眼附屬器黏膜相關淋巴組織淋巴瘤形態及免疫表型研究

曾昌洪，郭　波，陳　俊，何為民，羅清禮

作者單位：(610041)中國四川省成都市，四川大學華西醫院眼科

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眼附屬器黏膜相關淋巴組織淋巴瘤形態及免疫表型研究

曾昌洪，郭波，陳俊，何為民，羅清禮

作者單位：(610041)中國四川省成都市，四川大學華西醫院眼科

Study on morphology and immune phenotypic characteristics of lymphoma from the ocular adnexal mucosa-associated lymphoid tissue

Chang-Hong Zeng，Bo Guo, Jun Chen, Wei-Min He, Qing-Li Luo

Citation:Zeng CH, Guo B, Chen J,etal. Study on morphology and immune phenotypic characteristics of lymphoma from the ocular adnexal mucosa-associated lymphoid tissue.GuojiYankeZazhi(IntEyeSci) 2016;16(2):389-391

摘要

目的：探討眼附屬器黏膜相關淋巴組織淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue，MALT)形態及免疫表型特點。

方法：采用光鏡觀察和免疫組織化學分析MALT的形態學、細胞學、免疫表型的特點。

結果：眼附屬器MALT患者29例33眼中，Ⅰ期23例24眼，Ⅱ期6例9眼。29例33眼均以小淋巴細胞樣瘤細胞為主，瘤細胞彌漫分布，體積小，大小較均一，細胞核略呈圓形，染色深，細胞質少，染色淡；29例CD20及CD79a均(+)，CD5(+)2例，CD43(+)3例；所有患者CD45RO、CyclinD1、CD10、CD23均為(-)。

結論：眼附屬器MALT主要以小淋巴細胞樣瘤細胞浸潤為主，散在分布中心細胞樣細胞及單核樣細胞，部分可見漿細胞及Russel、Dutcher小體。眼附屬器MALT典型的免疫表型CD20(+)、CD10(-)、CD5(-)、CD23(-)、CyclinD1(-)，少數患者CD5(+)，CD5(+)可能是眼附屬器MALT預后不好的一個信號。

關鍵詞：眼附屬器；黏膜相關淋巴組織淋巴瘤；免疫組織化學；形態學

引用：曾昌洪，郭波，陳俊，等.眼附屬器黏膜相關淋巴組織淋巴瘤形態及免疫表型研究.國際眼科雜志2016;16(2):389-391

0 引言

結外邊緣區黏膜相關淋巴組織淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue，MALT)是起源于邊緣區小B細胞淋巴瘤，在眼附屬器淋巴瘤中發生率占第一，最高可達90%[1-3]。MALT的臨床特點、形態學、細胞學及免疫表型特點隨部位不同而有所不同，雖然有一系列研究描述眼附屬器MALT的這些特點，但對于眼附屬器具體部位的研究還不多。我們采用光鏡檢查及免疫組織化學方法，具體分析了眼附屬器(結膜、淚腺、眼眶)各部位形態學、細胞學及免疫表型的特點。

1 對象和方法

1.1對象收集四川大學華西醫院眼科2005-01-01/2009-12-31診斷的眼附屬器MALT患者29例33眼的石蠟標本，所有患者均按2001年WHO的診斷標準，診斷為MALT。

1.2方法

1.2.1免疫組織化學試劑CD79a和Bcl-2(DAKO公司，丹麥)，Bcl-6、CD10、CD20、CD23、CD43、CD45RO(北京中杉金橋生物技術有限公司)，CD5、Cyclin D1、Ig-κ、Ig-λ、Ki-67(福州邁新生物技術開發有限公司)。

圖1眼附屬器MALT的形態學特點A：小淋巴細胞樣瘤細胞彌漫分布，體積小，大小較均一，核小而圓、染色深，胞漿少細胞邊界不清(HE×400)；B：漿細胞及胞漿內包涵體(Russel body)(HE×400)；C：病變內出現不典型的淋巴濾泡，外套和發生中心分界不明顯(HE×400)。

圖2免疫組化示細胞膜彌漫棕黃色著色(CD20+)(SP×400)。

圖3免疫組化示細胞膜彌漫棕黃色著色(CD79a+)(SP×400)。

圖4免疫組化示細胞膜彌漫棕黃色著色(CD5+)(SP×400)。

圖5免疫組化示細胞膜彌漫棕黃色著色(CD43+)(SP×400)。

圖6免疫組化示胞漿彌漫著色(λ陽性)(SP×400)。

圖7免疫組化示胞漿彌漫著色(κ陽性)(SP×400)。

圖8免疫組化示細胞漿彌漫棕黃色著色(Bcl-2+)(SP×400)。

圖9免疫組化示細胞核著色(Ki-67+)(SP×400)。

1.2.2形態學診斷石蠟包埋組織作4μm厚的組織切片，HE染色，光鏡觀察。

1.2.3免疫組織化學方法采用鏈霉卵白素法(streptavidin，SP)進行免疫組織化學染色，DAB顯色，每種標記均用PBS代替一抗做陰性對照。染色結果判斷：腫瘤細胞陽性判斷標準為：當看到能與背景區分的腫瘤細胞的胞核、胞膜或胞漿著棕黃色即可判定為陽性[4]，其中Bcl-2、κ、λ以細胞漿呈彌漫棕黃色為陽性，CyclinD1、Bcl-6、Ki-67以細胞核呈棕黃色為陽性， CD20、CD10、CD5、CD23、CD43、CD45RO、CD79a以細胞膜呈棕黃色為陽性。 Ki-67陽性細胞指數(%)：隨機選擇5個高倍視野，每個高倍視野計數100個腫瘤細胞。陽性細胞<5%為(-)，5%～20%為(+)，21%～50%為(++)，51%～70%為(+++)，>70%為(++++)。

2 結果

2.1眼附屬器MALT的臨床特點MALT患者29例33眼中，男13例15眼，女16例18眼，年齡32~86(平均41.3±5.4)歲；其中結膜7例8眼，淚腺8例10眼，眼眶14例15眼；有2例3眼伴有耳前淋巴結腫大，1例1眼有橋本甲狀腺炎，2例3眼伴干燥綜合癥；左眼12例，右眼13例，雙眼4例，其它部位未見波及；復發6例8眼。按照Ann Arbor 分期，Ⅰ期23例24眼，Ⅱ期6例9眼。

2.2眼附屬器MALT的形態學特點從細胞形態上看，MALT具有以下特點：29例33眼均以小淋巴細胞樣瘤細胞為主，瘤細胞彌漫分布，體積小，大小較均一，細胞核略呈圓形，染色深，細胞質少，染色淡(圖1A)；14例16眼可見散在的生發中心細胞樣細胞，轉化的母細胞，10例11眼可見單核樣B細胞；有4例4眼(結膜2例2眼，淚腺2例2眼，眼眶 0例)可見腫瘤細胞侵犯鄰近腺上皮，形成淋巴上皮病損；11例12眼(結膜2例2眼，淚腺3例3眼，眼眶6例7眼)可見漿細胞及胞漿內包涵體(Russel body)或核內包涵體(Dutcher小體)(圖1B)；9例10眼(結膜1例1眼，淚腺1例1眼，眼眶7例8眼)有反應性淋巴濾泡(圖1C)。

2.3眼附屬器MALT的免疫組織化學結果MALT患者29例33眼中，29例33眼CD20及CD79a均(+)(圖2，3)，CD5(+)2例3眼(7%)(圖4)，CD43(+)3例3眼(10%)(圖5)；所有患者CD45RO、CyclinD1、CD10、CD23均為(-)；28例32眼顯示有輕度限制性表達，其中κ陽性22例25眼 (76%)，λ陽性6例8眼(21%)(圖6，7)；Bcl-2陽性20 例21眼(69%)(圖8)，Bcl-6陽性 0例；Ki-67表達21例22眼為(-)，2例3眼為(+)，6例8眼為(++)(圖9)。

3 討論

MALT為低度惡性的小B細胞淋巴瘤，是眼附屬器淋巴瘤中最常見的類型，可高達90%[1-3]。MALT的診斷主要靠臨床特征并通過細胞形態學特點及免疫組織化學排除其它類型的淋巴瘤。它的臨床進程惰性，多位于局部，極少發生系統性播散；許多患者有自身免疫性疾病或感染性疾病史[5]。

MALT的形態學特點：邊緣區細胞(中心細胞樣細胞)浸潤，可伴有小淋巴樣細胞、漿細胞、淋巴漿細胞、單核樣B細胞或中心母細胞樣細胞浸潤；伴或不伴有Dutcher小體的漿細胞分化；瘤細胞浸潤上皮或腺體，形成淋巴上皮病變；腫瘤細胞侵犯生發中心，將生發中心取代，形成腫瘤性結節[5-6]。本組29例33眼患者，符合上述細胞學特點。但在不同解剖部位的MALT，其形態學也有一定差異。例如，唾液腺MALT中單核樣細胞出現較頻繁；淋巴上皮樣病損在甲狀腺及胃MALT中多見，而在皮膚病變中少見[7-8]。

在本組患者主要以小淋巴細胞樣瘤細胞彌漫分布，可見積聚的生發中心細胞樣細胞，散在轉化的母細胞及單核樣細胞。偶爾可見漿細胞及Russel、Dutcher小體。淋巴上皮病損出現在淚腺MALT 25%(2/8)及結膜29%(2/7)，眼部其它部位未見；淋巴上皮病損出現率低，可能當腺體被廣泛累及破壞時，不易識別淋巴上皮病損，且未行角蛋白檢查，無法標示淋巴上皮病損的殘跡。這些形態學特點的不同也可能與不同部位接受的抗原刺激不同有關。9例10眼可見散在的反應性淋巴濾泡，其中7例8眼位于眼眶(7/9)。反應性淋巴濾泡是診斷MALT的一個佐證。對于眼附屬器MALT患者的部位而言，在正常生理上并不具備淋巴組織，而是在微生物或自身免疫性疾病引起的慢性炎癥刺激下，形成獲得性黏膜相關淋巴組織，繼而邊緣區細胞在炎性刺激下逐漸增生，出現反應性淋巴濾泡，并在環境因素和基因突變作用下，進而發展成MALT。

在免疫組織化學上，MALT表達所有的B細胞抗原，常見的免疫表型是CD20(+)、CD10(-)、CD5(-)、CD23(-)、CyclinD1(-)，并且存在免疫球蛋白或Bcl-2基因重排。在本組患者中，所有患者均表達全B細胞抗原，如CD20(+)、CD79a(+)， 所有患者CD10(-)、CyclinD1(-)、CD23(-)，基本符合MALT常見的免疫表型：CD20(+)、CD10(-)、CD5(-)、CD23(-)、CyclinD1(-)；但有2例3眼表達CD5(+)例外，3例3眼表達CD43(+)。

CD43是T淋巴細胞相關抗原，定位于細胞膜。CD43(+)在其他部位MALT表達有一些報道，Quintana等[9]在唾液腺MALT中CD43(+)檢出率是70%(23/33)，其具體原因不清楚，可能與不同部位或不同的抗原刺激有關。

CD5是T淋巴細胞相關抗原，定位于細胞膜，一般情況下在MALT中檢測為陰性。CD5(+)在MALT中陽性的機制還不清楚，但有散在的病例報道，CD5(+)的MALT多伴有病灶彌散分布或復發，且都波及到了眼部。Jonathan等報道了1例CD5(+)CD43(+)的眼附屬器MALT伴有胃部MALT的復發[10]；Ferry等[11]報道了3例CD5(+)MALT伴有彌散病灶的分布及復發。Wenzel等[12]報道了1例CD5(+)結膜及咽部MALT復發的病例。在本組病例中，有2例3眼CD5(+)陽性，且2例3眼都為復發患者(2/6)。提示CD5(+)可作為判斷眼附屬器MALT預后的一個候選指標。CD5(+)可能是眼附屬器MALT預后不良的信號。

Ki67是增殖分數，與腫瘤細胞的增殖活性有關，在本組患者中，有6例8眼Ki67為(++)，其余21例22眼為(-)，2例3眼為(+)，這符合眼附屬器MALT是一種惰性腫瘤的特點。

參考文獻

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11 Ferry JA,Yang WI, Zukerberg LR,etal. CD5+ extranodal marginal zone B-cell (MALT) lymphoma. A low grade neoplasm with a propensity for bone marrow involvement and relapse.AmJClinPathol1996;105(1):31-37

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·臨床報告·

Department of Ophthalmology, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China

Correspondence to:Chang-Hong Zeng. Department of Ophthalmology, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China. changhong_zeng@163.com

Received：2015-10-28Accepted：2016-01-15

Abstract

?AIM:To explore the morphology and immune phenotypic characteristics of lymphoma from ocular adnexal mucosa-associated lymphoid tissue (OAML).

?METHODS: The characteristics of morphology, cytology and immune phenotype of the lymphoma were observed by light microscope and immunohistochemistry.

?RESULTS: Twenty-nine cases (33 eyes) with lymphoma including 23 cases (24 eyes) in phase Ⅰ and 6 cases (9 eyes) in phase Ⅱ. Small lymphocytes tumor cells were observed and took predominant place in all cases. The tumor cells, almost had the same size, diffused in the tissues, and the nuclei was almost round with dyed deep, while the cytoplasm was less with dyed pale. There were 29 cases with CD20 (+) and CD79a (+), 2 cases with CD5 (+) and 3 cases with CD43 (+);CD45RO, CyclinD1, CD10 and CD23 were found negative in all cases.

?CONCLUSION: Infiltration of small lymphocytes-like tumor cells is main type that we found in the lymphoma from MALT, with a few center-cell-like cells and mononuclear cells scattered. Plasma cells and Russell, Dutcher bodies are seen in some cases. The typical immune phenotype of lymphoma from OAML is CD20 (+), CD10 (-), CD5 (-),CD23 (-) and CyclinD1 (-). Some cases have CD5 (+) expression, which may be a signal of bad outcomes of OAML.

KEYWORDS:?ocular adnexal;mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma；immunohistochemistry;morphology

DOI:10.3980/j.issn.1672-5123.2016.2.54

收稿日期：2015-10-28 修回日期： 2016-01-15

通訊作者：曾昌洪.changhongzeng@163.com

作者簡介：曾昌洪，醫學博士，副主任醫師，研究方向：眼眶病。