貴州矮馬和西南馬3種病毒性疫病的血清學(xué)分析

薛 艷， 鄧顯佑， 王嘉福， 冉雪琴， 田松軍， 魏小紅

(1.貴州大學(xué) 農(nóng)業(yè)生物工程研究院， 貴州 貴陽 550025； 2.貴州大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院， 貴州 貴陽 550025； 3.貴州大學(xué) 動物科學(xué)學(xué)院， 貴州 貴陽 550025； 4.貴州省紫云縣畜牧獸醫(yī)局， 貴州 紫云 550800)

貴州矮馬和西南馬3種病毒性疫病的血清學(xué)分析

薛 艷1，2， 鄧顯佑1，2， 王嘉福1，2， 冉雪琴3*， 田松軍4， 魏小紅4

(1.貴州大學(xué) 農(nóng)業(yè)生物工程研究院， 貴州 貴陽 550025； 2.貴州大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院， 貴州 貴陽 550025； 3.貴州大學(xué) 動物科學(xué)學(xué)院， 貴州 貴陽 550025； 4.貴州省紫云縣畜牧獸醫(yī)局， 貴州 紫云 550800)

為探明2012—2013年貴州省紫云縣馬匹大量死亡的病因，為其科學(xué)防治提供參考，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)方法對當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖的貴州矮馬、西南馬進(jìn)行馬傳染性貧血病毒(Equine Infectious Anemia virus，EIAV)、馬動脈炎病毒(Equine arteritis virus，EAV)和馬皰疹病毒I型(Equine herpesvirus type-1，EHV-1)3種病毒的抗體水平檢測，并與伊犁馬進(jìn)行比較。結(jié)果表明：3個馬群中均未檢測到EIAV抗體，EHV-1抗體陽性率達(dá)98.15%～100%；與伊犁馬相比，貴州矮馬和西南馬EAV抗體的陽性率較高，分別為48.15%和19.35%，并與2個馬群的血液理化指標(biāo)存在一定相關(guān)性。紫云縣貴州矮馬和西南馬存在較高比例的EAV感染，馬駒和虛弱馬匹感染EAV后死亡率較高，因此推測EAV可能是導(dǎo)致馬匹死亡的原因之一。

貴州矮馬； 西南馬； 伊犁馬； 馬傳染性貧血病毒； 馬動脈炎病毒； 馬皰疹病毒I型

馬傳染性貧血病(Equine Infectious Anemia，EIA)簡稱馬傳貧，由馬傳染性貧血病毒(Equine Infectious Anemia virus，EIAV)引起。EIAV為單股正鏈RNA病毒，隸屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科、慢病毒亞屬[1]。該病急性暴發(fā)時常引起大量的馬匹死亡[2]，主要臨床癥狀表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)燒、血小板減少、貧血、黃疸、心臟衰弱、體重持續(xù)下降和軀體末端水腫等[3]。馬屬動物感染EIAV將終生攜帶病毒，并具有傳染性。EIAV主要通過吸血昆蟲(特別是蚊子)或藥物注射傳播[4]。EIA的發(fā)生曾給世界養(yǎng)馬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，現(xiàn)在仍然是馬屬動物疾病的重點(diǎn)檢查項(xiàng)目。世界動物衛(wèi)生組織(Office International Des Epizooties，OIE)把EIA列為B類動物疫病，我國列其為二類動物疫病[5]。

馬皰疹病毒I型(Equine herpes virus type-1，EHV-1)普遍存在于全球馬屬動物中，是馬屬動物呼吸道疾病(馬鼻肺炎)、生殖系統(tǒng)疾病(流產(chǎn)、新生兒疾病)和神經(jīng)系統(tǒng)疾病(equine herpesvirus myeloencephalopathy，EHM)3大綜合征的主要病原體[6]。EHV-1主要經(jīng)呼吸道分泌物或被污染的用具傳播。大部分馬匹感染EHV-1后先進(jìn)入潛伏期，病毒在體內(nèi)被激活后，可傳染給其他馬屬動物[7]。臨床癥狀主要表現(xiàn)為頭部和上呼吸道黏膜卡他性炎癥、白細(xì)胞減少、后肢共濟(jì)失調(diào)、妊娠母馬易流產(chǎn)；新生馬駒發(fā)生肺炎或腦脊髓炎[8]。《國際動物衛(wèi)生法典》把馬鼻肺炎列入法定報告疾病名錄[9]。我國農(nóng)業(yè)部把EHV-1定為二類動物傳染病，國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫局列其為出入境馬屬動物必檢的疫病之一[8]。

馬病毒性動脈炎(Equine viral arteritis，EVA)又稱馬傳染性動脈炎，是危害馬屬動物的重大疾病之一。其病原體為馬動脈炎病毒(Equine arteritis virus，EAV)，屬于套式病毒目(Nidoviales)、動脈炎病毒科(Arteriviridae)、動脈炎病毒屬(Arterivirus)，為線性單股正鏈RNA病毒[10]。56℃ 30 min可被滅活，4℃可存活1個月，-20℃可存活數(shù)年[11]。EVA臨床癥狀成年馬表現(xiàn)為流感樣癥狀且四肢水腫、孕馬流產(chǎn)，小馬駒出現(xiàn)間質(zhì)性肺炎。主要通過呼吸系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)傳染，流產(chǎn)病馬的胎盤、胎液、胎兒也會成為傳染源，長期攜帶EAV的種馬可通過精子傳播[12]。世界動物衛(wèi)生組織把EVA列為B類傳染病，我國農(nóng)業(yè)部列其為禁止入境的二類動物傳染病，并作為馬屬動物出入境的法定檢疫項(xiàng)目[11]。

貴州矮馬主要分布于貴州省黔南、黔西南等偏遠(yuǎn)山區(qū)，是經(jīng)過長期人工培育和自然近交形成的珍貴遺傳資源，是目前全球僅存的少數(shù)天然矮馬品種之一[13]。當(dāng)前貴州矮馬的種群數(shù)量較少，而且缺乏計(jì)劃免疫。2012—2013年，紫云縣貴州矮馬保種場出現(xiàn)馬匹死亡，造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失，病死馬的臨床癥狀以呼吸道疾病為主，部分患馬出現(xiàn)四肢水腫，病因不明[14]。為此，筆者等采用ELISA方法對可能的病原(EIAV、EAV、EHV-1)進(jìn)行血漿抗體水平檢測，并與采自新疆的伊犁馬樣品進(jìn)行對比研究，以探明此次疫病的病因，為其科學(xué)防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 血液樣品采集

108份貴州矮馬和31份西南馬血液樣品采集于貴州省安順市紫云縣火花鄉(xiāng)，37份伊犁馬的血液樣品采集于新疆伊犁哈薩克自治州昭蘇縣種馬場，所有采樣馬匹均未注射相關(guān)疫苗。靜脈無菌采血，3 000 r/min離心30 min，收集血漿，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 主要試劑

馬傳染性貧血病毒ELISA抗體檢測試劑盒(EQUINE INFECTIOUS ANEMIA VIRUS ANTIBODY TEST KIT，ELISA)購于美國VMRD公司，產(chǎn)品批號為290-1；馬動脈炎病毒間接ELISA抗體檢測試劑盒(INGEZIM ARTERITIS 2.0 14.EA2.K.1)和馬皰疹病毒I型間接ELISA抗體檢測試劑盒(INGEZIM RINONEUMONITIS 14.HVE.K1)均購自西班牙INGENASA公司，產(chǎn)品編號分別為140714和050524。

1.3 EIAV、EHV-1和EAV的抗體檢測及理化指標(biāo)測定

EIAV、EHV-1和EAV抗體的檢測參照試劑盒說明書進(jìn)行，每個樣品重復(fù)3次。血液理化指標(biāo)的測定由貴陽市某醫(yī)院完成。采用SPSS v11.7中的相關(guān)分析方法對抗體水平與血液理化指標(biāo)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。

2 結(jié)果與分析

從表1看出，EIAV抗體所有樣品均為陰性；貴州矮馬、西南馬和伊犁馬的EHV-1抗體陽性率分別為98.15%、100%和100%；貴州矮馬、西南馬和伊犁馬的EAV抗體陽性率分別為48.15%、19.35%和10.81%。

表1 3個馬群EIAV、EHV-1和EAV的感染情況

表2 EAV抗體水平與貴州矮馬和西南馬血液理化指標(biāo)之間的相關(guān)系數(shù)

Table 2 Correlation coefficient between antibody level against EAV and blood physiological-biochemical indexes of Guizhou pony and Southwest horse

生理指標(biāo)Physiologicalindexes相關(guān)系數(shù)Correlationcoefficient生化指標(biāo)Biochemicalindexes相關(guān)系數(shù)Correlationcoefficient白細(xì)胞數(shù)WBC-0．09直接膽紅素DBIL0．39紅細(xì)胞數(shù)RBC-0．30谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT0．27血紅蛋白量HGB-0．31谷草轉(zhuǎn)氨酶AST-0．26血小板數(shù)PLT-0．52乳酸脫氫酶LDH-0．08淋巴細(xì)胞數(shù)LYM-0．41肌酸激酶CK0．10中間細(xì)胞數(shù)MON0．42α?羥丁酸脫氫酶α?HBDH-0．01中性細(xì)胞數(shù)GRA0．26γ?谷氨酰轉(zhuǎn)移酶γ?GT-0．08總膽紅素TBIL0．39

注：相關(guān)系數(shù)絕對值在0～0.2為不相關(guān)，在0.2～0.5為弱相關(guān)，-為負(fù)相關(guān)。

Note：There is no correlation, weak correlation and negative correlation when the absolute value of the correlation coefficient is 0～0.2, 0.2～0.5 and respectively.

由于貴州矮馬和西南馬均未檢測到EIAV抗體陽性樣品，且EHV-1抗體水平接近100%，變化很小，故只對EAV抗體水平與樣品血液理化指標(biāo)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。EAV抗體水平與血液的中性細(xì)胞數(shù)、中間細(xì)胞數(shù)、總膽紅素、直接膽紅素和谷丙轉(zhuǎn)氨酶呈弱正相關(guān)，與血液紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白量、淋巴細(xì)胞數(shù)和谷草轉(zhuǎn)氨酶呈弱負(fù)相關(guān)，與血小板數(shù)呈強(qiáng)負(fù)相關(guān)，與其余指標(biāo)不相關(guān)(表2)。

3 結(jié)論與討論

3.1 馬傳染性貧血病

測定結(jié)果表明，貴州矮馬和西南馬的EIAV抗體水平均為陰性，與安徽[15]、新疆[16]等地的檢測結(jié)果相同，也與2012年農(nóng)業(yè)部公布的數(shù)據(jù)[17]相符，表明貴州當(dāng)?shù)貨]有馬傳染性貧血病毒感染。

3.2 馬皰疹病毒I型

貴州矮馬、西南馬和伊犁馬的EHV-1抗體陽性率分別為98.15%、100%和100%，幾乎全部馬匹都受到EHV-1感染。馬鼻肺炎最早發(fā)現(xiàn)于美國，之后在40多個國家或地區(qū)都有發(fā)現(xiàn)，普遍發(fā)生于世界各地，陽性率一般都在30%以上，最高達(dá)90%[18]，與本測定結(jié)果相似。EHV-1是馬鼻肺炎的主要病原體之一，首先感染并破壞呼吸道上皮細(xì)胞，引發(fā)馬鼻肺炎癥狀。本病傳播蔓延迅速，通常可在3～4個月內(nèi)使80%～100%的馬匹感染[16]。2011—2012年新疆地區(qū)6個縣市的1 484匹馬中，最低感染率為1.99%，最高感染率為52.69%[19]；52匹新西蘭馬中EHV-1抗體陽性率為21.15%[18]。克羅地亞地區(qū)曾發(fā)生馬鼻肺炎疫情，發(fā)病率達(dá)100%，但死亡率僅為6.67%[20]。表明，EHV-1的感染率雖然較高，但是死亡率很低，而且感染后的馬匹痊愈后對EHV-1有一定的免疫力[21]。貴州矮馬、西南馬和伊犁馬的EHV-1抗體水平較高，可能與樣品采于春季有關(guān)，不是紫云地區(qū)貴州矮馬和西南馬大量死亡的原因之一。

3.3 馬病毒性動脈炎病

測定結(jié)果表明，貴州矮馬的EAV抗體陽性率最高，為48.15%；西南馬次之，為19.35%；伊犁馬最低，為10.81%。西南馬EAV抗體的陽性率與華南地區(qū)賽馬(26%)[22]較為接近，貴州矮馬和西南馬的EAV陽性率均明顯高于東北和西北地區(qū)役用馬的動脈炎陽性率(8%左右)[22]。貴州矮馬、西南馬和伊犁馬的陽性率均明顯低于2013年美國和加拿大地區(qū)(99.8%)[23]。EAV抗體水平與血液的中性細(xì)胞數(shù)、中間細(xì)胞數(shù)、總膽紅素、直接膽紅素和谷丙轉(zhuǎn)氨酶呈弱正相關(guān)，與血液紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白、血小板數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)和谷草轉(zhuǎn)氨酶呈負(fù)相關(guān)。因?yàn)椋《净蚣?xì)菌感染常導(dǎo)致中性細(xì)胞數(shù)、中間細(xì)胞數(shù)增加[24]。貴州矮馬和西南馬血液中淋巴細(xì)胞數(shù)量下降，可能與病毒侵害宿主的淋巴細(xì)胞有關(guān)，血小板數(shù)量減少可能與機(jī)體的免疫損傷有關(guān)。另外，貴州矮馬、西南馬2個馬群中病毒抗體呈陽性樣品的紅細(xì)胞數(shù)目和血紅蛋白濃度下降，提示病毒對紅細(xì)胞有損傷作用，溶血后過多的血紅蛋白在肝臟中降解，引起血漿中直接膽紅素增加，谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量增加則提示感染后馬匹的肝功能也受到了一定影響[21]。這些血液學(xué)變化和肝功能受損無疑為其他病原菌的入侵提供了更多的可能性。

貴州矮馬和西南馬群中EAV的感染率較高，造成機(jī)體的抵抗力下降，可能是繼發(fā)性感染的原因之一。另外，馬駒和虛弱馬匹感染EAV后的死亡率較高[25-26]。由此推測，馬病毒性動脈炎可能是紫云地區(qū)貴州矮馬和西南馬大量死亡的原因之一。

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(責(zé)任編輯： 馮 衛(wèi))

Serological Analysis of Three Viral Epidemic Diseases in Guizhou Pony and Southwest Horse

XUE Yan1，2， DENG Xianyou1，2， WANG Jiafu1，2， RAN Xueqin3*， TIAN Songjun4， WEI Xiaohong4

(1.InstituteofAgriculturalBioengineering,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025; 2.CollegeofLifeSciences,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025; 3.CollegeofAnimalScience,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025; 4.ZiyunBureauofanimalhusbandryandVeterinary,Ziyun,Guizhou550800,China)

The level of antibody against EIAV, EAV and EHV-1 in populations of Guizhou pony, Southwest horse and Yili Horse was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to explore the pathogenesis causing mass mortality of horses in Ziyun County, Guizhou during 2012～2013 and to provide a reference for scientific control. Results: EIAV antibody is not detected in three horse populations and the positive rate of EHV-1 antibody of three horse populations is up to 98.15%～100%. The positive rate of EAV antibody in Guizhou Pony and Southwest Horse is 48.15% and 19.35% respectively, higher than Yili Horse. There is a certain correlation between EAV antibody level and blood physiological-biochemical indexes in Guizhou Pony and Southwest Horse. The high proportion of EAV infection in Guizhou Pony and Southwest Horse in Ziyun County results in high mortality of colts and weak horses infected with EAV. In conclusion, EAV may be one of reasons to cause horse death.

Guizhou pony; Southwest horse; Yili horse; equine infectious anemia virus (EIAV); equine arteritis virus (EAV); equine herpes virus-1 (EHV-1)

2015-10-08； 2016-01-21修回

貴州省農(nóng)業(yè)攻關(guān)項(xiàng)目“貴州矮馬養(yǎng)殖關(guān)鍵技術(shù)研究與集成示范”[黔科合NY字(2012)3009]，“貴州矮馬品種資源保存與選育”[黔科合NY字(2009)3068]；貴州省農(nóng)業(yè)動植物育種專項(xiàng)“紫云矮馬的選育”(黔農(nóng)育專字2009-021號)；貴州省科技創(chuàng)新人才團(tuán)隊(duì)建設(shè)專項(xiàng)“貴州省動物遺傳育種與生物技術(shù)科技創(chuàng)新人才團(tuán)隊(duì)”(黔科合人才團(tuán)隊(duì)2009-4006)；貴州大學(xué)“本科教學(xué)工程”項(xiàng)目“基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)教學(xué)團(tuán)隊(duì)”(BKJX2012007)

薛 艷(1987-)，女，在讀碩士，研究方向：應(yīng)用微生物學(xué)。E-mail：992909131@qq.com

*通訊作者：冉雪琴(1967-)，女，教授，從事動物生理與分子生物學(xué)研究。E-mail：as.xqran@gzu.edu.cn

1001-3601(2016)03-0125-0109-04

S821

A