斌徐鳳玲何林林夏曉慧林奇泗*

徐州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，江蘇徐州221004

【摘要】目的：測(cè)定樺樹皮甲醇提取物的體外抗氧化活性。方法：以2,6-二叔丁基對(duì)甲酚(BHT)和維生素C 為對(duì)照，測(cè)定樺樹皮甲醇提取物對(duì)1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)的清除率，并用鐵離子還原法(FRAP)分析了樺樹皮甲醇提取物的抗氧化活性。結(jié)果：樺樹皮甲醇提取物、2,6-二叔丁基對(duì)甲酚(BHT)和維生素C對(duì)DPPH的IC50分別為0.43、0.09和0.21mg/ml，F(xiàn)RAP值分別為1.54±0.012、4.54±0.028.和5.76±0.041mmol/g。結(jié)論：樺樹皮甲醇提取物對(duì)DPPH自由基有良好的清除作用，對(duì)鐵離子的還原性較強(qiáng)，具有良好的抗氧化活性。

【關(guān)鍵詞】樺樹皮；抗氧化； 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼法；鐵離子還原法

樺樹皮為樺樹科植物白樺(BetulaplatyphyllaSuk)的柔軟樹皮，具有清熱利濕、解毒的功效[1]。以往報(bào)道鮮見樺樹皮的抗氧化活性研究，因此研究樺樹皮甲醇提取物的抗氧化活性，為進(jìn)一步探討樺樹皮藥理作用奠定基礎(chǔ)[2-3]。天然藥物的抗氧化能力評(píng)價(jià)主要采用化學(xué)測(cè)定法和細(xì)胞測(cè)定兩類方法[4-5]。研究采用FRAP法和DPPH法分別對(duì)樺樹皮甲醇提取物進(jìn)行體外抗氧化活性檢測(cè)，為樺樹皮的抗氧化活性及相關(guān)應(yīng)用開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1儀器與試劑

1.1儀器UV-MODEL752型可見-紫外分光光度計(jì)(上海現(xiàn)科分光儀器有限公司)；SB-5200D超聲波清洗器； N-1100V-WD型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；四兩裝高速中藥粉碎機(jī)；PL203電子分析天平；OSB-2100水浴鍋。

1.2試劑樺樹皮藥材購(gòu)自大興安嶺，粉碎后過(guò)二號(hào)篩干燥備用；水為雙蒸水；甲醇、乙醇均為分析純，購(gòu)自科特試劑有限公司；TPTZ(2,4,6-反式2-吡啶基三嗪)、BHT(2,6-二叔丁基對(duì)甲酚)和VC等均購(gòu)自上海柏卡試劑有限公司。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1樺樹皮提取物的制備取干燥的樺樹皮5g，用甲醇200ml于索氏提器中水浴恒溫85℃提取60min，過(guò)濾，液濾濃縮干燥成浸膏。

2.2對(duì)DPPH自由基的清除作用將“2.1”項(xiàng)下樺樹皮提取物用乙醇溶解，并配制為一系列不同濃度提取物乙醇溶液。分別平行移取3.0ml的兩份。其中，一份與3.0ml 0.2mmol/L的DPPH乙醇溶液混合均勻，于暗處?kù)o置30min后取出，用紫外分光光度計(jì)于516nm處測(cè)定吸光度(A1)；另一份與3.0ml乙醇混合均勻，于暗處?kù)o置30min后取出，同法測(cè)定其吸光度(A2)。另取一份3.0ml 0.2mmol/l DPPH 溶液與3.0ml乙醇溶液同法操作，混合反應(yīng)30min后測(cè)定其吸光度(A3)。每樣測(cè)定3次取平均值。按公式計(jì)算清除率，以濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)，清除率為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。當(dāng)清除率達(dá)到50%時(shí)的供試品濃度即為半數(shù)抑制率(IC50)。同法以VC和BHT水溶液為陽(yáng)性對(duì)照。

DPPH 自由基清除率(%)=[1-(A1-A2)/A3]×100%

2.3FRAP值的測(cè)定

2.3.1TPTZ 溶液的配制取一定量的TPTZ，以40mmol/L鹽酸溶解配置成10mmol/L溶液，取5ml上述溶液，加入5ml 20mmol/L三氯化鐵和50ml 0.3mmol/L的醋酸緩沖液(pH3.6)混合即得。

2.3.2FeSO4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別取不同濃度的FeSO4溶液100μl，分別加入6.0ml“2.3.1”項(xiàng)下配制的TPTZ溶液，于37℃水浴加熱30min后，用紫外可見分光光度計(jì)于596nm處測(cè)定其吸光度。以FeSO4的質(zhì)量濃度(mmol/g)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程y=0.186x+0.012(r=0.9993)。

2.3.3樣品抗氧化能力的測(cè)定準(zhǔn)確吸取“2.2”項(xiàng)下樺樹皮乙醇溶液100μl，加入6.0ml“2.3.1”項(xiàng)下配制的TPTZ溶液，于37℃水浴加熱30min后，用紫外可見分光光度計(jì)于596nm處測(cè)定其吸光度。將吸光度代入“2.3.2”項(xiàng)下的回歸方程計(jì)算其FRAP值，F(xiàn)RAP值表示為每克該供試品消耗的Fe2+毫摩爾數(shù)(mmol/g)。

3結(jié)果與討論

3.1對(duì)DPPH自由基的清除作用以VC和BHT為對(duì)照，分別測(cè)出樺樹皮一系列不同濃度提取物吸光度A1，A2，A3，根據(jù)公式計(jì)算相應(yīng)的自由基清除率，以清除率為縱坐標(biāo)，以質(zhì)量濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)，結(jié)果見圖1。從圖1可看出，隨著樺樹皮提取物濃度的增加，自由基清除率也相應(yīng)增加，且增長(zhǎng)的趨勢(shì)由快變慢。從初期提取物濃度的增加，清除的DPPH自由基也越來(lái)越多，之后供試品溶液逐漸達(dá)到飽和狀態(tài)，清除率的增長(zhǎng)也逐漸趨于緩慢。

計(jì)算供試品及對(duì)照品的IC50，結(jié)果樺樹皮甲醇提取物(以甲醇提取物的濃度計(jì))、BHT和VC的IC50分別為0.43、0.09、0.21mg/ml。

3.2.2FRAP法測(cè)定以FeSO4為對(duì)照品確定還原能力的回歸方程為y=0.186x+0.012(r=0.9993)。將樺樹皮甲醇提取物(以甲醇提取物的濃度計(jì))、BHT和VC分別測(cè)定吸光度并代入回歸方程，測(cè)得三種溶液的FRAP值分別為1.54±0.012、4.54±0.028.、5.76±0.041mmol/g。

由上述實(shí)驗(yàn)可知，樺樹皮甲醇提取物對(duì)DPPH自由基有良好的清除作用，對(duì)鐵離子的還原性較強(qiáng)，具有良好的抗氧化活性。

參考文獻(xiàn)

[1]李敬芬,王旭,周淑晶．樺樹皮化學(xué)成分研究[J]．中藥材,1998,21(2 )：83-85.

[2]Qisi Lin, Ling Zhang, Dongzhi Yang. Contribution of Phenolics and Essential Oils to the Antioxidant and Antimicrobial Properties ofDisporopsisPernyi(Hua) Diels[J]. Journal of Medicinal Food, 2014,17(6):714-722.

[3]Qisi Lin, Miao Wang, Jinghua Li, et al.Studies of Antioxidant and Antimicrobial Activities forRecineckeaCarneaandTupistraChinensisfrom the Guizhou Province[J]. Journal of Medicinal Food,2014,17(2):236-243.

[4]Aruoma, O. I.. Methodological considerations for characterizing potential antioxidant actions of bioactive components in plant foods[J]. Mutation Research, Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis, 2003, (523-524): 9-20.

[5]楊錦華,李博,籍保平. 我國(guó)常見食用和藥用植物的抗氧化性研究[J].食品科學(xué), 2006,27(6):87-91.

(收稿日期：2015.09.22)

【中圖分類號(hào)】R285.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2016)01-0026-02

通信作者：林奇泗(1980-)，男，漢族，博士，副教授。 E-mail: qslin074@126.com

基金項(xiàng)目：徐州醫(yī)學(xué)院教育教學(xué)研究立項(xiàng)課題(Xjy201419)。