巨噬細胞炎性蛋白-1β與降鈣素原在肝硬化自發(fā)細菌性腹膜炎診斷中的作用

李曉波，蘇　楊，藺詠梅，李　婷，陳寶銀，辜依海，陳　苗

(1.西安交通大學附屬3201醫(yī)院微免科，陜西西安 723000；2.四川省人民醫(yī)院檢驗科，四川成都 610072；

3.西安交通大學附屬3201醫(yī)院傳染病科，陜西西安723000；4.西安交通大學附屬3201醫(yī)院檢驗科，

陜西西安 723000；5.西安交通大學附屬3201醫(yī)院消化內科，陜西西安 723000)

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·論著·

巨噬細胞炎性蛋白-1β與降鈣素原在肝硬化自發(fā)細菌性腹膜炎診斷中的作用

李曉波1，蘇楊2，藺詠梅3，李婷4，陳寶銀5，辜依海1，陳苗1

(1.西安交通大學附屬3201醫(yī)院微免科，陜西西安 723000；2.四川省人民醫(yī)院檢驗科，四川成都 610072；

3.西安交通大學附屬3201醫(yī)院傳染病科，陜西西安723000；4.西安交通大學附屬3201醫(yī)院檢驗科，

陜西西安 723000；5.西安交通大學附屬3201醫(yī)院消化內科，陜西西安 723000)

摘要:目的探討早期檢測巨噬細胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)和降鈣素原(PCT)在診斷肝硬化失代償期自發(fā)性細菌性腹膜炎(SBP)中的作用。方法2011年5月至2015年2月西安交通大學附屬3201醫(yī)院確診的肝硬化失代償期并發(fā)患者384例納入SBP組，另外377例無SBP，肝硬化失代償期伴腹水患者納入對照組。收集腹水與血清標本，分別采用電化學發(fā)光法檢測PCT，酶聯(lián)免疫法檢測MIP-1β。比較2項指標在血清和腹水檢測中的意義，同時通過受試者工作特征曲線分析2項指標的臨床應用價值。結果SBP組血清和腹水中PCT及MIP-1β水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);在SBP組中革蘭陰性菌感染患者與革蘭陽性菌感染患者血清PCT比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；SBP組中革蘭陰性菌感染患者腹水中MIP-1β濃度高于革蘭陽性菌感染患者，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論血清和腹水中MIP-1β和PCT檢測有助于鑒別診斷早期肝硬化失代償期SBP，血清中PCT檢測優(yōu)于MIP-1β指標，腹水中MIP-1β檢測優(yōu)于PCT指標。

關鍵詞:降鈣素原；巨噬細胞炎性蛋白-1β；自發(fā)性細菌性腹膜炎；肝硬化失代償期

自發(fā)性細菌性腹膜炎(SBP)是由于肝硬化失代償期腸壁淤血水腫，黏膜屏障作用削弱，從而導致腸腔內細菌增殖紊亂和細菌易位，同時由于機體免疫防御功能下降，以及單核-巨噬細胞系統(tǒng)作用減弱等原因,引起的腹膜炎性病變。肝硬化腹水患者中約10%的人會發(fā)生SBP[1]。SBP的確診目前主要依賴于腹水培養(yǎng)，但其方法受感染細菌種類和細菌數(shù)量影響較大，一般需要觀察5～7 d，此外SBP早期由于細菌滲透入腹水中的數(shù)量較少，大約只有50%的患者可培養(yǎng)出致病菌，因此腹水培養(yǎng)不適用于SBP早期診斷[2]。SBP早期診斷和合理使用抗菌藥物存在一定困難[3]。降鈣素原(PCT)是1993年 Assicot等[4]發(fā)現(xiàn)的一種穩(wěn)定的炎癥指標，但關于肝硬化失代償期合并SBP的報道較少。近期Lesinska等[5]研究發(fā)現(xiàn)巨噬細胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)在體內參與急性中性粒細胞介導的炎性反應，絕大部分是由巨噬細胞、樹突狀細胞、中性粒細胞和淋巴細胞分泌產生，有可能成為SBP新的診斷指標。本研究將主要分析血清與腹水中PCT和MIP-1β在早期診斷肝硬化失代償期自發(fā)性腹膜炎中的臨床意義，為臨床早期肝硬化失代償期SBP診斷提供可靠的體外監(jiān)測指標。

1資料與方法

1.1一般資料2011年5月至2015年2月西安交通大學附屬3201醫(yī)院感染內科和消化內科確診的肝硬化失代償期患者761例。肝硬化失代償期并發(fā)SBP患者384例納入SBP組，其中男247，女137例，平均(49.5±12.3)歲，符合2004年美國肝病學會制定的《肝硬化腹水臨床實踐指南》[6]診斷標準：(1)存在不同程度的發(fā)熱、寒戰(zhàn)、腹痛、腹瀉，其中任意1項癥狀均可;(2)查體結果顯示，腹部張力增高，程度不等的壓痛、反跳痛;(3)血常規(guī)檢查顯示白細胞(WBC)計數(shù)或中性粒細胞計數(shù)升高;(4)腹水常規(guī)檢查顯示W(wǎng)BC總數(shù)大于500×106/L和(或)多形核白細胞計數(shù)(PMN)≥250×106/L;(5) 腹水細菌培養(yǎng)陽性;(6)排除繼發(fā)性腹膜炎。以上(1)～(4)臨床表現(xiàn)及實驗室檢查結果中任意兩項或兩項以上陽性，且同時符合(5)、(6)診斷標準，并排除結核性、癌性腹水及腹腔臟器意外穿孔破裂導致的彌漫性腹膜炎[6]，即可診斷為肝硬化失代償期并發(fā)SBP。肝硬化失代償期伴腹水患者377例納入對照組，其中男238例，女139例，平均(48.9±12.8)歲，由經(jīng)驗豐富的臨床醫(yī)師確診的肝硬化患者，病情已發(fā)展至肝硬化失代償期，B超檢查已有腹水，且PMN<250×106/L或細菌培養(yǎng)陰性。2組患者性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究得到本院倫理委員會批準，操作程序符合赫爾辛基宣言，所有納入研究對象均同意參與本研究，并簽署知情同意書。

1.2方法采集靜脈血5 mL檢測血清PCT和MIP-1β水平，同時B超引導下無菌采集腹水標本，10 mL用于生化和細胞形態(tài)檢查；10 mL腹水-80 ℃凍存用于檢測腹水中PCT和MIP-1β濃度，腹水細菌培養(yǎng)應床旁無菌接種10 mL于需氧血培養(yǎng)瓶(BD Plus Aerobic/F Culture)，另取10 mL接種于厭氧血培養(yǎng)瓶(BD Anaerobic/F Culture)，放入自動血培養(yǎng)儀(BD BACTEC FX)培養(yǎng)5 d；如培養(yǎng)陽性，細菌鑒定使用自動細菌鑒定藥敏檢測儀器(BD Phoenix-100)，細菌鑒定卡根據(jù)細菌種類和革蘭染色不同，選擇使用PMIC/ID-55、NMIC/ID-4、SMIC/ID-2鑒定細菌種類和藥物敏感試驗。PCT檢測使用羅氏公司Cobas e411電化學發(fā)光法儀器，試劑盒使用羅氏公司原裝電化學發(fā)光法PCT檢測試劑盒(Elecsys BRAHMS PCT)。MIP-1β檢測使用Ray Biotech 公司生產的96孔MIP-1β酶聯(lián)檢測試劑盒，所有步驟嚴格按照試劑盒說明書操作。

2結果

2.12組患者各項肝功能及炎性指標比較SBP組C反應蛋白(CRP)、血液WBC、血清PCT、腹水PCT、血清MIP-1β、腹水WBC、腹水PMN、腹水MIP-1β與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。2組總膽紅素(TBIL)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、γ-谷氨酰轉移酶(GGT)各指標比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

±s)

±s)

2.2肝硬化失代償期患者腹水培養(yǎng)陽性菌群分布384例腹水細菌培養(yǎng)陽性標本菌群分析發(fā)現(xiàn)，肝硬化失代償期并發(fā)自發(fā)性腹膜炎患者中革蘭陰性菌感染271例(70.6%)，革蘭陽性菌感染113例(29.4%)。大腸埃希菌(ECO)分離率為48.2%，是自發(fā)性腹膜炎的主要致病菌。其次為凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)，分離率為18.6%。見表2。

表2　　肝硬化失代償期患者腹水培養(yǎng)陽性菌群分布[n(%)]

2.3SBP組中不同細菌培養(yǎng)結果患者PCT、MIP-1β水平比較SBP組中細菌培養(yǎng)結果為革蘭陽性菌感染患者血清PCT水平明顯低于革蘭陰性菌感染患者,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.023);革蘭陽性菌感染患者腹水PCT水平略低于革蘭陰性菌感染患者，但差異無統(tǒng)計學意義(P=0.153)。革蘭陽性菌感染患者血清MIP-1β水平略低于革蘭陰性菌感染患者，但差異無統(tǒng)計學意義(P=0.447);革蘭陽性菌感染患者腹水MIP-1β水平明顯低于革蘭陰性菌感染患者，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.003)。見表3。

表3　　SBP組中不同細菌培養(yǎng)結果患者PCT、

2.4SBP組患者PCT與MIP-1β指標ROC曲線分析經(jīng)ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，肝硬化失代償期SBP患者血清中PCT指標的AUC及95%CI明顯高于MIP-1β檢測指標；肝硬化失代償期SBP患者腹水中MIP-1β指標的AUC及95%CI明顯高于PCT。見表4。

表4　　SBP組患者血清和腹水中PCT與MIP-1β指標在

3討論

肝硬化失代償期患者由于肝臟受損導致自身免疫功能減退，加之腹腔滲透壓改變很容易發(fā)生細菌感染。臨床早期SBP患者臨床癥狀表現(xiàn)不典型，實驗檢測手段有限，給臨床早期診斷造成困擾，因此，臨床急需一些特異性強、靈敏度高的指標對早期肝硬化失代償期細菌感染進行診斷和臨床療效評價。

PCT是11號染色體降鈣素1基因(CALC-1)表達產生的一種激素前體蛋白，PCT由116個氨基酸組成，相對分子質量約為13×103，正常生理情況下主要由甲狀腺濾泡旁細胞合成，但在細菌感染時可誘導全身各組織細胞分泌PCT，它在血液中半衰期約為25～30 h，性狀穩(wěn)定易于自動化檢測[7]。Balci等[8]證實PCT指標在膿毒血癥診斷中靈敏度和特異度優(yōu)于白介素(IL)-2、IL-6、IL-8、CRP、腫瘤壞死因子α(TNF-α)等指標。2001年國際膿毒癥會議的膿毒癥診斷標準已經(jīng)把PCT作為診斷指標之一[9]。目前PCT檢測把Cut-off值0.5 ng/mL作為檢測感染性疾病診斷的臨界值[10]。本研究發(fā)現(xiàn)SBP組血清中PCT濃度(1.50±0.70) ng /mL高于腹水中PCT濃度(0.78±0.44) ng/mL，顯然血清中PCT靈敏度高于腹水檢測，與Wacker 等[11]在早期肝硬化合并SBP的研究結果一致。SBP組革蘭陽性菌與革蘭陰性菌比較發(fā)現(xiàn)，革蘭陰性菌感染患者血清PCT濃度(1.55±0.76) ng/mL高于革蘭陽性菌感染患者的(1.37±0.50)ng/mL，兩者比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但腹水中不同細菌培養(yǎng)結果患者的PCT水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與Charles等[12]報道結果一致。MIP-1β是由69個氨基酸組成的酸性蛋白質，它屬于趨化因子家族，具有趨化因子和促炎的功能。MIP-1β能促進CD8+T細胞與血管細胞黏附分子(VCAM-1)結合，參與急性中性粒細胞介導的炎性反應，細菌內毒素可刺激機體產生大量MIP-1β[5]。Lesinska等[5]在波蘭的研究發(fā)現(xiàn)SBP患者腹水中MIP-1β濃度明顯高于對照組，其靈敏度為80.0%，特異度為72.7%，Cut-off值為69.4 pg/mL。本研究發(fā)現(xiàn)SBP患者血清中MIP-1β水平為(133.53±25.37) pg/mL，腹水中MIP-1β水平為(94.65±9.91) pg/mL，略低于波蘭SBP患者濃度，可能與人種不同有關。本研究還發(fā)現(xiàn)，SBP組革蘭陽性菌患者腹水MIP-1β水平為(92.36±9.51)pg/mL 低于革蘭陰性菌感染患者(95.61±9.93) pg/mL,可能與內毒素刺激MIP-1β大量分泌有關。在PCT與MIP-1βROC曲線分析中發(fā)現(xiàn)血清標本中PCT的AUC為0.959,高于血清MIP-1β的0.839，說明在血清標本中PCT靈敏度和特異度優(yōu)于MIP-1β，在腹水中的兩項指標比較中發(fā)現(xiàn)腹水標本中PCT的AUC為0.728,低于腹水MIP-1β的0.859，說明在腹水標本中MIP-1β的靈敏度和特異度優(yōu)于PCT，另外MIP-1β陰陽性臨界值明顯低于PCT水平。

肝硬化失代償期自發(fā)性腹膜炎的早期診斷是臨床的難點，PCT作為炎癥指標已廣泛應用于膿毒血癥的診斷，MIP-1β是一種趨化因子，介導急性炎性反應，但在SBP診斷中，國內少有報道。本研究證明PCT與MIP-1β是SBP早期診斷的關鍵指標，對革蘭陰性菌感染患者診斷的靈敏度明顯高于革蘭陽性菌感染患者。并且初步證明在鑒別SBP患者時，腹水中MIP-1β指標優(yōu)于PCT指標，可能成為新的炎癥指標。

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Role of macrophage inflammatory protein-1β and proealcitonin in diagnosis of liver cirrhosis spontaneous bacterial peritonitis

LiXiaobo1,SuYang2,LinYongmei3,LiTing4,ChenBaoyin5,GuYihai1,ChenMiao1

(1.DepartmentofMicrobiologyandImmunology,Affiliated3201Hospital,Xi′anJiaotongUniversity,Xi′an,Shaanxi

723000,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,SichuanProvincialPeople′sHospital,Chengdu,Sichuan610072,China;

3.DepartmentofInfectiousDiseases,Affiliated3201Hospital,Xi′anJiaotongUniversity,Xi′an,Shaanxi

723000,China;4.DepartmentofClinicalLaboratory,Affiliated3201Hospital,Xi′anJiaotongUniversity,Xi′an,Shaanxi

723000,China;5.DepartmentofGastroenterology,Affiliated3201Hospital,

Xi′anJiaotongUniversity,Xi′an,Shaanxi723000,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the role of early detecting macrophage inflammatory protein-1β(MIP-1β) and proealcitonin(PCT) level for the diagnosis of spontaneous bacterial peritonitis(SBP) in the decompensated stage of liver cirrhosis.Methods384 cases of decompensated stage of liver cirrhosis complicating SBP collected in the Affiliated 3201 Hospital of Xi ′an Jiaotong University from May 2011 to February 2015 were included into the SBP group,while other 377 cases of decompensated stage of liver cirrhosis complicating ascites were included into the control group.The serum and ascites samples were collected for detecting PCT by using electrochemical luminescence method and MIP-1β by using the enzyme-linked immunoassay.The significance of these two indicators was compared between the serum detection and ascites detection.At the same time the clinical application value of these two indicators was analyzed by using the receiver operating characteristic curve.ResultsThe serum and ascites PCT and MIP-1β levels in the SBP group were significantly higher than those in the control group,the difference was statistically significant(P<0.05);the serum PCT level in the SBP group had statistical difference between the patients with Gram-negative bacteria infection and the patients with Gram positive bacteria infection(P<0.05);the ascites MIP-1β level in the patients with Gram-negative bacteria infection of the SBP group was higher than that with Gram positive bacteria infection,the difference was statistically significant(P<0.05).ConclusionThe serum and ascites PCT and MIP-1β detection can help to the differentiation diagnosis of early decompensated stage of liver cirrhosis complicating SBP;the serum PCT detection is superior to the MIP-1β detection,while ascites MIP-1β detection is superior to the PCT detection.

Key words:proealcitonin;macrophage inflammatory protein-1β;spontaneous bacterial peritonitis;decompensated stage of liver cirrhosis

(收稿日期：2015-10-10)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.03.008

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)03-0308-04

作者簡介：李曉波，男，主管檢驗師，主要從事分子微生物學及病原微生物學研究。