HPLC法同時(shí)測定小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液中的鹽酸麻黃堿與呋喃西林含量

湛　雯，景　霞，孫　芳，徐　進(jìn)

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京兒童醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇 南京　 210008)

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HPLC法同時(shí)測定小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液中的鹽酸麻黃堿與呋喃西林含量

湛雯，景霞，孫芳，徐進(jìn)

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京兒童醫(yī)院藥學(xué)部，江蘇 南京 210008)

摘要：目的建立同時(shí)測定小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液中鹽酸麻黃堿和呋喃西林的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法(HPLC)。色譜柱為Agilent Eclipse Plus-C18(4.6 mm× 250 mm, 5 μm)色譜柱；流動(dòng)相，乙腈：水相(30 mmol·L-1Na2HPO4，0.1 %三乙胺，用50 %磷酸調(diào)節(jié)pH = 3.0 ± 0.03)= 18∶82；檢測波長：210 nm，375 nm；柱溫：25 ℃；流速：0.9 mL·min-1；進(jìn)樣體積：20 μL。結(jié)果鹽酸麻黃堿測定質(zhì)量濃度在0.08～0.40 g·L-1范圍內(nèi)與其相應(yīng)峰面積積分值呈良好線性關(guān)系(r= 0.999 1)；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為0.58 %、0.67 %、0.82 %；平均回收率為100.56%，RSD為1.39 % (n= 9)。呋喃西林測定質(zhì)量濃度在0.003 2～0.024g·L-1范圍內(nèi)與其相應(yīng)峰面積積分值呈良好線性關(guān)系(r= 0.999 6)；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)RSD分別為0.51 %、1.32 %、0.74 %；平均回收率為100.68 %，RSD為1.14 % (n= 9)。結(jié)論該方法專屬性、重復(fù)性、準(zhǔn)確性高，可用于小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液中鹽酸麻黃堿和呋喃西林的含量測定。

關(guān)鍵詞:小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液；鹽酸麻黃堿；呋喃西林；高效液相色譜法；含量測定

小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液為我院自制制劑，成分為鹽酸麻黃堿、呋喃西林、氯化鈉、羥苯乙酯、純化水。具有消炎、收縮血管作用，臨床上用于鼻炎，鼻黏膜腫脹等疾病的治療。

滴鼻液中鹽酸麻黃堿和呋喃西林的處方量分別為5 g·L-1和0.2 g·L-1。原醫(yī)院制劑標(biāo)準(zhǔn)[1]中采用旋光法檢測鹽酸麻黃堿的含量，采用紫外分光光度法檢測呋喃西林的含量，但該兩種檢驗(yàn)方法專屬性不是很強(qiáng)。為更有效的對小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液進(jìn)行質(zhì)量控制，加強(qiáng)兒童用藥的安全性管理和精神藥品的使用管理[2]，本試驗(yàn)采用高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography ，HPLC)波長切換法[3-5]，同時(shí)對其主要成分鹽酸麻黃堿和呋喃西林進(jìn)行含量測定方法研究，節(jié)約分析時(shí)間，提高分析靈敏度，為檢測藥品成分提供一種簡單、準(zhǔn)確的方法。

1儀器與材料

Agilent 1260 Infinity 高效液相色譜儀(G1312B二元泵，G1316A柱溫箱，G4212B 二極管陣列檢測器，十萬分之一分析天平(瑞士Mettler Toledo，MS205DU)。

小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液為我院自制(批號(hào)：140723，141124，150104，150610)，鹽酸麻黃堿對照品購于中國食品藥品檢定研究院(批號(hào)：07149903)，呋喃西林對照品購于中國食品藥品檢定研究院(批號(hào)：101167-201001)，乙腈購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，為色譜純(批號(hào)：20141016)，水為超純水，其余試劑為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件Agilent Eclipse Plus-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)色譜柱；流動(dòng)相，乙腈∶水相(30 mmol·L-1Na2HPO4，0.1 %三乙胺，用50 %磷酸調(diào)節(jié)pH = 3.0 ± 0.03)= 18∶82；檢測波長：210 nm(0 ～ 7.5 min)，375 nm(7.5 ～ 12 min)；柱溫： 25 ℃；流速：0.9 mL·min-1；進(jìn)樣體積：20 μL。

2.2溶液制備

2.2.1對照品貯備液取鹽酸麻黃堿對照品約0.10 g，精密稱定，至50 mL容量瓶中，加超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

取呋喃西林對照品約0.016 g，精密稱定，至100 mL容量瓶中，加超純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2對照品溶液精密移取“2.2.1”項(xiàng)下鹽酸麻黃堿儲(chǔ)備液1.0 mL于10 mL量瓶中，以超純水稀釋并定容至刻度，搖勻，即得鹽酸麻黃堿對照品溶液。

精密移取“2.2.1”項(xiàng)下呋喃西林儲(chǔ)備液0.5 mL于10 mL量瓶中，以超純水稀釋并定容至刻度，搖勻，即得呋喃西林對照品溶液。

2.2.3供試品溶液取小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液一支，精密移取2.0 mL，以超純水稀釋并定容至50 mL，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.4陰性對照品溶液按小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液的處方工藝流程，分別制備不含鹽酸麻黃堿或不含呋喃西林的空白制劑，按“2.2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理，即得陰性對照品溶液。

2.3專屬性試驗(yàn)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別對對照品溶液，供試品溶液，陰性對照品溶液進(jìn)行色譜分析，記錄色譜圖(圖1)。由圖1中看出，供試品溶液中鹽酸麻黃堿和呋喃西林分別與對照品溶液中鹽酸麻黃堿和呋喃西林色譜峰保留時(shí)間一致，且與相鄰色譜峰分離度良好；陰性對照品溶液在鹽酸麻黃堿或呋喃西林色譜峰位置無吸收峰。說明該測定方法專屬性良好。

2.4線性關(guān)系考察精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對照品儲(chǔ)備溶液適量，以流動(dòng)性稀釋，配制成濃度分別為0.08，0.16，0.20，0.24，0.30，0.40 g·L-1的鹽酸麻黃堿溶液，及濃度分別為0.0032，0.0064，0.008，0.012，0.016，0.024 g·L-1的呋喃西林溶液。分別按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜峰面積。以各色譜峰面積積分值(Y)對樣品中鹽酸麻黃堿濃度或呋喃西林濃度(X， g·L-1)進(jìn)行線性回歸，得鹽酸麻黃堿的回歸方程：Y=42 591X+ 643.27，r= 0.9991；呋喃西林的線性回歸方程：Y=103 676X-44.41，r= 0.999 6。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿測試濃度在0.08～0.40 g·L-1范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好線性關(guān)系；呋喃西林測試濃度在0.003 2 ～ 0.024 g·L-1范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.5光譜鑒定分別吸取“2.2.2”、“2.2.3”項(xiàng)下的對照品溶液與供試品溶液進(jìn)行色譜分析，采用二極管陣列檢測器在210～ 400 nm波長范圍內(nèi)掃描，以對照品標(biāo)準(zhǔn)光譜圖作為參考，對樣品中鹽酸麻黃堿和呋喃西林色譜峰進(jìn)行光譜鑒定。結(jié)果顯示，在色譜峰相同保留時(shí)間處，樣品峰和對照品峰的吸收曲線相同，樣品中鹽酸麻黃堿和呋喃西林的色譜峰純度均符合分析要求。

2.6精密度試驗(yàn)取“2.2.2”項(xiàng)下對照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，鹽酸麻黃堿色譜峰面積的RSD為0.58 %，呋喃西林色譜峰面積的RSD為0.51 %，表明儀器精密度良好。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)取小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液一支(批號(hào)：150610)。按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。分別于室溫放置0、1、2、4、8、12 h后，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。記錄鹽酸麻黃堿及呋喃西林色譜峰面積并計(jì)算RSD，結(jié)果分別為0.67% 和1.32%，表明供試品溶液中鹽酸麻黃堿和呋喃西林在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8重復(fù)性試驗(yàn)取小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液一支(批號(hào)：150610)。按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定6份供試品溶液中鹽酸麻黃堿和呋喃西林的含量。結(jié)果鹽酸麻黃堿和呋喃西林含量的RSD分別為0.82%和0.74%，表明該方法的重復(fù)性良好。

圖1　HLPC圖

鹽酸麻黃堿注：(A)和呋喃西林(B)的對照品溶液色譜圖，供試品溶液色譜圖(C)，鹽酸麻黃堿陰性對照品溶液(D)和呋喃西林陰性對照品溶液(E)。

2.9回收率試驗(yàn)分別準(zhǔn)確稱取處方量80%、100%、120%的鹽酸麻黃堿及呋喃西林對照品，并以處方比例加入空白輔料，按“2.2.3”項(xiàng)下方法處理，作為供試品溶液；另取鹽酸麻黃堿及呋喃西林的對照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定鹽酸麻黃堿及呋喃西林的峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

2.10樣品含量測定取小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液(批號(hào)：140723，141124，150104，150610)，按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液。按2.1項(xiàng)下色譜條件，分別取對照品溶液和供試品溶液進(jìn)樣，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品中鹽酸麻黃堿和呋喃西林的含量。另列出使用原醫(yī)院制劑檢測方法——旋光法和紫外分光光度法分別測得的鹽酸麻黃堿和呋喃西林含量結(jié)果，見表2。

3討論

3.1色譜條件的確定 本試驗(yàn)中，選擇乙腈-磷酸鹽水溶液作為流動(dòng)相[6-8]，流動(dòng)相中加入適量三乙胺以改善色譜峰拖尾現(xiàn)象[9-11]。摸索了用乙腈和磷酸鹽水相不同比例作為流動(dòng)相，試驗(yàn)表明，當(dāng)乙腈∶磷酸鹽水相=18∶82時(shí)，鹽酸麻黃堿和呋喃西林的色譜峰分離度良好，出峰時(shí)間適中。鹽酸麻黃堿色譜峰理論塔板數(shù)大于8 000，呋喃西林色譜峰理論塔板數(shù)大于15 000。

表1　回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

表2　小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液中鹽酸麻黃堿和

3.2檢測波長的選擇用二極管陣列檢測器在210～400 nm波長范圍內(nèi)掃描鹽酸麻黃堿對照品溶液和呋喃西林對照品溶液，結(jié)果顯示鹽酸麻黃堿在210 nm波長處有末端最大吸收；呋喃西林在375 nm處吸收最強(qiáng)[12-14]。為保證兩種成分均有最大吸收，本試驗(yàn)采用HPLC波長切換法，于210 nm波長處檢測鹽酸麻黃堿，375 nm波長處檢測呋喃西林。

3.3樣品前處理 從小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液的配方上可以看出，鹽酸麻黃堿的含量為呋喃西林含量的25倍，需選擇合適的進(jìn)樣濃度。本試驗(yàn)中將樣品稀釋25倍測定，同時(shí)滿足鹽酸麻黃堿和呋喃西林的定量測定要求。

3.4方法的穩(wěn)定性本試驗(yàn)對方法的穩(wěn)定性進(jìn)行了考察，結(jié)果表明12 h內(nèi)供試品溶液中鹽酸麻黃堿和呋喃西林較穩(wěn)定。但隨著供試品放置時(shí)間的延長(24、48、72、96 h)，呋喃西林色譜峰面積的RSD呈漸增大趨勢，峰面積總體呈漸減小趨勢。結(jié)合文獻(xiàn)，呋喃西林易受光照、溫度和放置時(shí)間的影響而漸發(fā)生降解[15]。因此，為保證含量測定準(zhǔn)確性，建議供試品溶液現(xiàn)配現(xiàn)測。

本文使用二極管陣列檢測器，采用HPLC法，同時(shí)檢測了醫(yī)院制劑小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液中鹽酸麻黃堿和呋喃西林的含量，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。將其測得的鹽酸麻黃堿和呋喃西林含量同原醫(yī)院制劑檢測方法測得的鹽酸麻黃堿和呋喃西林含量進(jìn)行配對t檢驗(yàn)分析，結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

本試驗(yàn)運(yùn)用HPLC波長切換法檢測鹽酸麻黃堿和呋喃西林含量，靈敏度高，操作簡單易行，線性關(guān)系良好，重現(xiàn)性好，精密度高，避免了重復(fù)制備，并提高樣品檢測的專屬性，可用于小兒復(fù)方呋喃西林滴鼻液中鹽酸麻黃堿和呋喃西林含量的測定，為兒童用藥的安全性提供保障。

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Simultaneous determination of ephedrine hydrochloride and furacilin in

pediatric compound furacilin nasal drops by HPLC

ZHAN Wen, JING Xia, SUN Fang,et al

(PharmaceuticalDepartment,NanjingChildren’sHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity,

Nanjing210008,China)

Abstract:Objective To establish a method of quantitative determination of ephedrine hydrochloride and furacilin in Pediatric Compound Furacilin Nasal Drops.Methods The HPLC method was adopted with the Agilent Eclipse Plus-C18column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) at room temperature (25℃) and acetonitrile 0.03 mol·L-1phosphoric acid solution (pH adjusted to 3.0 ± 0.03)(18/82) as the mobile phase at the flow rate of 0.9 mL·min-1. The detection wavelength for ephedrine hydrochloride and furacilin was 210 nm and 375 nm, respectively, and the injection volume was 20 μL.ResultsThe good linear relationship for ephedrine hydrochloride was in the range of 0.08 - 0.40 g·L-1(r= 0.999 1), while this for furacilin was in the range of 0.003 2～0.024 g·L-1(r= 0.999 6). RSDs of ephedrine hydrochloride for precision, stability and reproducibility tests were 0.58%, 0.67% and 0.82%, respectively. The average recovery of ephedrine hydrochloride was 100.56% (RSD =1.39%,n= 9). RSDs of furacilin for precision, stability and reproducibility tests were 0.51%, 1.32% and 0.74%, respectively. The average recovery of furacilin was 100.68% (RSD = 1.14%,n= 9). Conclusions This established method was specific, accurate and reproducible for the quantitative determination of ephedrine hydrochloride and furacilin in Pediatric Compound Furacilin Nasal Drops.

Key words:pediatric compound furacilin nasal drops;ephedrine hydrochloride;furacilin;HPLC;quantitative determination

收稿日期：(2015-08-22，修回日期：2015-10-19)

通信作者：徐進(jìn)，男，副主任藥師，研究方向：中藥分析，E-mail:xujin＿cn@163.com

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.01.014